Cultivo de células de tejidos animales

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(1)* CIJLTTVODE CELIJLASDE TE.JIDOSANII'AI,ES. Arnold I.. Zea**. INIRODI'CCION. celulares e¡Epezarona trabaiarse a comienzos de1 siLos cultivos clarav l-os pioneros de diii"- ¡áir" ?i-a¡o 1902 siendó Harrtson v momentosfué sínplernente traen esos etlos ;hos cuLtivos; 1a idea de y ver cual era e1 conporcelulares tar de observar in vitro cultivos tipo_de condi cualquier de libres animales tamiento de esas celulas ción fuera ale los sieter¡as en los cuales estaban involucrados' lejos de ellos estaba imaginar el gran avance que estos cuttívos celulares i-ban a tener posteriornente ! sobre todo el área de la virologla'cuanáá-ir-¿pá." de oro de la virótogía que empezó hacia el año 60 loscultivos c;lulares fueron muy impoitanies Para desarrollar una serie de en beneficio principalmente de la humanidad' En el caso i".nofogf"t principalnente para el caso rte ia Uñiversitlad del Valie, se-utilizan de diagn6stico de enfermedades virales. se define nrry amplian'ente y se puede a El, térDilro cultivo celular, e1 cu1 clarar en Cres conceptos fundanentales: el cultivo celular' tivo de Eejidos y el culÉivo de órganos. En e1 caso de los 2 prineros se refiere a Porciones de un órgano mediante un proceso enzique se toman a parti; de un 6rgano inicial'monocapa celularl -En .eL J¿ti.. á" ái"erleaciótt para obtener una con el objetivo un animal de el órgaoo utiliza del t"t"éto-". caso dentro del siscon sus propiedadei como cuando estaba -i;" de conservarlo -.enzi.uáticamente. culrivos de árgár,o. no son 6ísgregadoÉ ;;: l,os sistenas de citocultivos nera de1 cultivo: 1. 2. 3.. pueden tanbién clasificarse. por la na -. Explantes Suspensiones Monocapa. E-GntrlE¡¿i6-Facultad. rle Medicina.. Universidad del Valle. ** Bió1ogo M.Sc. Universidad del Valle, A'A' 25360 - Cali. 237.

(2) ,l 1l Dentro de la Línea de cultivos celulares o de cultivos de tejidos cono se:les 11amaexisten Eres tipos de variantes: Consiste en extraer un 6rgaoo de algún aninal 1.- Cultivo prinario' cono un iinón. et cual se somete a un proceso de disgregación celular, usantlo para ello enzinas especlficas generalrlente de tiPo proteolítico y aon primarios porque se hacen a partir de un órgano. Estos cultivos se pueden tener cuando ya la monocapacelular se ha fornado debaJo. Són cultivos que tienenrluna gran variedad de ceLulas tales cortro epiteliales, basales, fibroblastos' etc. En virologla 1os cultivos prinarios tienen una gran ventaia sobre enbrionarios el resto. Prinero el hecho de que son geóerálmente que tÍenen ésla-integridad principalroenté ventajas ofrece ciertas aiscoEPletamente está embri6n el po.que Jnpneátanente tas c6lu1as, que a injurias ven exPuestae se no materno' latlo de todo é1 sistema sacomPLetanente son que células 1as decir es reclben de1 exterior, que en agentes de tipo níngún con en contacto nas pues no han estado etc ' ógÍca norfol ' puedan configuración su canbiar de¿erninado momento Adenásson cé]ulas támbién altamente suscePtibres' por ro que ra Pode áislar agentes en este tipo de cultivos primarios es "iUifia.¿ bastante grande, .e..á d" un 80 a 902 con respecto a otro tiPo de líneas celulares . El cultivo primario sin embargo es un cultivo-que no se puede tener a perpetuid;d, es decir, nosee pueden hacer más de dos subcultivos a puitii a"r cuitivo primario, porque las células se dañan y por ello iro hay 1a posibilidád de que é11as crezcar¡ nuevamentea partir de una prinonocapa celular. El otro tipo ale línea celular es 1o que se l1a¡aa llneas contfnuas' Estas tíneás contínuas se dividen en dos: heteroploides y diplóídes. En el caso de Heteroploides generalmente las llneas contlnuas eon iin""" qu. se han obienido a partir de órganbs animales o general ,nente de tunores malignos hunanos. Estas llneas contlnuas tienen 1a posibilidad de ser subcultivadas indefinida¡nent,e. Estas células no se acaban, sienpre y cuando Be tengan clertas caracEerlsticas de cultivo y se tenga; toáos los requerimientos nutrj'cionales necesarios Una situación de la que no para que estas llneas puedan coniinuar. cuando lenenos algún- tiacaba que se la Iínea puéa. escapar es cle La "" en el laboratorlo' frecuente nuy es cual 1o po á.-"o"tátinación, es por bacterias o anbiente de1 por Autróficos hongos contaminación la asepj-ntroducción cuenta que en Eener hay conún. Para hácer unÁ. .)"f¡. II. I.

(3) sia con la cual se trabajan los cílttivos celulares de suma iroportanPor dar un ejernplo e1 resultacia pata obtener el resultado final. predo final sería tratar tle aislar cualqüier agente viral que esté se contínuas 1íneas esas sente en un humano; por medio tle celulares identificación' e para su estudúo pueden propagar indeiinidanente Diploides: se habla de que es una línea contínua porque podemos hapero cocer una serj-e de subculEivos a partir de un primer cultivo; céluLas tienden Estas úo su nolDbre lo indica son células diptóides. a envejecer con determinado número de pases, son células somáticas célula detr organÍsmo humano que con tsl tienpo va encono cualquier no Se ha visto que a estas líneas celulares diplóldes vejeciendó. mo en eI o cuarenta subeultívos, se 1es puede hacer nás de treinta 30 a1 subculti nento e; e1 cual se va llegando hacia el subcultiso vo 40, 1as céIulas empiezai a degenerarse y a perder sus caracterísde Cuando se habla débido a1 envejecimiento. ticas rnorfológicas, c u a l h a c e d e s e e l c u a l c l o n e s p e ó í f i c o , c e p a = e a u n r é f i e r e una de riñón humano o de cualquier iejido' como por ejenplo un cultivo quier otio aninal, allí hay una diversialad de células y si se quiere para crecer derernínado típo de aSente que solo óbtener fibroplastos y a éshacer una cepa de esros fibroblastos a l l í . " ' n . " e = t . i o crece ha eeleccionaclon se un a1 hacer 1lama clon específico, se Ie un to do un solo tipo de célula entre una gran variedad cono Ia que se enen un primo cultÍvo. cuentra inicialmente animales, hay una gran variedad de Con respecto a líneas celulares del llneas áe las cuales la célu1a denoliinada G-2 y que proviene se cuando observan se las cuales carcinona hunano de la faringe, GeneralmenPapanicolao. con Hematóxilina o con hacen coloraciones te 1o que se resalta es el núcleo y se bbÉerva que son células qge tienen canbios en l-a croriatina bastante pronunciados. la célu1a Hela ranbién es una célula hunana' provéniente del Carcilas células MRC-5 dentro de las cuales hay nona hurnano del Cervis. son ñ$roblasotra variedad llamada la I{-38 son células diploides' s e verán más tos diploides humanos del pulmón, cuyas aplicacíooes prima que es un cultivo Eo e1 riñón humano enbrionario adelante. Monorrecios, que son de riñón rio-se tienen las cé1ulas I-[-C-N-K-2 rila NBCK que es un riñón de perro' las células Bero que son del Ia III{K-21 que proYienen de Hamsters re ñón de un Mono de1 Africa, s9n cién nacidos y Epidermis de piel y 1os Macrofagos' 1os cuales tanbién que aunque no pegan en una superficie células indivídu;les celular asl no formen una monocapa pese consideran como un cultivo como ro desempeñan funciones de inport.ancia tanto en e1 Diagnóstico de una seril de procesos de investígacíón. en 1a reálización. 239.

(4) morfol6gica En resu¡nencada línea celular ti-ene una caracterlstica puede 1a experiencia se llegar a dedefinida y dlferente, só1o con células Bero En caso de el terhinar tuál es entre muchas de ellas. cual no sucede se observa en su configuración celular su núcleo, 1o con otros clonee. En é1 caso de célu1as de pulnón, éstae¡ son alar gadas caracterlstica de las células fibroblásticas. En células de Epidermis hunaoos, se trata de replicar epldermis humana in vitro cán fines cl{nicos nuy especlflcos para poaterfor¡nente reemplazar la piel de personas quemadascon este tipo de teji dos. llay cultlvos de epidernis donde hay nelanoéitos' son cultivoe que aL injertarae en una persona Ie va a dar La nigma tonalidad de eüc. ptel que habfa perdído por quenadurag o Por el vftiligo'. II.. CEU'I,AR8S PARACTILTIVOS EQÜIPOsY MATERIAI,ES. Para trabajar en cultivos celulares se necesita un equipo de laboratorio no necesarianente sofisticado pero sl bastante completo,un equipo de laborbtorio que asegure co¡¡o producto flnal una buena nonócapa celular sin inportar la línea celular que se tenga para 11egar á aislar 1os agentes. Condición fundamental para eI aislanienio viral es que haya una buena monocapacelular, si no.'Ie hay no se puede aislar el agente. Los virus no se ven sino e1 efecto que eEAfortunadamente con tos producen sobre las Eonocapas celulares. y es que cada virus gran ventaja 1os virus de ofígen humanohay una ¿ftopÁtico cotloexpresar su efecto tiene una manera muy tlpica de gran variedad de 1ltener una El hecho ale retá posterÍorme;te. ". neas celulares asegura resul-tados cim¡@en eI caso de que-si ae..tÍerrpe ne X virus y se ponen en X células, de pronto puede que éstos guen[ a111, porque van a haber 2 comPonentes: la susceptibilidad áe 1a célula- o ios receptores que tengan ambos para que se Pueda Por eato se tieadosándose los virus a la nembranacelÚlar. fijar, pues comprobadoque se ha ne-una gran varie<tad de líneas celulares, cédiversos virus tienen cierta apetencia por deter[inado tipo'de de produce el slndrone Iulas, por ejetplo el virus citonegálico que es inclusión citonegálica en niños durante la etapa del- embarazo' qu" .a.E. só1o en fibroblastos y no va a crecer en ningún ritr" "r llneas NC-5 o hemootro tipo de cé1u1as, entonces se deben utllízar efobil 3b para aislar virus citoúegálicos; por ejemplo el virus de ia polio,-es un virus que debido a sus caracterlsticas tan virulentas y citoÉidas que tiene' es un vírus que ataca cualquier cé1u1ao tipo tte línea óelu1ar. Parece ser hasEa ahora que la célula G-2 .uy sn"c"ptible a ser atacada por el' virus polio, por tro que es "s llnea celular que generalmente se utiliza cuando se va a detecla tar anticuerpos de suáro humano. Si el vi'rus es neutralizado Por 2+V.

(5) el anticuerpo al agregar esa nezcla al cultivo celular entonces oo por Io que se dice que allí hay anticuerpos' hay efecto citopático, e s e anticuerPo no neutralizó el virus, el vÍrus Si por e1 contrario €oy p r o d u cir posteriornente un efecto ciüopático' va a queáa libre p r u e b as d e p a r a e s t e t i P o q u e s e t r t i l i z a n v i r u s mo las cantÍdades dá q u e a l t a n e n t e s e a n 1 í n e a s d e r e q u Í e r e son tan pequeñas entonces se la célula G-2. por 1o cual se utiliza susceptibles,. sincitial , que es un virus que En el caso del virus respiratorio de Presentar efecto citopático ( formandoti.nu u.r" forma muy iípiia Cuando eI a tra.rés de las llarnadas proteínas de fusión' sinsitios) p r o t e í n a s d e fusión virus está infectando cé1u1a tras céiula, esas y con tantos grandes inducen 1a forr:ación dé unas cé1ulas bastante núcleos como todos 1os componenLes del citoplasma' de El vlrus del sarampíón es un virus que se puede aislar fácilmente va c e l u l a r e s céIu1as Bero, eI tóner entonces esa variedad de 1íneas y d e cIínica de1 paciente a garantízar, dependiendo de la historia del rsismo' el aislamiento quefanos hacer que nosotros 1o lamÍse necesitan las cámaras de flujo En e1- equipo de labcratoiio por baco externas contaminaciones evitar n"r, nuy importantes Para e. t i p o l a m i n a r f l u j o d e l a c á m a r a u t i l i z a Generalrnente se terias. El éxito de que un buen cultivo Autoclaves p¿ra esterilizar. que se-va a si e1 $áterial especial sea buéno-,está aquí, en celular q ue será reuy a v i d r í o e s d e c é l u l a s iu= para hacer .t".É. utilizar c o n t a m i n a c i ó n ' continuamente y no debe existir tilizado. y a En un auboclave se ernplean temPeraturas bastante altas 121"C salga q u e naterial el 15 libras de presi-ón con Io que se garantiza estéri1, de cultivos celulares es el agua Fundamentalmente en un laboratorio para lavar e1 material y para preparar tocon que se va a trabaiar, necesarios para que las célu1as puedan credos ios medlos nutrítivos de cultipara laboratorio Generalmente el agua que se utíliza aat. corriente El agua y desmineralízada ' es bidestilada vos celulares está extremadanente contarninada e lncluso en determinado momento Pueen de 1legar a crear sedimentos que no Permiten un buen adosamient'o los cultivos celulares.. 241.

(6) son importantes Para conservar conLos tanques de Nitrógeno líquido Para ello se usan temPeraturas hasta seladas las líneas celulares.. iro " c.. Fuera de que Las células están en el ¡redio-,nutrl tivo a base de1 suero fetal bovino, se necesita para la congelación de otra sustancia que es e1 Dimetil su1f6xído. Esta es una austancia que oo-Permite que se forrnen crisLales al congelar que rompan las céIulas y 1as tnaten. Una línea celular bien congelada, bien preservada se puede tener por eI tiempo gue se quiera sin que pierda sus caracterlsti cas primordiales. EI proceso ideal para congelar teiidos celulares es bajar Ia temperatura un grado por minuto. En el caso cle que nb haya el eqüipo para hacer esto, exísten otra serie de alternativas como 1a nevera para que se enfríe y luego llevarló al congelador' Para posteriormente introducirlo a un congelador de tenpeiaturas entre -70, -90'C y finalmente colocarlas en nitrógeno'llquido. Los congeladores de baja temperatura, entre -70 y - gOoC son necesarios para ia preservaci6n de virus, porque éstos son extremadanente hábiles a los cambj.os de tenperatura. Bajar la temperatura un graoo por Einuto S,arantiza una viabilidad de1 8O-9OZdáspués del congelamíento. El otro nétodo garanriza tn 502 de viabilidad. [á ternpe l,asincubadorasa 33oC o 37oC son también importantes. ra-tura aquí juega un papel clave dependiendo de donde es extraldo el órgano pára ñacér la línea celular, y de la temperatura a 1a cual esté; Por ejemplo si se tiene un cultivo de hígado, hay que tenerlo a 3 7" C . con la diferencía para cultivos celulares; Microscopio invertido p o r que está en Ia posición de los obj etivos ' nicroscopios corrientes va a estar situada en la base tanto de 1a bote 1a monocápa celular en eI momento' lla o del plato que se esté utilizando dá vueltas continuadanente a una vel-oCidad deterSistema de Roller, de próducj-r la monose va a tefler 1a posibilÍdad con cuai minada 1o del tubo' con esto se capa celular a 1o largo de toda la superficie cle contaáto cuando se tenga algún agenobiíene una mayor superficie te que aislar.. 242.

(7) ya que tódo naterial-, son extremadamente importantes Loe filtros que se vaya a utilizar para ponerlo en líquido o ¡nedio nutritivo tiene que ser conpletamente es contacEo con la monocapa celular, y 1o único que dá la garantla para eso son las nenbranas, los téril por autoclave o por calor, porque medios no se pueden esterilizar los componentes de1 medio. se destruirían que generalmente se ubÍliza es aquel con un Porc de díáEl filtro con poros más grandes filtros d e 0 , 22 micras, 6i se utilizan metro q u e p a s e n sin embarb a c t e r i a s , p o s i b í l i d a d d e e s p o r a s' etc. ' hay gol las rnembranas no q,arantizan que el nedio quede libre de nico plasmas, 1o cual es nn'gran problena por contaminación que hay en El mico cuando sé trabaja con cultivos celulares. el laboratorio tiene la filtrable y que plasma es un organisno d esafortunadanente q u e u n a s e r i e t ó x i c as, 1as de susEancias son capacidad de producir en cé1u1a, en 1a cuáles inducen una serÍe de cambios norfológicos p o r q u e e r r a d o . se va a dar un diagnóstico tonces e1 problema es con este proceso se obtienen las célu1as Equipo de centrifugación: y disgregadas de nodo necánlco. También puede haindividua liza rlas ATV o colatripsina, cerse esta disgregacíón con enzinas utilizando g,ír.aza. Una vez tratado eI tejido se le hace una serie de lavados del !O% para quitar la enzima y se procede a la siemóon s.re.o fetal bra en los tubos o las botellas. se f¡sa el azúl Ce tripan o el color blanPara obtener 1a viabi.lidad indica células vivas, 1o cscuro célu1as muertas, se co refri-ngente hacen conteos con base en 300 células, se saca el porcentaje Y se obtiene la viabilidad.. Después de que el cultivo cimiento o mantenimiento.. III.. Existen. varias. ha crecído,. se le coloca en nedio de cre -. DESARROTLO DEL CTJLTIVO. metodologías:. se requiere El sustrato puede ser de vi.drío.'o plástico, portadores así conoeé1 tratartrlento de superficies.. microtrans-. Para 1a fase gaseosa es rrecesario tener en cuenta e1 O2 y eI CO2.. 2l+3.

(8) eI En un nedio de cultivo se consideran osmolaridad, la temperatura y Ia viscosidad.. pll I. los. Bufters.. Ia. Existen nedios definídos que contienen3 Sales Aminoácidos Suplementos orgánicos Vitaminas y Glucosa polipéptidos ' Además incluyen sueros que contienen protelnas, creciniento' de hornonas y nutrientes varios, ¡riñerales ' factores inhi-bidores v netabolÍtos diversos. E1 suero (fetal bovino) ee rico en protelnae necesarias para el cultivo celular, se requiere tanto Para céluLae en creciniento como en mantenimiento, IV.. APLICACION DE LOS CIJLTIVOS CELI]I.ARES. Una de las áreas en que se trabaja en l-a Universidad de1 Va1le pero los cultivos celulares tienen es en el área de Virolo8ía, en la parasi.Eología, una garna bastante grande de aplicabilidad: bacteriología y en l,a innunología. - Apticación rle los cultivos celulares en la virologla: sirve para hacer el diagnóstico correcto y adecuado de infecciones Si virales en pacientés que presentan algún cuadro clínico. sé sospecha alguna infección vÍral y la muestra que se ha enviado al labotatorio es la adecuada, es decir, en el caso de infeccíones respiratbrias, 1as muestras deben ser aspirados lisofarínescobilLones nasales, Iavados geos, escobillones faríngeos, Si iasales, aspirados bronquiales, bióxido de pulmón, etc. se sospecha un virus ernpérico pues se debe tener material fecal' si son virus que se secretan por Ia orina, cono el citoneganovirus, las paperas, etc., la muestra debe ser orina¡ toda muestra debe tratarse c1ínica qué 11ega al laboratorio Pririero contra nuestra clínica ya que cualqüier hongos y contra- bacterias, que- =e ha toEaado en un humanova a venir conLaminada con diverlos ¡rás utilisos agentes, para ello se trata con antibióticos, zados para e1 tratamiento de muestras clLnicas son: Ia penicilina La de concentración final, ,^"tn de 1O0 unidades/millr¡etro "estrepEomicína concenEración final 100 micogranos/millmetro y Ia anfotericina para hongos en concentración 0,25 micograrnos Cuando no se tiene la por e1 nivel de cóncentración fina1.. 244.

(9) ... posibilidad de tener e1 conjugado penicilina-estrePtomicina ' de conseguir, genees bastante difíci1 porque 1a estreptomicina una alternatlva ralmente se Liene que comprar en el exterior' son drogas es la gentamicina, pero 1o mismo que 1a anfotericina, hay que usarlas entonces en concentracioextremadamente tóxicas' nes rnuy bajas, 1a EenEamicina generalmente en concentracj"ones Una vez senbrada final. concentración de 10 micogramos/milímetro y después de un determinado tíempo, Seneralmente 1a nuestra para ver un efecto, se tienen que considerar dos cosas: 1. la 2. la cantidad vj-rulencia que tenga ese virus en ese monento. que vaya en el inóculo. Si se tiene en el inóculo de virus el efecto cÍtopático se puede demorar poca cantidad de vlrus, hay bastante virus, si en la muestra clínica de 6 a 9 dias, ocurren de 3 a 5 días nenos, dados estos ranSos fos efectos estén en excelente líneas celulares es nuy importanEe que las condición incluyendo que estos sean nuevos para tener una mayor e1 agente, pues a nadida que las células posibilidad de aislar a los agentes, resistencias van envejeciendo van creando cierlas En el caso recePtores. quizás porque se van perdiendo ciertos cinsipial, eI contenido cítoPlasnático respiratorio del virus que posteriormente afectada está cargado de virus de la célula o producto cuando este cinsiPio nuevas células van a infectar de la función de varias células se destruya, donde libera virionuevas células. nes que son cápaces de infectar las que produce eI virus de1 polio' citopático En e1 efecto en una etaPa Prjflaria' sanas son atacadas por el virus' células sin se replica en e1 citoplasma, el vÍrus donde generalnente de célu1as que en el núcleo no pase nada, aunqué coloraclones muestran que siempre hay vistas en el microscopio infestadas del núc1eo, pero ésto es Producto de 10 retracción una cierta Es.te és que está sucediendo en ese mc¡nento en el cltoplasma. p u e s d o s d i a s desprrés c i t o c i d a , u n o o v i r u s e x t r e n a d a m e n t e un Cada virus tiene están completamente destruídas. las cé1ulas presentar el virus efectos ciEoPáLicos; de sus forna ideal una lritranuproduce fdPliea qüe los famosos fuegos, se el herpes, se por 1o que todos los cambios y 1as inclusiones clearmente y con características muy especiales intranuclear ven a nivel bastante grandes citopático, las células e1 efecto de presentar como racimos de uvas. se van agrupando en una fase inicial un efecto nuy parecido adeno tiene El virus Pero casi nr¡aca 1as cé1ulas están más dispersas a formar esos racimos, tienden entre el ader'ro y y no son tan grandes, a veces hay confusión del paciente clínica 1a historia el herpes, pero si se tiene se recurre duCas Cuando se tienen fácilmente. se determina con se enfrentan estas células es decir, a la fluorescencia, y c o n tra l u e g o a g r e 8 a u n a n t i c u e r P o s e e s p e c í f i c o , un antlsuero 1 o c u al i s o e f e s i o n a t o f l u o r f e í n a , c o n d e n a r c a d o ese antisuero GeneralmenEe herpes. es adenovirus o sí es virus deiine si c'-:andc se '.¡é '.'i-rus herues no; f f uqr,rgscencia. gq o-!9qr',ra fLuorez.+>. :f.

(10) É. t. ü. es donde está Ia nayor ciendo sóIo en el núcleo porque atll En e1 adeno se puede ver ambas concentración de viriones. cosas, fluorescencia en e1 citoplasma y una fluorescencia bastan!e marcada en el núcleo, es apenas lógico porque de todas naneras el virus cuando sale del núcleo tiene que pasar por citoplasma y dependiendo del nomento en que se detecte eI virus, se va a poder ver viriones en uno ó en otro, siendo el adeno de replÍEl efecto que produce el virus de1 saramcación intranuclear. pión, son cinsipios sinilares a las que produce el resPiratorio el saranpión, las paperas y el virus de la paraincinsipial, fluenzai la dÍferencia entre el efecto del virus por resPiratorio El y éstos, adenás del tamaño son las esplculas. cinsipial virus de paperas presenta un efecto parecido pero cerca de1 aparecen como unas céIulas fanEasEas, es decir unas cinsipio células redondas que no tienen nada en su interior. Otra aplicación de los cultivos celulares en virologla es en la producción de antisueros específicos contra virus policlonales con el objetivo de producir pruebas para antlgenoe, para hacer l€ detección de anticuerpoa-' por cualpruebas inmunológicas. fijación quiera de las pluebas conocidas como neütralización, fluorescencia, de aglutinación, de complementos, inhibicíón se puede producir anEicuerPos nonoclonalee a Partir del virus' es decir, á éste se 1e hacen una serie de gradientes para purificarlo y después de purlficarto se exErae 1a proteína que interesa Para obtener un antipara producir un anticuerpo monoclonal. luerpo nonoclonal se infecia un ratón susceptible con una protelese ratón crea anticuerpos y Benerslmente se na éspecífica, e1 bazo donde estos leucocitos productores de esos antiutilizá I-es células del bazo se fusionan con otro tiPo de cuerpos. cétulas perennes (mieloma) que van a seguÍr Produciendo el anticuerpo monoclonal. Otra aDlicación que tienen los cultivos celulares . es en la Paraespecliicamente en el caso de la enfernedad de Chagas sitologla, produci.da por el Tri-panosomacrucci, éste es un -organismo intraa la célu1a para repliei decirl-qlE-iEEEEiEá-lEñetrar ielular, celular que hasta la llnea parecen ser carse, los fibroblastos y desarrollo división el crecimiento' eI momento soporEa nejor Ínfestiforrnas en transformación de las formas hasta la completa de1 triPomasteSotas con inoculadas vas, cuando esas formas en anastigose lransforrna céIulas Tri.panosomacruci entran a las n-ay un proceso de división en amastigotas hasta otra EGI-fi6Flas células se ro¡npen vez en f;rmas tripomástigotas infestivas, y van a lÍberarse al medio sobrenadante sólo las formas tripomastripanosoniasis tigotas. Cuál es Ia aplicación a esto? en ErÍPomasposible obEener que sido no ha ha habido e1 problena de y homogéneas. tigotas o mastigotas .n .utttidtd." suficientes - , inmunológicos, de biologia paia hacer estudios bioquínicos, Si se quiere Eener triPonasEisoEas se deja moiecular, etc. que este ciclo ocurra cornpleLanente, si se qui-ere tener sóIo. 246. I. I I.

(11) rnastigotas entonces 1o que se hace es soneter eI cultivo a un que rompa la nembrana celular y tratamiento con una solución que deje libre sólo amastigotas las cuales se 11evan luego a que puede ser con metrisamida o con un proceso de separación dextrán para separar las células y óbcener asl las formae aoa6Ligotas, el resultado final es 1a obtención de fornas puras, 10' cual es muy importante dada la gran varÍedad de formas que se producen en organismos tan pleonásticos como éstos.. Debe mencionarse que 1os embriones, de los huevos enbrionados pollo o el su relatÍva inportancia para la producción tienen ya que 1a producción de virus crecimiento de determinados virus, celulares es poca por lo que el empLeo de huevos en cultivos para obtener de aviares es muy inportante grandes cantidades para después hacer todo se antígenos, 10 que posteriormente ha visto.. muy inportante como 0tra aplicación de 1os cultivos celularee producto final es en la producción de vacunas. Todas las vacunas de orlgen hunano son producidas en cultivos 1a vacuna celulares, la trivalen¿e de 1a polio, oral de Ceiby, que es producida en. cétulas bero,-La vacuna de la ruheola que es produéide en de HI(-21, Ia vacuna contra e1 sar.aropión que es producida €n Para Las vacunas contra influenza genealglqenFe cé1u1as bero. se utilizan los huevos embrionados, pero el problena de la ínfluenza es que son virus que mutan mucho y pot eso no se ha podido obtener una vacuna que proteja a toda Ia humanidad. aplicación es en tra Finalnente otra de los culti,vos celularee genética pro'cbporque se pueden esEudiar en culEivos celulares sos euncogénicos, se puede ver cómo es la replicación celul,ár, cómo es Ia replicación viral.. 247.

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