CURSO DE MICROBIOLOGÍA BÁSICA

23 

Loading....

Loading....

Loading....

Loading....

Loading....

Texto completo

(1)

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Odontología

Laboratorio de Genética Molecular

CURSO DE

MICROBIOLOGÍA BÁSICA

Dra. Laurie Ann Ximénez-Fyvie

Mtra. Adriana Patricia Rodríguez Hernández

(2)

Células sin núcleo Células con núcleo

Altamente organizadas

Capaces de crecer y reproducirse

Contienen la misma molécula hereditaria (DNA)

Expresión genética mediante transcripción y traducción

Características de Prokaryote y Eukaryote

(3)

Tamaño 0.2 a 3µm 10 a 100µm

Membrana citoplasmática + +

Pared celular + -

Membrana nuclear - +

Genoma haploide diploide

Cromosomas verdaderos - +

Ribosomas 70S (50S + 30S) 80S (60S + 40S)

Mitocondrias - +

Retículo endoplásmico - +

Aparato de Golgi - +

División celular Fisión binaria Mitosis

Respiración Membrana citoplasmática Mitocondrias

Diferencias entre Prokaryote y Eukaryote

(4)
(5)
(6)

Envoltura celular

Prokaryote

Eukaryote

Membrana citoplasmática Peptidoglicano Membrana externa y/o cápsula Pared celular

(7)

Estructura básica del peptidoglicano

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

Cadena de glicanos Cadena de tetrapéptidos Enlace peptídico Enlace glucosídico β 1-4 Enlace cruzado: puente

de hidrógeno

n-acetilglucosamina Acido n-acetilmurámico

L-alanina D-ácido glutámico L-lisina (meso-DAP) D-alanina

M

a b c d

G

(8)

Estructura del peptidoglicano en S. aureus

Glicina

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

Cadena de glicanos Cadena de tetrapéptidos Enlace peptídico Enlace glucosídico β 1-4 Enlace cruzado: puente

de pentaglicinas

n-acetilglucosamina Acido n-acetilmurámico

L-alanina D-ácido glutámico L-lisina (meso-DAP) D-alanina

M

a b c d

G

(9)

Estructura del peptidoglicano en Actinomyces

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

G

G

M

G

M

G

M

M

Cadena de glicanos Cadena de tetrapéptidos Enlace peptídico Enlace glucosídico β 1-4 Enlace cruzado: puente

de tetrapéptidos

n-acetilglucosamina Acido n-acetilmurámico

L-alanina D-ácido glutámico L-lisina (meso-DAP) D-alanina

M

a b c d

G

(10)

Inhibición de la síntesis del peptidoglicano

M

G

M

Sitio: Citoplasma

Eventos: Síntesis y ensamblado de precursores ETAPA 1

UDP

G

Sitio: Membrana citoplasmática Eventos: Transporte de precursores

ETAPA 2

Sitio: Pared celular Eventos: Polimerización ETAPA 3 Glucosa Glucosa 6-fosfato ACoA UTP UDP L-Ala UDP ATP

M

PP Glu

M

PP

G

UDP

G

M

PP

G

M

PP

G

M

G

PP

M

G

M

G

G

M

Formación de enlaces Transglicosilación Transpeptidación Lípido acarreador PEP Fosfoenolpiruvato Enzima PEP Translocación

(11)

Formación de enlaces cruzados

G

G

M

M

G

G

M

M

Péptido donador Péptido receptor

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

n-acetilglucosamina Acido n-acetilmurámico

L-alanina D-ácido glutámico L-lisina (meso-DAP) D-alanina

M

a b c d

G

(12)

Inhibición de la síntesis del peptidoglicano

M

G

M

Sitio: Citoplasma

Eventos: Síntesis y ensamblado de precursores ETAPA 1

UDP

G

Sitio: Membrana citoplasmática Eventos: Transporte de precursores

ETAPA 2

Sitio: Pared celular Eventos: Polimerización ETAPA 3 Glucosa Glucosa 6-fosfato ACoA UTP UDP L-Ala UDP ATP

M

PP Glu

M

PP

G

UDP

G

M

PP

G

M

PP

G

M

G

PP

M

G

M

G

G

M

Formación de enlaces

X

X

X

X

Transglicosilación Transpeptidación Lípido acarreador PEP Fosfoenolpiruvato Enzima PEP Vancomicina Penicilinas Carbapenems Cefalosporinas Monobactrams

X

Bacitracina Cicloserina Cicloserina Fosfomicina

(13)

Inhibición de la formación de enlaces

n-acetilglucosamina Acido n-acetilmurámico

L-alanina D-ácido glutámico L-lisina (meso-DAP) D-alanina

M

a b c d

G

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

G

M

X

X

X

Vancomicina Penicilinas Carbapenems Cefalosporinas Monobactrams

(14)

Envoltura celular de bacterias

Gram positivas y negativas

(15)

Pared celular de Gram positivos

Peptidoglicano Membrana citoplasmática Periplasma Ácido lipoteicoico Ácido teicoico Citoplasma Citoplasma

Envoltura celular de bacterias

Gram positivas y negativas

(16)

Citoplasma Peptidoglicano Membrana citoplasmática Periplasma Membrana externa Lipopolisacárido Lipoproteína Citoplasma Lípido A Núcleo interno Núcleo externo Antígeno O (n) Citoplasma

Pared celular de Gram negativos

Envoltura celular de bacterias

Gram positivas y negativas

(17)

Técnicas microscópicas en microbiología

Campo claro

Bacterias fijadas y teñidas

Confirmación de la presencia de bacterias

Determinación del Gram

Definición de la morfología celular

Campo obscuro

Bacterias vivas

Confirmación de la presencia de bacterias

Observación de la motilidad

Definición de la morfología celular

Contraste de fases

Bacterias vivas

Confirmación de la presencia de bacterias

Observación de la motilidad

Definición de la morfología celular

I.D. de Nomarski

Bacterias vivas en 3D (aparente)

Visualización de estructuras internas

Observación de la motilidad

Definición de la morfología celular

Trayectoria óptica Diafragma de campo Diafragma del condensador Alineación de diafragmas

Fondo Contraste Secciones con I.D. y C.F. Comparación C.C./C.O. /I.D.

(18)

Fluorescencia

Bacterias vivas o fijadas

Utilización de tinciones fluorescentes (fluorochromos)

Observación de bacterias individuales en mezclas

Identificación de especies definidas

Confocal

Bacterias vivas o fijadas

Utilización de tinciones fluorescentes (fluorochromos)

Definición de la organización e interacción entre células

Estudio de biopelículas en diferentes planos focales

Electrónica de barrido

Bacterias fijadas en 3D (real)

Estudio de componentes superficiales finos

Observación de la organización entre células

Definición precisa de la morfología celular

Estereoscópica (magnificación)

Bacterias en cultivo en 3D

Observación de organización macroscópica entre células

Determinación presuntiva de la pureza de los cultivos

Estudio de la morfología de colonia

Multifotones Combinaciones fluorescencia

Técnicas microscópicas en microbiología

(19)

Métodos para el cultivo bacteriano

Curva de crecimiento bacteriano (in vitro)

10 9 8 7 6 5 4 Cu en ta s v iab le s/ m l ( 10 lo g )

Tiempo (hrs)

Fase

exponencial Fase estacionaria declinaciónFase de

Fase de latencia Pe riod o d e ac el er ac n 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 Pe riod o de re ta rdo

(20)

Medios de cultivo

Medios generales y enriquecidos

Nutricionalmente complejos favoreciendo el crecimiento de un gran número de especies

Pueden ser semi-selectivos variando su composición, pH y condiciones de cultivo (O2, C°, etc.)

USO:aislamiento primario para recuperación amplia de microorganismos y mantenimiento de cepas

EJEMPLOS:agar nutritivo, infusión cerebro-corazón, soya-tripticasa, agar sangre, agar chocolate, NHK, etc.

Medios selectivo

Nutricionalmente pobres con componentes que estimulan e inhiben el crecimiento de cepas específicas

Inhiben el crecimiento de la mayoría de especies y favorecen el de un número reducido de microorganismos

USO:aislamiento primario de microorganismos específicos

EJEMPLOS:agar mitis-salivarius, agar Salmonella-Shigella, medio Thayer-Martin, etc.

Medios diferenciales

Por definición son también selectivos

Permiten la identificación de actividades metabólicas específicas

USO:aislamiento primario de microorganismos específicos

(21)

Técnicas de sembrado

Estría simple

Estría triple

Estría cuádruple

(22)

Aislamiento de cepas

10-1 4.5 ml 500 µl 4.5 ml 10-2 500 µl 4.5 ml 10-3 500 µl 4.5 ml 10-4 500 µl 4.5 ml 10-5 500 µl 100 µl 5 ml Obtención de la muestra Dispersión y dilución Sembrado Cultivo 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

Conteo Confluyente Confluyente >300 UFCs ÷ 30-300 UFCs

(≈150 UFCs) ÷ 30-300 UFCs(≈ 50 UFCs) <30 UFCs

X

X

(23)

Propagación de cepas

Medio Enriquecido

Medio Selectivo

Aislamiento

Figure

Actualización...

Related subjects :