CONTEO DE GLOBULOS ROJOS
El conteo de glóbulos rojos es el número de eritrocitos presentes en un milímetro cubico (mm3) de sangre total anticoagulada, y se expresa en millones de eritrocitos/mm3.
Dos aspectos muy importantes se hacen notar:
a) Debido a que son células muy pequeñas (7 – 9 de diámetro) se emplea el auxilio de técnicas morfológicas microscópicas.
b) Por su número y su fragilidad, se utilizan técnicas de dilución con soluciones que no distorsionen o agredan la morfología y/o turgencia de éstas células que contienen un medio líquido en su interior, es decir, deben ser isotónicas.
Objetivo
Cuantificar los glóbulos rojos. Material y equipo
o Pipeta Thoma para glóbulos rojos
o Boquilla con manguera
o Cámara de Neubauer con cubre hematocitómetro
o Contador metálico
o Mezclador de pipetas de Thoma
o Microscopio binocular con platina móvil
o Pañuelo desechable blanco
o Solución de Hayem
Muestra
Sangre anticoagulada con EDTA Procedimiento
1. Aspire la muestra (que deberá estar homogenizada) con la pipeta de Thoma hasta la marca de 0.5 2. Limpie el exceso de sangre del exterior de la pipeta con gasa o papel desechable.
3. Aspire la solución de Hayem hasta la marca de 101, retire la manguera del aspirador. En este momento la muestra esta diluida 1:200
6. Cargar la cámara de Neubauer, teniendo cuidado de que esté escrupulosamente limpia, igual que el cubre, procurando no rebasar la plataforma de conteo con la muestra diluida.
7. Colocar sobre la platina del microscopio la cámara de Neubauer y dejar reposar no más de dos minutos, utilice el objetivo de 40X.
8. Con el auxilio de un contador de células, se cuentan los eritrocitos contenidos en el perímetro de 5 cuadrados de la cuadricula central de la cámara y que tiene 4 cuadros por lado (se recomienda contar los cuadrados de cada esquina y el central, de esta manera, el conteo es representativo). Ver figura 2 de la cuadricula.
9. Con el auxilio de una jeringa, lavar solo con agua de la llave la pipeta de Thoma y limpiar con un pañuelo desechable blanco la cámara de Neubauer inmediatamente después de hacer la lectura como se le indique.
Para obtener el número de eritrocitos contados, se efectúa la operación que se indica a continuación. Eritrocitos/mm3 = Número de eritrocitos contados X 10,000
Valores de referencia
Mujeres 3, 600,000 - 5, 000,000/mm3 (3.6 – 5.0) Hombres 4, 200,000 - 5, 400,000/ mm3 (4.2 – 5.4) Recién nacidos 5, 000,000 - 6, 500,000/ mm3 (5.0 – 6.5)
INDICES GLOBULARES
Los índices globulares son empleados para definir el tamaño de los eritrocitos, y el contenido en peso y en porcentaje de hemoglobina que contienen.
Estos índices los emplea el clínico para poder diferenciar y clasificar las anemias. Tales índices son:
VGM (Volumen globular medio)
CMHG (Concentración media de hemoglobina globular)
CMH (Concentración media de hemoglobina)
Se obtienen a partir de la cuantificación de hemoglobina, hematocrito y eritrocitos/ mm3. Por esta razón, es importante que las determinaciones sean exactas y reales, pues cuando se obtienen de tablas de relación, los datos obtenidos son viciados y no corresponden al estado real del paciente.
El volumen globular medio nos señala el volumen promedio de los eritrocitos, indicando si se trata de micro, normo o macrocitos. La fórmula es:
VGM = Hto X 10 = μ3 (micras cúbicas) Rango de referencia: 80 – 94 μ3 Eritro./mm3
Cálculo
La concentración media de hemoglobina globular nos indica la concentración de hemoglobina en los eritrocitos, obteniéndola de la relación del peso de la hemoglobina y el volumen de los mismos:
CMHG = Hb X 100 = % Rango de referencia: 32 - 36% Hto.
Cálculo
La concentración media de hemoglobina nos indica el peso promedio de hemoglobina contenido en los eritrocitos, de esta manera sabemos si la anemia encontrada es hipocrómica, normocrómica o hipercrómica.
CMH = Hb X 10 = μ μ g Rango de referencia es de 27 31 μ μ g Eritro/mm3
CONTEO DE GLOBULOS BLANCOS
La cuenta de leucocitos nos indica la cantidad de glóbulos blancos o leucocitos presentes en un milímetro cubico o microlitro (mm3 o μL) de sangre total anticoagulada.
Esta herramienta diagnóstica es muy útil para el clínico, debido a que su rango es constante (de 5,000 a 10,000/mm3) y cualquier alteración a éste es un indicativo muy sensible de respuesta inmunológica, y por lo tanto, señal de algún acontecimiento importante en el organismo.
Como en el caso de los eritrocitos, siendo microscópicos, se requiere de técnicas microscópicas, y por su número, se requiere de diluir la muestra; pero a diferencia de los eritrocitos, no es necesario emplear un dilutor isotónico. Para el conteo leucocitario, es necesario destruir los eritrocitos dejando evidentes e intactos a los leucocitos, a la vez de proporcionarles una leve tinción a sus núcleos, debido a que son transparentes. Para lograr esto, la sangre total anticoagulada es mezclada con una solución de ácido débil, con esto diluimos la muestra y hemolizamos a los eritrocitos.
Objetivo
El alumno cuantificará los glóbulos blancos
Material y equipo
o Pipeta de Thoma para conteo de blancos con boquilla de aspiración o Cámara de Neubauer con cubre hematocitómetro
o Contador mecánico
o Mezclador de pipetas Thoma o Mezclador TEST TUBE ROCKER
o Microscopio binocular con platina móvil o Gasa o pañuelo desechable suave. o Solución de Türk
Muestra
Sangre anticoagulada
Procedimiento
1. Homogenizar bien la muestra sanguínea que se va a estudiar en el TEST TUBE ROCKER 2. Aspire la sangre con la pipeta para blancos hasta la marca 0.5
3. Limpie el exceso del exterior con gasa o pañuelo desechable
4. Coloque la punta de la pipeta en la solución dilutora y aspire lentamente teniendo la precaución de no aspirar aire que altere el volumen. Llene con el dilutor hasta la marca 11 la dilución es 1:20 5. Retire el aspirador de la pipeta y colóquela en el mezclador de pipetas de Thoma, acciónelo y
6. Retire la pipeta y descarte las primeras 4 gotas
7. Prepare la cámara de Neubauer (limpios y secos cámara y cubre) y coloque la punta de la pipeta en la unión del cubre y la plataforma, permitiendo que por capilaridad se llene la cámara, sin rebosar la plataforma.
8. Coloque la cámara en la platina del microscopio y permita que repose por lo menos dos minutos. Esto es con la intención de permitir que las células se sedimenten y puedan colocarse en un solo plano.
9. Enfoque con el objetivo de 10X y con el auxilio del contador de células cuente los leucocitos contenidos en las cuadrículas grandes de 4 X 4 de cada uno de los 4 cuadrantes, figura 3 y obtenga el total.
Obtenga el número de leucocitos contenido en 1 mm3 de sangre total mediante la fórmula siguiente:
Leucocitos /mm3 = leucocitos contados X100 2
Valores de referencia
Hombres y mujeres 5,000 – 10, 000/ mm3
En condiciones como en las leucemias, es recomendable efectuar diluciones de la muestra del espécimen; por el contrario, en leucopenias severas, se recomienda duplicar el volumen de la muestra.
L
L
L
L
L
DIFERENCIACION DE LEUCOCITOS
La diferenciación de los leucocitos se efectúa con la finalidad de determinar el número relativo de cada tipo de leucocito presente en la muestra estudiada. La importancia de esto estriba en cada tipo particular de leucocito; en presencia de enfermedad, va a mostrar un incremento o disminución en su número absoluto o relativo. Herramienta diagnóstica sumamente importante para el clínico.
La diferenciación es una técnica morfológica, tintórea microscópica; por lo que se empleará el microscopio, colorantes y conocimientos morfológicos bien cimentados, para la obtención de resultados confiables.
Objetivo
Que el alumno conozca y aplique la técnica que le permita diferenciar e identificar los leucocitos en una muestra de sangre.
Material y equipo.
o Microscopio binocular con platina móvil
o Portaobjetos escrupulosamente limpios, sin rayar y de bordes íntegros
o Alcohol metílico absoluto
o Aceite de inmersión
o Contador mecánico diferencial
o Charola de tinción con puente
o Colorantes de Romanowsky; cualquiera de los siguientes: Wright, Giemsa o el kit de marca Hycel que sustituye a los dos primeros colorantes con resultados satisfactorios y que se denomina “hemocolorante rápido”.
Procedimiento
1. Se recomienda hacer el frotis en el momento mismo en
que se hace la extracción de la muestra, ya sea por punción en la parte lateral del dedo anular o colocando la gota de la aguja directamente sobre el portaobjeto y extendiéndola con la técnica conocida. Si esto no es posible, la muestra contenida en el recipiente en que se obtuvo, deberá homogenizarse perfectamente antes de proceder a la confección del frotis.
2. Colocar una gota pequeña de sangre en un extremo del
portaobjetos que deberá estar escrupulosamente limpio, extender la sangre con la ayuda de otro portaobjetos como se mostrará en la práctica.
3. Fijar el frotis con metanol (o con el fijador que acompaña al kit)
4. Sumergir en el frasco del colorante UNO, el frotis por 10 a 15 segundos. Dejar escurrir.
5. Sumergir en el frasco del hemocolorante DOS, el frotis por 10 a 15 segundos
6. Lavar con agua corriente y dejar secar
7. Colocar en la platina del microscopio el porta, depositar una gota de aceite de inmersión y enfocar empleando el objetivo de inmersión
8. Efectuar la diferenciación de los leucocitos que se observen, contabilizando en el contador diferencial los hallazgos hasta el número 100, auxiliarse con la lámina de la siguiente página, que muestra su morfología.
9. Registrar los resultados.
Las cifras de referencia son las siguientes:
Célula Al nacer % 4 semanas % 4 años % 6 años % Adulto % Neutrófilos 37 – 57 25 – 35 25 – 45 45 – 50 50 – 65
Bandas 0 – 1 0 – 1 0 – 1 0 – 1 0 – 1
Eosinófilos 1 – 3 1 – 3 1 – 3 1 – 3 1 – 3
Basófilos 0 – 1 0 – 1 0 – 1 0 – 1 0 – 1
Monocitos 4 – 8 5 – 9 4 – 8 4 – 8 4 – 10
Linfocitos 25 – 35 45 – 65 40 - 60 40 – 45 25 – 40
CONSTITUYENTES CELULARES NORMALES EN LA SANGRE HUMANA ADULTA
1. Neutrófilo (polimorfonuclear) segmentado 2. Neutrófilo en banda (cayado)
3. Eosinófilo segmentado 4. Basófilo
5. Linfocitos pequeños 6. Linfocito grande 7. Monolito 8. Trombocitos 9. Eritrocitos
Según Custer: An Atlas of the Blood and Bone Marrow
1
7
4 6
8 9
2 5
7
INFORMACION Recuento de glóbulos rojos en cámara de Neubauer:
La cámara de Neubauer (Fig. 1) es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con dos depresiones en el centro, en el fondo de las cuales se han marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Cada cuadrícula es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm para los cuadrados externos (L), y de 0.20 mm el cuadrado interno. Así pues, las áreas sombreadas corresponden a 1 milímetro cuadrado cada una (Fig. 2). La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico (mm3), es decir 0.1 microlitro (µl) para cada superficie sombreada.
Cámara de Neubauer, con una depresión superior y otra inferior (los extremos de la “H” formada al centro).
a) Promo
Promonocitos
b) Imagen 195
c) Proeritroblasto
Proeritroblasto en sangre periférica.Es la primera célula eritroide que puede ser identificada...
d) 162
Promielocito en sangre periférica
e) 042
f) Monocitos(2)
Leucemia monocitoide aguda
g) Punteado basófilo
h) Palillos de tambor
Leucocitos segmentados.Se aprecian en sus núcleos apéndices de cromatina llamados "palillos de tambor" o cuerpos de Barr.
i) Rouleaux
j) Esferocitos
Son hematíes que tienen forma esférica,es decir,un diámetro inferor al normal,pero un mayor grosor.
k) Acantocitos
l) SMD
Síndrome mielodisplásico.Eritroblastos con vacuolas y anomalías en el núcleo
m) Howell-Jolly
n) Plasmodium vivax
