SA
LU
D
Efecto
Biocida
de
diferentes
concentraciones
de
Metarhizium
anisopliae
ccb-le302
y
Beauveria
Bassiana
CCB-LE265
sobre
larvas
III
de
A
edes
Aegypti.
TheBiocidaleffect ofdiferente concentracionsof Metarhizium anisopliaeCCB- LE302andBeauveria BassianaCCB-LE265onlarvaeIII ofAedesaegypti.
ALCALDEMOSQUEIRA,JudithGeorgette1
; ROLDÁNRODRÍGUEZ,JudithEnit2
;SARAVIA
CUEVA, Verónicadel Pilar3
;COLLANTESSILVA,Luis4
RESUMEN
ElpresentetrabajoevaluóelefectobiocidadediferentesconcentracionesdeMetarhiziumanisopliae
CCB-LE302yBeauveriabassianaCCB-LE265sobrelarvasIIIdeAedesaegypti,encondicionesdelaboratorio.
Lascepas delos hongosfueronobtenidos de SENASA.LaslarvasdeA. aegypti,procedentes delcerro
Pesqueda,provinciaydistritodeTrujillo,fueronmantenidasatemperatura24±2ºCyhumedadrelativa
70%±10.Sediseñaron8gruposexperimentales, 4gruposcontroly5repeticionesde20larvascada
uno.ParaM.anisopliaeCCB-LE302,seutilizaronlasconcentraciones2.5x107
;2.5x106
;2.5x105
y2.5x104
conidios/mL; obteniéndose la CL50 y CL90 al 6
to
día de aplicación con 3.9x104 y 1.6x105 conidios/mL
respectivamente, sobre larvas III de Ae. aegypti. Para B. bassiana CCB-LE265, se utilizaron las
concentraciones1.3x107;1.3x106;1.3x105y1.3x104conidios/mL;obteniéndoselaCL50yCL90al5
to
díade
aplicacióncon3.6x106
y1.3x107
conidios/mL.Seconcluyequeloshongosentomopatógenosensayados
presentancapacidadbiocida.
Palabrasclave:Efectobiocida,MetarhiziumanisopliaeCCB-LE302,Beauveriabassiana
CCB-LE265,Aedesaegypti.
ABSTRACT
Inthepresentstudy,thebiocidaleffectofdifferentconcentrationsofMetarhiziumanisopliae CCB-LE302
andBeauveriabassiana CCB-LE265onlarvaeIIIofAedesaegypti inlaboratoryconditions.Bothstrainsof
fungiwereobtainedfromSENASA.ThelarvaeofA.aegypti,fromtheCerroPesqueda,ProvinceandDistrict
of Trujillo, kept at 24 ± 2º C and relative humidity of 70% ± 10. Bioassays were conducted with 8
experimentalgroups and4controlgroups,with5replicates of20 larvaeeach. For M.anisopliae
CCB-LE302,concentrationswere2.5x107,2.5x106,2.5x105and2.5x104conidia/mL,LC50andLC90obtainedon
thesixthdayofapplicationis3.9x104
conidia/mland1.6x105
conidia/mLonlarvaeIIIofAe.aegypti.ForB.
bassiana CCB-LE265,concentrationswere1.3x107,1.3x106,1.3x105and1.3x104conidia/mL,LC50and
LC90 obtained onthe fifthday of application is 3.6x10
6
and1.3x107 conidia/mL. It wasconcluded that
entomopathogenicfungihavebothabiocidalcapabilityagainstAe.aegypti.
Key words: biocideeffect,Metarhizium anisopliaeCCB-LE302, BeauveriabassianaCCB-LE265, Aedes aegypti.
1,4Biólogo.MsC.UniversidadNacionaldeTrujillo.revistaucv-scientia@ucv.edu.pe 2
3Biólogo.Dra.UniversidadNacionaldeTrujillo.revistaucv-scientia@ucv.edu.pe
SA
LU
D
INTRODUCCIÓN
Aedes aegypti (Diptera: Culicidae), considerado
vector de arbovirus presenta cuatro estadios:
huevo,larvas(I,II,IIIyIV),pupayadulto.
Su alimentación es succionando la savia de las
plantas; la hembra necesita además alimentarse
desangredepreferenciadehumanos8
.EnelPerú
actualmente la única forma de prevención es el
control vectorial 15
. El control biológico es una
alternativa ambiental y no inducen resistencia 14.
Entre l os hongos reportados como
entomopatógenos se encuentran los de la Clase
Deuteromycete,
Orden
Moniliales
y
Familia
Moniliaceae
como:
Metarhizium
anisopliae
y
Beauveriabassiana entreotros14
.
M. anisopliae, presenta conidióforos cilíndricos
ramificadosyconidiosdeformacilíndricaaovales
de5a7μm.Encultivopuro,presentauncolorque
varía desde el oliváceo hasta amarillo o verde
oscuro.Suciclodevidacomienzaconelconidioque
posee un apresorio, que coloniza el hemocele y
destruyeestructurasinternasdelinsecto;lashifas
del
hongo,
liberan
las
toxinas
destruxinas,
causando la muerte en un periodo variable
dependiendo de la cantidad de esporas que se
depositen sobre el mismo,temperatura, especie,
tamaño,edaddel insectoy virulenciade lacepa.
Estudios
histopatológicos
muestran
que
sus
toxinas ocasionandeshidrataciónpor pérdidas de
fluidos 14
. En condiciones de laboratorio se ha
demostradoqueM.anisopliaeactúacomo agente
controlador en larvas de Culex quinquefasciatus,
Culexpipiens,Ae.aegypti,Anophelesstephensiy Ae.albopictus 29,26
.Scholteycol.28
,reportaronasu
capacidad adulticida sobre Anopheles gambiae y
Cu.quinquefasciatus;así mismo,Mnyoneycol.17
demostraronlavirulenciaenhuevosdeAedes spp
delacepaM.anisopliaeIP46,ademásdesuefecto
biocida enadultos de A. gambiae sensustricto y
Anophelesarabiensis.Silvaycol.29
,registraronque
laconcentraciónde5x106
conidios/mLde las80
cepas
de
M.
anisopliae,
aisladas
de
suelos
estadodeGoiás-Brasil,indujeronentre10y100%
de mortalidad en larvas II de Ae. aegypti,
alcanzandoalas24horasel90%demortalidad.
B.
bassiana,
presenta
conidióforos
juntos
formando synemas. En cultivo puro, presenta
coloniasblancasquesevuelvencremadeaspecto
algodonoso.ElmododeinfeccióndeB.bassiana lo
realiza a través del tegumento 14
por acción de
enzimas, así como la destrucción de glóbulos
sanguíneos, acciones mecánicas, producción de
toxinasentreotrosfactores14
,siendofundamental
elreconocimientoycompatibilidadentreelconidio
ylascélulasdeltegumentodelinsecto22
.
Geetha y col. 9
, demostró la efectividad de B.
bassiana,sobrelarvasdeAe.aegypti yTrumany
col. 31
en larvas de Culex tarsalis, Cu. pipiens,
Anophelesalbimanus,Ae.aegypti,Ae.sierrensis y Ae. nigromaculis; sin embargo, Pereira y col 19
determinóel6%demortalidadconlacepaCG494
frenteal83%demortalidaddeCG24enlarvasde
segundo y tercer estadio larval de Ae. aegypti,
mientrasqueShandhuycol.25
hallaronlaineficacia
deB.bassianasobrelarvasdeAe.aegypti.Nunesy
col. 18
, demostraron que adultos A. gambiae, de
diferentes edades,sonsusceptibles a formulados
deaceitedeB.bassiana (I93-825),siendolosmás
susceptibles los que no fueron alimentados con
sangre. SegúnBukhari y col.2,registraronque B.
bassiana (IMI-391510)fuemenosefectivoqueM. anisopliae(ICIPE-30)sobrelarvasdeA.gambiaey A.
stephensi;
sin
embargo,
igualmente
susceptibles para A. stephensi y A. gambiae en
amboshongos.
Elpresentetrabajotuvocomofinalidadevaluarla
actividadbiocidadelasdiferentesconcentraciones
de
conidios
de
M.
anisopliae
CCB-LE302
y
Beauveria bassiana CCB-LE265, sobre larvas del
estadioIIIdeAe.aegypti enbasealporcentajede
mortalidad de larvas,
CL50 (concentración letal
media),CL90,TL50(tiempoletalmedio)yTL90en
condicionesdelaboratorio.
colectados en tres localidades diferentes en el
MATERIAL YMÉTODOS
1.Materialbiológico.
Larvas de Ae. aegypti estadio III fueron
colectadasdecriaderosnaturalesubicadosenel
cerro Pesqueda,distritoy provinciadeTrujillo,
departamentodeLaLibertad;trasladadasluego
en recipientes de plásticos al Laboratorio de
Artropodología Parasitaria de la Universidad
Nacional de Trujillo. L o s hongos
entomopatógenos
utilizados:
M.
anisopliae
(CCB-LE302)yB.bassiana (CCB-LE265)fueron
obtenidos
del
cepario
de
Hongos
EntomopatógenosdelaSubdireccióndeControl
BiológicoSENASA(ServicioNacionaldeSanidad
Agraria).AteVitarte,Lima–Perú.
2.Procedimiento.
2.1.CrianzadeAe.aegypti.
Los diferentes estadios larvales fueron
colocados
en
fuentes
de
plástico
conteniendo
agua
declorinada10 y
alimentadas
con
alimento
balanceado
“purina”encondicionesdeesterilidad.Las
pupas obtenidas fueron extraídas con
pipetasplásticasycolocadasenrecipientes
con agua, que permanecieron
al interior
de una jaula de metal cubierta con tela
organza y una abertura de 20 cm de
diámetro20
. Al emerger los adultos, la
SA
LU
D
.
sustancia azucarada al 10%, la que fue
embebidaenpedazosdealgodón.
Las
hembras
fueron
alimentadas
con
sangre de Mus musculus tres veces por
semana. Para la oviposición de adultos
hembra,dentro de la jauladecrianza,se
acondicionóunrecipienteconaguaypapel
filtro adherido en la parte interna de las
paredes del recipiente 20
. La crianza de
adultos
se
realizó
hasta
por
tres
generaciones con la finalidad de obtener
unacepapoblacional20
.Lascondicionesde
temperatura fueron 24 ± 2 ºC,humedad
relativade70%±10yfotoperiodode10
horasluzy14horasoscuridad.
2.2. Obtención de esporas de M. anisopliae
(CCB-LE302)
y
B.
bassiana
(CCB-LE265).
2.2.1.Preparacióndelmediodecultivo.
Se
preparó
el
medio
de
culti vo
Papa–Glucosa–Agar (PGA), suplementado
con cloranfenicol, para luego distribuirlo en
botellasplanasde50ml.
2.2.2.Siembra.
Loshongos M.anisopliae (CCB-LE302)yB.
bassiana (CCB-LE265)fueronsembradosen
botellasplanasconteniendoelmediocultivo
PGAincubadosa25±1ºCdurante10a15
días, hasta su completa esporulación para
losbioensayos4.
2.3.Evaluacióndelaactividadbiocida
2.3.1.Diseñodelbioensayo.
Para
M.
anisopliae
(CCB-LE302)
las
concentraciones fueron 2.5 x107
; 2.5 x 106
;
2 minutos, luego enjuagados tres veces con
agua destilada estéril y después colocados
sobre papel absorbente estéril. Enseguida
colocadosencámarahúmedaeincubadospor5
a7días.Lacámarahúmedaconsistióenplacas
petricuyointeriorsecolocópedazosdealgodón
estérilempapadosconaguadestiladaestéril10
.
Unavezqueelhongodesarrollósobreelinsecto
se
transfirió
a
placas
con
medio
PGA,
incubándolosa25±2ºCdurante3a5días10
,
tomando
muestras
para
observar
al
microscopio y determinar si las estructuras
pertenecenaloshongosentomapatógenos.
2.4.Determinacióndelamortalidad
2.4.1. Determinación de la mortalidad corregida
Losporcentajesdemortalidadluegode10días
de evaluación se corrigieron mediante la
fórmulade Abbott1
y los datos generados se
sometieron a un análisis de varianza y a la
pruebadegruposhomogéneos6
.
Lamortalidadcorregidafuecalculadasegúnla
fórmuladeABBOTT1
:
MC=[(%MT-%Mt)/(100-%Mt)]*100
Donde:
MC=Mortalidadcorregida
MT=Mortalidadeneltratamiento
Mt=Mortalidaddeltestigo
2.4.2.Determinacióndesignos
Seregistrólossignosdelarvasmuertascomo:
alteraciónenelcolordeltegumento,aparición
demicelioycambiosmorfológicosdelinsecto
2.5x105
y
2.5x104
conidios/mL,
control 14
positivo(Tween20al0.1%)ycontrolnegativo
(agua destilada). Para B. bassiana
(CCB-LE265),lasconcentracionesfueron1.3x107;
1.3 x106
; 1.3 x105
y 1.3 x104
conidios/mL.,
controlpositivo(Tween20al0.1%)ycontrol
negativo (agua destilada). Cada tratamiento
consistió en 5 repeticiones y cada unidad
experimentalpor20larvasdelestadioIII14.
2.3.2.Ejecucióndelbioensayo.
Cada unidad experimental consistió de 20
larvas del estadio III colocadosen vasos de
tecknopor,
conteniendo
90
mL
de
agua
destilada,luegoseagrególaconcentraciónde
esporas del entomopatógeno envolumen de
10mL.Laevaluaciónserealizócada24horas
durante 10 días. Los bioensayos fueron
sometidosacondicionesdetemperaturade26
± 1ºC y 84 ± 2% de humedad relativa,
registradosconuntermohigrómetro.
2.3.3.
Comprobación
de
la
actividad biocida.
Laslarvasmuertasfueronrecolectadasparaser
sumergidasenhipocloritodesodioal0.5%por
2.4.3.Determinación de CL50,CL90,TL50y
TL90
Mediante el conteo de larvas muertas del
estadioIIIde Ae.aegypti encadaunadelas
tratamientosdeM.anisopliae (CCB-LE302) y
de B. bassiana (CCB-LE265), se calculó los
promedios; los cuales, se utilizaron para la
determinacióndelaCL50(ConcentraciónLetal
media), CL90, TL50 (Tiempo Letal medio) y el
TL90medianteelprogramaestadísticoPROBIT
5.1.
2.5.Análisisderesultados3
Sedeterminóelanálisisdevarianza,eltest
de comparación múltiple de medias de
TukeyconP<0,05 utilizandoelprograma
estadísticoSPSS18paraWindowsyparael
análisisdeCL50,CL90,TL50yTL90,seutilizóel
SA
LU
D
2.5x10 conidios/mLdeM.anisopliae(CCB-LE302)
1.3x10 conidios/mLdeB.bassiana (CCB-LE265)y
*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.
Letrasdiferentesennegrita,representan
RESULTADOS
Elregistrodelporcentajepromediode mortalidad
de larvas III de Ae. aegypti, tratados a las mostrandotoxinas y lael cambionatural deinhibicióncolor endeel lategumentoquitina,
concentraciones
2.5x104
, 2.5x105
, 2.5x106
y (Figura1 –A). Lamicosis causadaños físicosde
7
y sudesviación estándar poblacional, el cual nos
representaladistribucióndelosdatosconrespecto
dela mediaaritmética sepresenta enlatabla 1.
Para la concentración 2.5x104
conidios /mL,
observamosqueelefectobiocidadelhongoiniciaa
partir del tercer día con un 4% de mortalidad
mientrasquepara2.5x105
conidios/mLfuede53%
de
mortalidad;
sin
embargo,
para
las
concentraciones2.5x106
y2.5x107
conidios/mLse
obtuvo71y100%demortalidadrespectivamente.
Alquintodía,seobservó85%demortalidadconla
concentración 2.5x105 conidios/mL;se alcanzó el
100% con las concentraciones2.5x106
y 2.5x107
conidios/mL.Enelsextodía,seobservóqueenel
porcentaje
de
mortalidad
existen
diferencia
estadísticas mínimas entre las concentraciones
2.5x105
,2.5x106
y2.5x107
conidios/mL.
Elregistrodelporcentajepromediode mortalidad
de larvas III de Ae. aegypti, tratados a las
tejidos y la deshidratación de las células por
pérdidadefluidos,causandolaflacidezdelcuerpo
delalarvaasícomolaseparacióndelacabezadel
tórax,reducción del tamañoy encorvamiento del
cuerpo(Figura1–B).Paralaobtencióndelhongo,
serealizócámarahúmedaalosinsectosmuertosy
luegodequeelhongocrecierasesembróenmedio
PGA(Figura1–C),observandoluegodecincodías
la presencia del hongo mediante la observación
microscópicaaaumento40x(Figura1–D).
Se registraron los mismos signos de las larvas
infectadasconB.bassiana(CCB-LE265),también
seobservóelcrecimientodemicelioenelcuerpode
lalarva(Figura2–A,B);asícomo,sucrecimiento
enmedio PGAy lasestructurastípicas del hongo
(Figura2–C,D).Medianteelanálisisde Probitse
determinó losvaloresde mortalidadmediantelas
CL50ydelasCL90deM.anisopliae (CCB-LE302)y B.bassiana (CCB-LE265)paralarvasdelestadioIII deAe.aegypti.ParaM.anisopliae(CCB-LE302)se
concentraciones
1.3x104
, 1.3x105
, 1.3x106
y realizóelanálisisalsextodíapuestoqueseobtuvo
7
sudesviaciónestándarsepresentaenlatabla2.
Enelprimerdía,sóloseobservalaacciónbiocida
de la concentración 1.3x107 conidios/mL con un
30%demortalidad,elporcentajedemortalidadse
incrementóconformeaumentabalaconcentración
de conidios y el tiempo se ve reducido. Con la
concentración 1.3x107
conidios/mL a partir del
cuartodíaseobservómortalidadmayora80%.
Porelcontrario,laconcentración1.3x104
conidios
/mL registró mortalidad menor o igual del 30%
hastaeldécimodíadeevaluación.
Laconcentración1.3x105conidios/mL,registró1%
demortalidadalcuartodíay56%demortalidadal
décimodía.
Lasconcentraciones1.3x104
y1.3x105
conidios/mL
nopresentandiferenciassignificativasperosientre
lasconcentraciones1.3x106
y1.3x107
conidios/mL,
siendo la más eficaz esta última. Las larvas
afectadas por M. anisopliae (CCB-LE302), a
diferentes
concentraciones,
presentaron
características anormales indicando la acción de
el 100% de mortalidad en las dos últimas
concentraciones.El control al50% (CL50) fue de
3.9E+04conidios/mLconlímitesdeconfianza de
1.9E+04 – 6.9E+04 conidios /mL y el control al
90% (CL90) fue de 1.6E+05 conidios /mL con
límites de confianza de 8.7E+04 – 8.1E+05
conidios /mL. La CL50 para B. bassiana
(CCB-LE265),fuede3.6E+06conidios/mLconlímitesde
confianza de 2.1E+06 –6.3E+06 conidios /mL y
CL90fue de1.3E+07 conidios /mLconlímites de
confianza de 7.3E+06 – 4.0E+07 conidios /mL
(Tabla 3). Los valores del TL50 y TL90 para M.
anisopliae (CCB-LE302) y B. bassiana
(CCB-LE265),fuerontambiéndeterminadosmedianteel
análisisdeProbit.ParaM.anisopliaeapartirdela
concentración2.5x105
conidios /mLtantoelTL50
comoelTL90presentaronvaloresmáscercanosa
la pendiente conforme se incrementaban las
concentraciones;sinembargo,paraB.bassiana el
TL50 y TL90 presento valores más cercanos a la
pendiente con la concentración 1.3x107
conidios
/mL(Tabla4).
Tabla1.PorcentajedelpromediodelarvasmuertasdelestadioIIIdeAedesaegypti
(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesdeMetarhiziumanisopliae (CCB-LE302)en condicionesdelaboratorio*.
TRATAMIENTOS(conidios/mL)
DIAS 2.5xA104 2.5xb105 2.5xb106 2.5xb107
%±S %±S %±S %±S
1 0±0 8±0.9 10±1.2 50±1.6
2 0±0 26±1.3 38±1.5 74±2.2
3 4±1.1 53±2.1 71±1.6 100±0
4 13±1.1 74±1.8 95±1.4 100±0
5 20±1.6 85±1.6 100±0 100±0
6 34±1.5 96±1.3 100±0 100±0
7 41±1.1 100±0 100±0 100±0
8 52±0.5 100±0 100±0 100±0
9 57±0.9 100±0 100±0 100±0
10 65±1.4 100±0 100±0 100±0
a,b
SA
LU
D
Tabla2.PorcentajedelpromediodelarvasmuertasdelestadioIIIdeAedesaegypti
(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesdeBeauveriabassiana(CCB-LE265)en condicionesdelaboratorio*.
TRATAMIENTOS(conidios/mL) DIAS 1.3x104
A 1.3x10
5
a 1.3x10
6
b 1.3x10
7 c
%±S %±S %±S %±S
1 0±0 0±0 0±0 30±0.7
2 0±0 0±0 0±0 54±2.8
3 0±0 0±0 0±0 73±2.9
4 0±0 1±0.4 15±0.7 89±1.8
5 0±0 1±0.4 22±0.9 98±0.5
6 15±1.6 16±0.4 39±1.1 100±0
7 19±1.1 29±0.8 49±1.1 100±0
8 22±0.5 39±1.5 62±0.9 100±0
9 26±0 46±1.3 74±0.8 100±0
10 30±0.7 56±1.8 86±1.6 100±0
*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.a,b,c
Letrasdiferentesennegrita,representan
diferenciassignificativassegúncomparaciónmúltipledemediasde Tukey,P<0.05.
Figura1.SignosenlarvasIIIdeAedesaegypti(n=100),expuestasalaespeciefúngicadeMetarhiziumanisopliae
(CCB-LE302) y aislamiento delhongo A.Separación de la cabeza deltórax; B. Cambio de coloren el tegumento;C.Crecimientodelmiceliosobreelcuerpodelinsecto;D.Presenciadehifas(Flechas).
SA
LU
D
(conidios/mL)TL
Tiempo(Días)
LC
Ecuacióndela
Tabla3.Concentracionesletales(conidios/mL)al50%(CL50)y90%(CL90)ylímitesde
confianza(LC)deMetarhiziumanisopliae(CCB-LE302)yBeauveriabassiana(CCB-LE265) sobrelarvasIIIdeAedesaegypti(n=100),encondicionesdelaboratorio*.
Hongo CL Valor LC Ecuacióndela
recta
CL50 3.9E+04 1.9E+04–6.9E+04
M. anisopliae 3E-07x+13.538
CL90 1.6E+05 8.7E+04–8.1E+05
CL50 3.6E+06 2.1E+06–6.3E+06
B.bassiana 7E-06x+1.9615
CL90 1.3E+07 7.3E+06–4.0E+07
*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.
Tabla4.Tiempoletal(días)al50%(TL50),límitesdeconfianza(LC)ypendientede
Metarhiziumanisopliae(CCB-LE302)yBeauveriabassiana(CCB-LE265)sobrelarvasIIIde
Aedesaegypti(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesencondicionesde laboratorio*al95%deconfianza.
Hongo Concentraciones
recta
M.anisopliae 2.5x104 TL50 7.9
7.5-8.5 7.3091x - 17.855
TL90 16.3 14.3 – 19.4
B.bassiana 1.3 x 104 TL50 -
- 3.3909x- 10.164
TL90 -
-M.anisopliae 2.5 x 105 TL50 2.7
2.2-3.1 10.964x + 1.6727
TL90 5.4 4.6–6.9
B.bassiana 1.3x105 TL50 9.1
8.7-9.7 5.945x-18.582
TL90 14.6 13.2–16.8
M.anisopliae 2.5 x 106 TL50 2.1
1.5-2.7 10.082x + 13.509
TL90 3.9 2.9–6.5
B.bassiana 1.3 x 106 TL50 6.8
6.6 - 7.1 9.4x- 24.855
TL90 11.5 10.7–12.6
M.anisopliae 2.5 x 107 TL50 1.1
- 7.0727x + 41.564
TL90 2.4
-B.bassiana 1.3 x 107 TL50 1.7
1.1 - 2.1 8.936x+ 23.109
TL90 4.0 3.1 – 6.2
* Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.
DISCUSIÓN
Laaplicacióndediferentesconcentraciones deM.
anisopliae (CCB-LE302) y B. bassiana (CCB-
LE265)sobrelarvasdelestadioIIIdeAe.aegypti,
demostraronenelpresenteensayoservirulentas,
locualconcuerdaconestudiosdeScholteycol.27
,
por tal motivo son consideradas entre las más
importantes
de
la
Famlia
Deuteromycete.
Comparando la Tabla 1 y 2, M. anisopliae
(CCB-LE302) resultó ser más efectivo que B. bassiana
(CCB-LE265). M. anisopliae a la concentración
2.5x107
conidios/mLpresentóalprimer,segundoy
tercer día el 50, 74 y 100 % de porcentaje de
mortalidad acumulada, lo cual indica su alta
virulencia, esto concuerda con lo observado por
Silva y col.29
, quien indica que las mortalidades
larvalesdeculícidosseproducenentrelas24y48
horas;asímismo,elaltoporcentajedemortalidad
SA
LU
D
/mL
(Tabla
2).
Según
Rodrigues
y
col.
,
tegumento
.
Estos
síntomas
fisiológicos
.La concentraciónletal media(CL50) y laCL90
Miranpuri
y
col.
,
demostraron
una
gran
(CCB-LE265)
se
obtuvo
30%
de
mortalidad
acumuladaalprimerdíadeaplicar2.5x107
conidios
23
registraron que M. anisopliae LPP133 causó 50%
de mortalidaden hembras deAe. aegypti en3.5
horas demostrando ser más virulento que B.
bassiana.
Los
bioensayos
estuvieron
bajo
condiciones
ambientales
constantes
de
temperatura a25 ±1ºC y70 ±10 de humedad
relativa, factores importantes en las fases del
crecimientodelhongo 5
.No obstante,aúnnohay
evidenciassuficientesqueindiqueladependencia
delascondicionesambientalesylabiologíadelos
hongos, puesto que depende de la interacción
insecto-patógeno,
la
correcta
elección
de
la
partícula infectiva a producir, la formulación
adecuada a utilizar y la oportuna aplicación 14.
Hafezycol12
indicaquelaproducciónadecuadade
conidios debe realizarse bajo condiciones de
elevada humedad (70-80%) y temperatura
(20-30ºC).
Después
de
comparar
todas
las
concentraciones se observó que al sexto día las
concentraciones más altas alcanzaron más del
95% de mortalidad. La mortalidad a través del
tiempo originada a la concentración 2.5x107
conidios/mLdeM.anisopliae(CCB-LE302)notiene
diferencia significativa con las concentraciones
2.5x105
y2.5x106
conidios/mL,conlasquealcanzó
El efecto del hongo M. anisopliae (CCB-LE302)
demostrólapresenciadesignos(Figura1),donde
seregistrócambiosanormalescomoalteraciónen
eltamañodelalarva,laseparacióndelacabezay
eltóraxdelinsecto,laflacidezdel cuerpolarvaly
cambio de color en el tegumento. Las larvas se
tornarondecolornegro,debidoaladesintegración
detejidos ycambios en elpH de la hemolinfa22
. Para B. bassiana (CCB-LE265), se observaron
ademásdelossignosmencionados,elcrecimiento
de micelio y cambio de color rosado en el
22
anormales producidos por micosis lo describen
Téllezycol.30
.Lamuertedelinsectosobrevienepor
toxicosisydeshidratación;sinembargoelinsecto
enfrenta con diversos mecanismos de respuesta
del sistema inmune para lo cual los hongos han
desarrollado estrategias inmunosupresoras como
la producción de toxinas. Las principales toxinas
sonlasciclopeptídos,producidosporB.bassianay
M. anisopliae; siendo las más comunes las
destruxinasconactividadinsecticida.Sinembargo,
elcambiodecoloracióncausadoporB.bassiana es
el resultado de la acción de la micotoxina
oosperein, la cual posee pigmentos de colorrojo
quesonpocoliberadosenelinteriordelhemocele
11
para M. anisopliae (CCB-LE302) son de 3.9x104
el 96 y 100% de mortalidad, respectivamente. conidios/mL
y
1.6x105
conidios/mL
Entrelostratamientosde2.5x104
conidios/mLylas respectivamente;loslímitesdeconfianza(LC)para
concentraciones
2.5x105
, 2.5x106
y
2.5x107
CL50esde1.9x104
a6.9x104
conidios/mLypara
conidios/mL se observaron diferencias (P<0.05)
estoindicaquelamortalidadparaM.anisopliae no
dependedeltiemposinodelacantidaddeesporas
queinfectaalalarva.Enelcontrolpositivo(Tween
20)ynegativo(Aguadestilada),laslarvasllegaron
a cumplir suciclo biológico. La mortalidad de B.
bassiana (CCB-LE265) se compararon al quinto
día, donde se observó 98% de mortalidad a la
concentración 1.3x107
conidios/mL y a partir de
este
día
los
resultados
tienen
el
mismo
comportamiento.
Entre
los
tratamientos
de
1.3x104
,1.3x105
,1.3x106
y1.3x107
conidios/mLse
observaron
diferencias
(P<0.05)
los
cuales
alcanzaron 0, 1, 22 y 98% de mortalidad
respectivamente.Silvaycol.29
registraronel90%
demortalidadenlarvasIIdeAe.aegyptiyBukhari
y col. 2
demostró que B. bassiana fue menos
efectivo que M.anisopliae, locual concuerda con
los resultados obtenidos. La mortalidad por B.
bassiana(CCB-LE265)nodependedeltiemposino
delacantidaddeesporasqueinfectealalarva21.
Enelcontrolpositivo(Tween20)ynegativo(Agua
destilada)laslarvascumplieronsuciclobiológico.
16
efectividadde B. bassiana contra este insecto, lo
cual no concuerda con los datos de la presente
investigaciónpuestoquelosnivelesdeinfecciónde
son el resultado de diversos factores como: del
contactoentreelinóculodeunacepavirulenta,la
susceptibilidad de la cutícula del insecto a la
germinación,penetracióndeltubogerminativoyel
desarrollo del patógeno en la larva 24
. España 7
,
considera a la muda como un mecanismo de
defensa, por tanto es importante deenfrentar al
hongoconlarvasquemudanrecientemente.
CL90esde8.7x104
a8.1x105
conidios/mLteniendo
comola ecuaciónde larectaa 3E-07x+13.538;
mientrasquePereiraycol.19
,registraron3.16x105
conidios/mL de CL50 para la cepa CG144 de M.
anisopliae.
B.
bassiana
(CCB-LE265)
la
concentraciónletalmedia(CL50)ylaCL90fuede
3.6x106
y1.3 x107
conidios/mL respectivamente;
loslímites deconfianza(LC)para CL50es de2.1
x106a6.3x106conidios/mLyparaCL90esde7.3
x106
a 4.0 x107
conidios/mL teniendo como la
ecuacióndelarectaa7E-06x+1.9615 (Tabla3).
Los valores del TL50 y TL90 para M. anisopliae
(CCB-LE302) y B. bassiana (CCB-LE265), fueron
también determinados mediante el análisis de
Probit.EnlaTabla4,seobservaqueamedidaque
aumentalaconcentración,eltiempoquepasapara
matar el 50% y 90% dela población disminuye.
Paralaconcentración1.3x107
conidios/mLdeM.
anisopliae(CCB-LE302),esde1.1díasyelTL90de
2.4días;sinembargo,tambiénlaconcentraciónde
2.5x106
conidios/mLeseficazpuestoqueelTL50y
TL90esde2.1y3.9díasrespectivamente.ParaB.
bassiana (CCB-LE265), el TL50 y TL90 de la
concentración 1.3 x 106 conidios/mL es de 6.8 y
11.5días,mientrasqueparalaconcentración1.3x
107
conidios/mLelTL50yTL90esde1.7y4.0días
respectivamente,indicando suactividadvirulenta
en menos tiempo pero utilizando más esporas.
Bukhari y col. 2, reportó la baja virulencia de B.
bassiana al compararlo con M. anisopliae; esto
debidoaladiferenciaderapidezenelcrecimiento
vegetativo.
M.
anisopliae
posee
un
rápido
crecimiento vegetativo aunque a expensas de la
esporulación, mientras que B. bassiana tiene un
SA
LU
D
esporulación; sin embargo, el lento crecimiento
vegetativo puedeestar asociado conlaliberación
lenta de endotoxinas dentro del cuerpo larval,
insectos; así mismo, según Ibarra y col.13
,
mencionaquelosnivelesdemicosisvaríande un
géneroaotro.
disminuyendo el porcentaje demortalidad en los
CONCLUSIONES
M.anisopliae (CCB-LE302) yB.bassiana
(CCB-LE265)presentancapacidadbiocidasobrelarvas
delestadioIIIdeAe.aegypti encondicionesde
laboratorio.
La concentración de conidios que determina la
CL50 y CL90 de M. anisopliae (CCB-LE302) al
sexto día de aplicación es de 3.9x104
conidios
/mLy 1.6x105
conidios /mL sobre larvas III de
Ae.aegypti.
La concentración de conidios que determina el
TL50yelTL90de M.anisopliae (CCB-LE302)es
de 2.5x105
conidios /mL a los 2.7 y 5.4 días
respectivamenteyalaconcentraciónde2.5x107
conidios
/mL
es
de
1.1
y
2.4
días
respectivamente.
La CL50 y CL90 de B. bassiana (CCB-LE265)
obtenidasalquintodíadeaplicaciónsobrelarvas
III de Ae. aegypti. es de 3.6x106
y 1.3x107
conidios/mLrespectivamente.
ElTL50yelTL90deB.bassiana (CCB-LE265)ala
concentraciónde1.3x105conidios/mLesde9.1
y14.6díasrespectivamente,mientrasquepara
laconcentración1.3x107conidios/mLesde1.1y
3.1díasrespectivamente.
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