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Efecto Biocida de diferentes concentraciones de Metarhizium anisopliae ccb-le302 y Beauveria Bassiana CCB-LE265 sobre larvas III de Aedes Aegypti.

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(1)

SA

LU

D

Efecto

Biocida

de

diferentes

concentraciones

de

Metarhizium

anisopliae

ccb-le302

y

Beauveria

Bassiana

CCB-LE265

sobre

larvas

III

de

A

edes

Aegypti.

TheBiocidaleffect ofdiferente concentracionsof Metarhizium anisopliaeCCB- LE302andBeauveria BassianaCCB-LE265onlarvaeIII ofAedesaegypti.

ALCALDEMOSQUEIRA,JudithGeorgette1

; ROLDÁNRODRÍGUEZ,JudithEnit2

;SARAVIA

CUEVA, Verónicadel Pilar3

;COLLANTESSILVA,Luis4

RESUMEN

ElpresentetrabajoevaluóelefectobiocidadediferentesconcentracionesdeMetarhiziumanisopliae

CCB-LE302yBeauveriabassianaCCB-LE265sobrelarvasIIIdeAedesaegypti,encondicionesdelaboratorio.

Lascepas delos hongosfueronobtenidos de SENASA.LaslarvasdeA. aegypti,procedentes delcerro

Pesqueda,provinciaydistritodeTrujillo,fueronmantenidasatemperatura24±2ºCyhumedadrelativa

70%±10.Sediseñaron8gruposexperimentales, 4gruposcontroly5repeticionesde20larvascada

uno.ParaM.anisopliaeCCB-LE302,seutilizaronlasconcentraciones2.5x107

;2.5x106

;2.5x105

y2.5x104

conidios/mL; obteniéndose la CL50 y CL90 al 6

to

día de aplicación con 3.9x104 y 1.6x105 conidios/mL

respectivamente, sobre larvas III de Ae. aegypti. Para B. bassiana CCB-LE265, se utilizaron las

concentraciones1.3x107;1.3x106;1.3x105y1.3x104conidios/mL;obteniéndoselaCL50yCL90al5

to

díade

aplicacióncon3.6x106

y1.3x107

conidios/mL.Seconcluyequeloshongosentomopatógenosensayados

presentancapacidadbiocida.

Palabrasclave:Efectobiocida,MetarhiziumanisopliaeCCB-LE302,Beauveriabassiana

CCB-LE265,Aedesaegypti.

ABSTRACT

Inthepresentstudy,thebiocidaleffectofdifferentconcentrationsofMetarhiziumanisopliae CCB-LE302

andBeauveriabassiana CCB-LE265onlarvaeIIIofAedesaegypti inlaboratoryconditions.Bothstrainsof

fungiwereobtainedfromSENASA.ThelarvaeofA.aegypti,fromtheCerroPesqueda,ProvinceandDistrict

of Trujillo, kept at 24 ± 2º C and relative humidity of 70% ± 10. Bioassays were conducted with 8

experimentalgroups and4controlgroups,with5replicates of20 larvaeeach. For M.anisopliae

CCB-LE302,concentrationswere2.5x107,2.5x106,2.5x105and2.5x104conidia/mL,LC50andLC90obtainedon

thesixthdayofapplicationis3.9x104

conidia/mland1.6x105

conidia/mLonlarvaeIIIofAe.aegypti.ForB.

bassiana CCB-LE265,concentrationswere1.3x107,1.3x106,1.3x105and1.3x104conidia/mL,LC50and

LC90 obtained onthe fifthday of application is 3.6x10

6

and1.3x107 conidia/mL. It wasconcluded that

entomopathogenicfungihavebothabiocidalcapabilityagainstAe.aegypti.

Key words: biocideeffect,Metarhizium anisopliaeCCB-LE302, BeauveriabassianaCCB-LE265, Aedes aegypti.

1,4Biólogo.MsC.UniversidadNacionaldeTrujillo.revistaucv-scientia@ucv.edu.pe 2

3Biólogo.Dra.UniversidadNacionaldeTrujillo.revistaucv-scientia@ucv.edu.pe

(2)

SA

LU

D

INTRODUCCIÓN

Aedes aegypti (Diptera: Culicidae), considerado

vector de arbovirus presenta cuatro estadios:

huevo,larvas(I,II,IIIyIV),pupayadulto.

Su alimentación es succionando la savia de las

plantas; la hembra necesita además alimentarse

desangredepreferenciadehumanos8

.EnelPerú

actualmente la única forma de prevención es el

control vectorial 15

. El control biológico es una

alternativa ambiental y no inducen resistencia 14.

Entre l os hongos reportados como

entomopatógenos se encuentran los de la Clase

Deuteromycete,

Orden

Moniliales

y

Familia

Moniliaceae

como:

Metarhizium

anisopliae

y

Beauveriabassiana entreotros14

.

M. anisopliae, presenta conidióforos cilíndricos

ramificadosyconidiosdeformacilíndricaaovales

de5a7μm.Encultivopuro,presentauncolorque

varía desde el oliváceo hasta amarillo o verde

oscuro.Suciclodevidacomienzaconelconidioque

posee un apresorio, que coloniza el hemocele y

destruyeestructurasinternasdelinsecto;lashifas

del

hongo,

liberan

las

toxinas

destruxinas,

causando la muerte en un periodo variable

dependiendo de la cantidad de esporas que se

depositen sobre el mismo,temperatura, especie,

tamaño,edaddel insectoy virulenciade lacepa.

Estudios

histopatológicos

muestran

que

sus

toxinas ocasionandeshidrataciónpor pérdidas de

fluidos 14

. En condiciones de laboratorio se ha

demostradoqueM.anisopliaeactúacomo agente

controlador en larvas de Culex quinquefasciatus,

Culexpipiens,Ae.aegypti,Anophelesstephensiy Ae.albopictus 29,26

.Scholteycol.28

,reportaronasu

capacidad adulticida sobre Anopheles gambiae y

Cu.quinquefasciatus;así mismo,Mnyoneycol.17

demostraronlavirulenciaenhuevosdeAedes spp

delacepaM.anisopliaeIP46,ademásdesuefecto

biocida enadultos de A. gambiae sensustricto y

Anophelesarabiensis.Silvaycol.29

,registraronque

laconcentraciónde5x106

conidios/mLde las80

cepas

de

M.

anisopliae,

aisladas

de

suelos

estadodeGoiás-Brasil,indujeronentre10y100%

de mortalidad en larvas II de Ae. aegypti,

alcanzandoalas24horasel90%demortalidad.

B.

bassiana,

presenta

conidióforos

juntos

formando synemas. En cultivo puro, presenta

coloniasblancasquesevuelvencremadeaspecto

algodonoso.ElmododeinfeccióndeB.bassiana lo

realiza a través del tegumento 14

por acción de

enzimas, así como la destrucción de glóbulos

sanguíneos, acciones mecánicas, producción de

toxinasentreotrosfactores14

,siendofundamental

elreconocimientoycompatibilidadentreelconidio

ylascélulasdeltegumentodelinsecto22

.

Geetha y col. 9

, demostró la efectividad de B.

bassiana,sobrelarvasdeAe.aegypti yTrumany

col. 31

en larvas de Culex tarsalis, Cu. pipiens,

Anophelesalbimanus,Ae.aegypti,Ae.sierrensis y Ae. nigromaculis; sin embargo, Pereira y col 19

determinóel6%demortalidadconlacepaCG494

frenteal83%demortalidaddeCG24enlarvasde

segundo y tercer estadio larval de Ae. aegypti,

mientrasqueShandhuycol.25

hallaronlaineficacia

deB.bassianasobrelarvasdeAe.aegypti.Nunesy

col. 18

, demostraron que adultos A. gambiae, de

diferentes edades,sonsusceptibles a formulados

deaceitedeB.bassiana (I93-825),siendolosmás

susceptibles los que no fueron alimentados con

sangre. SegúnBukhari y col.2,registraronque B.

bassiana (IMI-391510)fuemenosefectivoqueM. anisopliae(ICIPE-30)sobrelarvasdeA.gambiaey A.

stephensi;

sin

embargo,

igualmente

susceptibles para A. stephensi y A. gambiae en

amboshongos.

Elpresentetrabajotuvocomofinalidadevaluarla

actividadbiocidadelasdiferentesconcentraciones

de

conidios

de

M.

anisopliae

CCB-LE302

y

Beauveria bassiana CCB-LE265, sobre larvas del

estadioIIIdeAe.aegypti enbasealporcentajede

mortalidad de larvas,

CL50 (concentración letal

media),CL90,TL50(tiempoletalmedio)yTL90en

condicionesdelaboratorio.

colectados en tres localidades diferentes en el

MATERIAL YMÉTODOS

1.Materialbiológico.

Larvas de Ae. aegypti estadio III fueron

colectadasdecriaderosnaturalesubicadosenel

cerro Pesqueda,distritoy provinciadeTrujillo,

departamentodeLaLibertad;trasladadasluego

en recipientes de plásticos al Laboratorio de

Artropodología Parasitaria de la Universidad

Nacional de Trujillo. L o s hongos

entomopatógenos

utilizados:

M.

anisopliae

(CCB-LE302)yB.bassiana (CCB-LE265)fueron

obtenidos

del

cepario

de

Hongos

EntomopatógenosdelaSubdireccióndeControl

BiológicoSENASA(ServicioNacionaldeSanidad

Agraria).AteVitarte,Lima–Perú.

2.Procedimiento.

2.1.CrianzadeAe.aegypti.

Los diferentes estadios larvales fueron

colocados

en

fuentes

de

plástico

conteniendo

agua

declorinada10 y

alimentadas

con

alimento

balanceado

“purina”encondicionesdeesterilidad.Las

pupas obtenidas fueron extraídas con

pipetasplásticasycolocadasenrecipientes

con agua, que permanecieron

al interior

de una jaula de metal cubierta con tela

organza y una abertura de 20 cm de

diámetro20

. Al emerger los adultos, la

(3)

SA

LU

D

.

sustancia azucarada al 10%, la que fue

embebidaenpedazosdealgodón.

Las

hembras

fueron

alimentadas

con

sangre de Mus musculus tres veces por

semana. Para la oviposición de adultos

hembra,dentro de la jauladecrianza,se

acondicionóunrecipienteconaguaypapel

filtro adherido en la parte interna de las

paredes del recipiente 20

. La crianza de

adultos

se

realizó

hasta

por

tres

generaciones con la finalidad de obtener

unacepapoblacional20

.Lascondicionesde

temperatura fueron 24 ± 2 ºC,humedad

relativade70%±10yfotoperiodode10

horasluzy14horasoscuridad.

2.2. Obtención de esporas de M. anisopliae

(CCB-LE302)

y

B.

bassiana

(CCB-LE265).

2.2.1.Preparacióndelmediodecultivo.

Se

preparó

el

medio

de

culti vo

Papa–Glucosa–Agar (PGA), suplementado

con cloranfenicol, para luego distribuirlo en

botellasplanasde50ml.

2.2.2.Siembra.

Loshongos M.anisopliae (CCB-LE302)yB.

bassiana (CCB-LE265)fueronsembradosen

botellasplanasconteniendoelmediocultivo

PGAincubadosa25±1ºCdurante10a15

días, hasta su completa esporulación para

losbioensayos4.

2.3.Evaluacióndelaactividadbiocida

2.3.1.Diseñodelbioensayo.

Para

M.

anisopliae

(CCB-LE302)

las

concentraciones fueron 2.5 x107

; 2.5 x 106

;

2 minutos, luego enjuagados tres veces con

agua destilada estéril y después colocados

sobre papel absorbente estéril. Enseguida

colocadosencámarahúmedaeincubadospor5

a7días.Lacámarahúmedaconsistióenplacas

petricuyointeriorsecolocópedazosdealgodón

estérilempapadosconaguadestiladaestéril10

.

Unavezqueelhongodesarrollósobreelinsecto

se

transfirió

a

placas

con

medio

PGA,

incubándolosa25±2ºCdurante3a5días10

,

tomando

muestras

para

observar

al

microscopio y determinar si las estructuras

pertenecenaloshongosentomapatógenos.

2.4.Determinacióndelamortalidad

2.4.1. Determinación de la mortalidad corregida

Losporcentajesdemortalidadluegode10días

de evaluación se corrigieron mediante la

fórmulade Abbott1

y los datos generados se

sometieron a un análisis de varianza y a la

pruebadegruposhomogéneos6

.

Lamortalidadcorregidafuecalculadasegúnla

fórmuladeABBOTT1

:

MC=[(%MT-%Mt)/(100-%Mt)]*100

Donde:

MC=Mortalidadcorregida

MT=Mortalidadeneltratamiento

Mt=Mortalidaddeltestigo

2.4.2.Determinacióndesignos

Seregistrólossignosdelarvasmuertascomo:

alteraciónenelcolordeltegumento,aparición

demicelioycambiosmorfológicosdelinsecto

2.5x105

y

2.5x104

conidios/mL,

control 14

positivo(Tween20al0.1%)ycontrolnegativo

(agua destilada). Para B. bassiana

(CCB-LE265),lasconcentracionesfueron1.3x107;

1.3 x106

; 1.3 x105

y 1.3 x104

conidios/mL.,

controlpositivo(Tween20al0.1%)ycontrol

negativo (agua destilada). Cada tratamiento

consistió en 5 repeticiones y cada unidad

experimentalpor20larvasdelestadioIII14.

2.3.2.Ejecucióndelbioensayo.

Cada unidad experimental consistió de 20

larvas del estadio III colocadosen vasos de

tecknopor,

conteniendo

90

mL

de

agua

destilada,luegoseagrególaconcentraciónde

esporas del entomopatógeno envolumen de

10mL.Laevaluaciónserealizócada24horas

durante 10 días. Los bioensayos fueron

sometidosacondicionesdetemperaturade26

± 1ºC y 84 ± 2% de humedad relativa,

registradosconuntermohigrómetro.

2.3.3.

Comprobación

de

la

actividad biocida.

Laslarvasmuertasfueronrecolectadasparaser

sumergidasenhipocloritodesodioal0.5%por

2.4.3.Determinación de CL50,CL90,TL50y

TL90

Mediante el conteo de larvas muertas del

estadioIIIde Ae.aegypti encadaunadelas

tratamientosdeM.anisopliae (CCB-LE302) y

de B. bassiana (CCB-LE265), se calculó los

promedios; los cuales, se utilizaron para la

determinacióndelaCL50(ConcentraciónLetal

media), CL90, TL50 (Tiempo Letal medio) y el

TL90medianteelprogramaestadísticoPROBIT

5.1.

2.5.Análisisderesultados3

Sedeterminóelanálisisdevarianza,eltest

de comparación múltiple de medias de

TukeyconP<0,05 utilizandoelprograma

estadísticoSPSS18paraWindowsyparael

análisisdeCL50,CL90,TL50yTL90,seutilizóel

(4)

SA

LU

D

2.5x10 conidios/mLdeM.anisopliae(CCB-LE302)

1.3x10 conidios/mLdeB.bassiana (CCB-LE265)y

*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.

Letrasdiferentesennegrita,representan

RESULTADOS

Elregistrodelporcentajepromediode mortalidad

de larvas III de Ae. aegypti, tratados a las mostrandotoxinas y lael cambionatural deinhibicióncolor endeel lategumentoquitina,

concentraciones

2.5x104

, 2.5x105

, 2.5x106

y (Figura1 –A). Lamicosis causadaños físicosde

7

y sudesviación estándar poblacional, el cual nos

representaladistribucióndelosdatosconrespecto

dela mediaaritmética sepresenta enlatabla 1.

Para la concentración 2.5x104

conidios /mL,

observamosqueelefectobiocidadelhongoiniciaa

partir del tercer día con un 4% de mortalidad

mientrasquepara2.5x105

conidios/mLfuede53%

de

mortalidad;

sin

embargo,

para

las

concentraciones2.5x106

y2.5x107

conidios/mLse

obtuvo71y100%demortalidadrespectivamente.

Alquintodía,seobservó85%demortalidadconla

concentración 2.5x105 conidios/mL;se alcanzó el

100% con las concentraciones2.5x106

y 2.5x107

conidios/mL.Enelsextodía,seobservóqueenel

porcentaje

de

mortalidad

existen

diferencia

estadísticas mínimas entre las concentraciones

2.5x105

,2.5x106

y2.5x107

conidios/mL.

Elregistrodelporcentajepromediode mortalidad

de larvas III de Ae. aegypti, tratados a las

tejidos y la deshidratación de las células por

pérdidadefluidos,causandolaflacidezdelcuerpo

delalarvaasícomolaseparacióndelacabezadel

tórax,reducción del tamañoy encorvamiento del

cuerpo(Figura1–B).Paralaobtencióndelhongo,

serealizócámarahúmedaalosinsectosmuertosy

luegodequeelhongocrecierasesembróenmedio

PGA(Figura1–C),observandoluegodecincodías

la presencia del hongo mediante la observación

microscópicaaaumento40x(Figura1–D).

Se registraron los mismos signos de las larvas

infectadasconB.bassiana(CCB-LE265),también

seobservóelcrecimientodemicelioenelcuerpode

lalarva(Figura2–A,B);asícomo,sucrecimiento

enmedio PGAy lasestructurastípicas del hongo

(Figura2–C,D).Medianteelanálisisde Probitse

determinó losvaloresde mortalidadmediantelas

CL50ydelasCL90deM.anisopliae (CCB-LE302)y B.bassiana (CCB-LE265)paralarvasdelestadioIII deAe.aegypti.ParaM.anisopliae(CCB-LE302)se

concentraciones

1.3x104

, 1.3x105

, 1.3x106

y realizóelanálisisalsextodíapuestoqueseobtuvo

7

sudesviaciónestándarsepresentaenlatabla2.

Enelprimerdía,sóloseobservalaacciónbiocida

de la concentración 1.3x107 conidios/mL con un

30%demortalidad,elporcentajedemortalidadse

incrementóconformeaumentabalaconcentración

de conidios y el tiempo se ve reducido. Con la

concentración 1.3x107

conidios/mL a partir del

cuartodíaseobservómortalidadmayora80%.

Porelcontrario,laconcentración1.3x104

conidios

/mL registró mortalidad menor o igual del 30%

hastaeldécimodíadeevaluación.

Laconcentración1.3x105conidios/mL,registró1%

demortalidadalcuartodíay56%demortalidadal

décimodía.

Lasconcentraciones1.3x104

y1.3x105

conidios/mL

nopresentandiferenciassignificativasperosientre

lasconcentraciones1.3x106

y1.3x107

conidios/mL,

siendo la más eficaz esta última. Las larvas

afectadas por M. anisopliae (CCB-LE302), a

diferentes

concentraciones,

presentaron

características anormales indicando la acción de

el 100% de mortalidad en las dos últimas

concentraciones.El control al50% (CL50) fue de

3.9E+04conidios/mLconlímitesdeconfianza de

1.9E+04 – 6.9E+04 conidios /mL y el control al

90% (CL90) fue de 1.6E+05 conidios /mL con

límites de confianza de 8.7E+04 – 8.1E+05

conidios /mL. La CL50 para B. bassiana

(CCB-LE265),fuede3.6E+06conidios/mLconlímitesde

confianza de 2.1E+06 –6.3E+06 conidios /mL y

CL90fue de1.3E+07 conidios /mLconlímites de

confianza de 7.3E+06 – 4.0E+07 conidios /mL

(Tabla 3). Los valores del TL50 y TL90 para M.

anisopliae (CCB-LE302) y B. bassiana

(CCB-LE265),fuerontambiéndeterminadosmedianteel

análisisdeProbit.ParaM.anisopliaeapartirdela

concentración2.5x105

conidios /mLtantoelTL50

comoelTL90presentaronvaloresmáscercanosa

la pendiente conforme se incrementaban las

concentraciones;sinembargo,paraB.bassiana el

TL50 y TL90 presento valores más cercanos a la

pendiente con la concentración 1.3x107

conidios

/mL(Tabla4).

Tabla1.PorcentajedelpromediodelarvasmuertasdelestadioIIIdeAedesaegypti

(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesdeMetarhiziumanisopliae (CCB-LE302)en condicionesdelaboratorio*.

TRATAMIENTOS(conidios/mL)

DIAS 2.5xA104 2.5xb105 2.5xb106 2.5xb107

%±S %±S %±S %±S

1 0±0 8±0.9 10±1.2 50±1.6

2 0±0 26±1.3 38±1.5 74±2.2

3 4±1.1 53±2.1 71±1.6 100±0

4 13±1.1 74±1.8 95±1.4 100±0

5 20±1.6 85±1.6 100±0 100±0

6 34±1.5 96±1.3 100±0 100±0

7 41±1.1 100±0 100±0 100±0

8 52±0.5 100±0 100±0 100±0

9 57±0.9 100±0 100±0 100±0

10 65±1.4 100±0 100±0 100±0

a,b

(5)

SA

LU

D

Tabla2.PorcentajedelpromediodelarvasmuertasdelestadioIIIdeAedesaegypti

(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesdeBeauveriabassiana(CCB-LE265)en condicionesdelaboratorio*.

TRATAMIENTOS(conidios/mL) DIAS 1.3x104

A 1.3x10

5

a 1.3x10

6

b 1.3x10

7 c

%±S %±S %±S %±S

1 0±0 0±0 0±0 30±0.7

2 0±0 0±0 0±0 54±2.8

3 0±0 0±0 0±0 73±2.9

4 0±0 1±0.4 15±0.7 89±1.8

5 0±0 1±0.4 22±0.9 98±0.5

6 15±1.6 16±0.4 39±1.1 100±0

7 19±1.1 29±0.8 49±1.1 100±0

8 22±0.5 39±1.5 62±0.9 100±0

9 26±0 46±1.3 74±0.8 100±0

10 30±0.7 56±1.8 86±1.6 100±0

*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.a,b,c

Letrasdiferentesennegrita,representan

diferenciassignificativassegúncomparaciónmúltipledemediasde Tukey,P<0.05.

Figura1.SignosenlarvasIIIdeAedesaegypti(n=100),expuestasalaespeciefúngicadeMetarhiziumanisopliae

(CCB-LE302) y aislamiento delhongo A.Separación de la cabeza deltórax; B. Cambio de coloren el tegumento;C.Crecimientodelmiceliosobreelcuerpodelinsecto;D.Presenciadehifas(Flechas).

(6)

SA

LU

D

(conidios/mL)

TL

Tiempo(Días)

LC

Ecuacióndela

Tabla3.Concentracionesletales(conidios/mL)al50%(CL50)y90%(CL90)ylímitesde

confianza(LC)deMetarhiziumanisopliae(CCB-LE302)yBeauveriabassiana(CCB-LE265) sobrelarvasIIIdeAedesaegypti(n=100),encondicionesdelaboratorio*.

Hongo CL Valor LC Ecuacióndela

recta

CL50 3.9E+04 1.9E+04–6.9E+04

M. anisopliae 3E-07x+13.538

CL90 1.6E+05 8.7E+04–8.1E+05

CL50 3.6E+06 2.1E+06–6.3E+06

B.bassiana 7E-06x+1.9615

CL90 1.3E+07 7.3E+06–4.0E+07

*Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.

Tabla4.Tiempoletal(días)al50%(TL50),límitesdeconfianza(LC)ypendientede

Metarhiziumanisopliae(CCB-LE302)yBeauveriabassiana(CCB-LE265)sobrelarvasIIIde

Aedesaegypti(n=100),expuestasadiferentesconcentracionesencondicionesde laboratorio*al95%deconfianza.

Hongo Concentraciones

recta

M.anisopliae 2.5x104 TL50 7.9

7.5-8.5 7.3091x - 17.855

TL90 16.3 14.3 – 19.4

B.bassiana 1.3 x 104 TL50 -

- 3.3909x- 10.164

TL90 -

-M.anisopliae 2.5 x 105 TL50 2.7

2.2-3.1 10.964x + 1.6727

TL90 5.4 4.6–6.9

B.bassiana 1.3x105 TL50 9.1

8.7-9.7 5.945x-18.582

TL90 14.6 13.2–16.8

M.anisopliae 2.5 x 106 TL50 2.1

1.5-2.7 10.082x + 13.509

TL90 3.9 2.9–6.5

B.bassiana 1.3 x 106 TL50 6.8

6.6 - 7.1 9.4x- 24.855

TL90 11.5 10.7–12.6

M.anisopliae 2.5 x 107 TL50 1.1

- 7.0727x + 41.564

TL90 2.4

-B.bassiana 1.3 x 107 TL50 1.7

1.1 - 2.1 8.936x+ 23.109

TL90 4.0 3.1 – 6.2

* Temperatura26±1ºC,Humedadrelativa84±2%.

DISCUSIÓN

Laaplicacióndediferentesconcentraciones deM.

anisopliae (CCB-LE302) y B. bassiana (CCB-

LE265)sobrelarvasdelestadioIIIdeAe.aegypti,

demostraronenelpresenteensayoservirulentas,

locualconcuerdaconestudiosdeScholteycol.27

,

por tal motivo son consideradas entre las más

importantes

de

la

Famlia

Deuteromycete.

Comparando la Tabla 1 y 2, M. anisopliae

(CCB-LE302) resultó ser más efectivo que B. bassiana

(CCB-LE265). M. anisopliae a la concentración

2.5x107

conidios/mLpresentóalprimer,segundoy

tercer día el 50, 74 y 100 % de porcentaje de

mortalidad acumulada, lo cual indica su alta

virulencia, esto concuerda con lo observado por

Silva y col.29

, quien indica que las mortalidades

larvalesdeculícidosseproducenentrelas24y48

horas;asímismo,elaltoporcentajedemortalidad

(7)

SA

LU

D

/mL

(Tabla

2).

Según

Rodrigues

y

col.

,

tegumento

.

Estos

síntomas

fisiológicos

.La concentraciónletal media(CL50) y laCL90

Miranpuri

y

col.

,

demostraron

una

gran

(CCB-LE265)

se

obtuvo

30%

de

mortalidad

acumuladaalprimerdíadeaplicar2.5x107

conidios

23

registraron que M. anisopliae LPP133 causó 50%

de mortalidaden hembras deAe. aegypti en3.5

horas demostrando ser más virulento que B.

bassiana.

Los

bioensayos

estuvieron

bajo

condiciones

ambientales

constantes

de

temperatura a25 ±1ºC y70 ±10 de humedad

relativa, factores importantes en las fases del

crecimientodelhongo 5

.No obstante,aúnnohay

evidenciassuficientesqueindiqueladependencia

delascondicionesambientalesylabiologíadelos

hongos, puesto que depende de la interacción

insecto-patógeno,

la

correcta

elección

de

la

partícula infectiva a producir, la formulación

adecuada a utilizar y la oportuna aplicación 14.

Hafezycol12

indicaquelaproducciónadecuadade

conidios debe realizarse bajo condiciones de

elevada humedad (70-80%) y temperatura

(20-30ºC).

Después

de

comparar

todas

las

concentraciones se observó que al sexto día las

concentraciones más altas alcanzaron más del

95% de mortalidad. La mortalidad a través del

tiempo originada a la concentración 2.5x107

conidios/mLdeM.anisopliae(CCB-LE302)notiene

diferencia significativa con las concentraciones

2.5x105

y2.5x106

conidios/mL,conlasquealcanzó

El efecto del hongo M. anisopliae (CCB-LE302)

demostrólapresenciadesignos(Figura1),donde

seregistrócambiosanormalescomoalteraciónen

eltamañodelalarva,laseparacióndelacabezay

eltóraxdelinsecto,laflacidezdel cuerpolarvaly

cambio de color en el tegumento. Las larvas se

tornarondecolornegro,debidoaladesintegración

detejidos ycambios en elpH de la hemolinfa22

. Para B. bassiana (CCB-LE265), se observaron

ademásdelossignosmencionados,elcrecimiento

de micelio y cambio de color rosado en el

22

anormales producidos por micosis lo describen

Téllezycol.30

.Lamuertedelinsectosobrevienepor

toxicosisydeshidratación;sinembargoelinsecto

enfrenta con diversos mecanismos de respuesta

del sistema inmune para lo cual los hongos han

desarrollado estrategias inmunosupresoras como

la producción de toxinas. Las principales toxinas

sonlasciclopeptídos,producidosporB.bassianay

M. anisopliae; siendo las más comunes las

destruxinasconactividadinsecticida.Sinembargo,

elcambiodecoloracióncausadoporB.bassiana es

el resultado de la acción de la micotoxina

oosperein, la cual posee pigmentos de colorrojo

quesonpocoliberadosenelinteriordelhemocele

11

para M. anisopliae (CCB-LE302) son de 3.9x104

el 96 y 100% de mortalidad, respectivamente. conidios/mL

y

1.6x105

conidios/mL

Entrelostratamientosde2.5x104

conidios/mLylas respectivamente;loslímitesdeconfianza(LC)para

concentraciones

2.5x105

, 2.5x106

y

2.5x107

CL50esde1.9x104

a6.9x104

conidios/mLypara

conidios/mL se observaron diferencias (P<0.05)

estoindicaquelamortalidadparaM.anisopliae no

dependedeltiemposinodelacantidaddeesporas

queinfectaalalarva.Enelcontrolpositivo(Tween

20)ynegativo(Aguadestilada),laslarvasllegaron

a cumplir suciclo biológico. La mortalidad de B.

bassiana (CCB-LE265) se compararon al quinto

día, donde se observó 98% de mortalidad a la

concentración 1.3x107

conidios/mL y a partir de

este

día

los

resultados

tienen

el

mismo

comportamiento.

Entre

los

tratamientos

de

1.3x104

,1.3x105

,1.3x106

y1.3x107

conidios/mLse

observaron

diferencias

(P<0.05)

los

cuales

alcanzaron 0, 1, 22 y 98% de mortalidad

respectivamente.Silvaycol.29

registraronel90%

demortalidadenlarvasIIdeAe.aegyptiyBukhari

y col. 2

demostró que B. bassiana fue menos

efectivo que M.anisopliae, locual concuerda con

los resultados obtenidos. La mortalidad por B.

bassiana(CCB-LE265)nodependedeltiemposino

delacantidaddeesporasqueinfectealalarva21.

Enelcontrolpositivo(Tween20)ynegativo(Agua

destilada)laslarvascumplieronsuciclobiológico.

16

efectividadde B. bassiana contra este insecto, lo

cual no concuerda con los datos de la presente

investigaciónpuestoquelosnivelesdeinfecciónde

son el resultado de diversos factores como: del

contactoentreelinóculodeunacepavirulenta,la

susceptibilidad de la cutícula del insecto a la

germinación,penetracióndeltubogerminativoyel

desarrollo del patógeno en la larva 24

. España 7

,

considera a la muda como un mecanismo de

defensa, por tanto es importante deenfrentar al

hongoconlarvasquemudanrecientemente.

CL90esde8.7x104

a8.1x105

conidios/mLteniendo

comola ecuaciónde larectaa 3E-07x+13.538;

mientrasquePereiraycol.19

,registraron3.16x105

conidios/mL de CL50 para la cepa CG144 de M.

anisopliae.

B.

bassiana

(CCB-LE265)

la

concentraciónletalmedia(CL50)ylaCL90fuede

3.6x106

y1.3 x107

conidios/mL respectivamente;

loslímites deconfianza(LC)para CL50es de2.1

x106a6.3x106conidios/mLyparaCL90esde7.3

x106

a 4.0 x107

conidios/mL teniendo como la

ecuacióndelarectaa7E-06x+1.9615 (Tabla3).

Los valores del TL50 y TL90 para M. anisopliae

(CCB-LE302) y B. bassiana (CCB-LE265), fueron

también determinados mediante el análisis de

Probit.EnlaTabla4,seobservaqueamedidaque

aumentalaconcentración,eltiempoquepasapara

matar el 50% y 90% dela población disminuye.

Paralaconcentración1.3x107

conidios/mLdeM.

anisopliae(CCB-LE302),esde1.1díasyelTL90de

2.4días;sinembargo,tambiénlaconcentraciónde

2.5x106

conidios/mLeseficazpuestoqueelTL50y

TL90esde2.1y3.9díasrespectivamente.ParaB.

bassiana (CCB-LE265), el TL50 y TL90 de la

concentración 1.3 x 106 conidios/mL es de 6.8 y

11.5días,mientrasqueparalaconcentración1.3x

107

conidios/mLelTL50yTL90esde1.7y4.0días

respectivamente,indicando suactividadvirulenta

en menos tiempo pero utilizando más esporas.

Bukhari y col. 2, reportó la baja virulencia de B.

bassiana al compararlo con M. anisopliae; esto

debidoaladiferenciaderapidezenelcrecimiento

vegetativo.

M.

anisopliae

posee

un

rápido

crecimiento vegetativo aunque a expensas de la

esporulación, mientras que B. bassiana tiene un

(8)

SA

LU

D

esporulación; sin embargo, el lento crecimiento

vegetativo puedeestar asociado conlaliberación

lenta de endotoxinas dentro del cuerpo larval,

insectos; así mismo, según Ibarra y col.13

,

mencionaquelosnivelesdemicosisvaríande un

géneroaotro.

disminuyendo el porcentaje demortalidad en los

CONCLUSIONES

M.anisopliae (CCB-LE302) yB.bassiana

(CCB-LE265)presentancapacidadbiocidasobrelarvas

delestadioIIIdeAe.aegypti encondicionesde

laboratorio.

 La concentración de conidios que determina la

CL50 y CL90 de M. anisopliae (CCB-LE302) al

sexto día de aplicación es de 3.9x104

conidios

/mLy 1.6x105

conidios /mL sobre larvas III de

Ae.aegypti.

 La concentración de conidios que determina el

TL50yelTL90de M.anisopliae (CCB-LE302)es

de 2.5x105

conidios /mL a los 2.7 y 5.4 días

respectivamenteyalaconcentraciónde2.5x107

conidios

/mL

es

de

1.1

y

2.4

días

respectivamente.

La CL50 y CL90 de B. bassiana (CCB-LE265)

obtenidasalquintodíadeaplicaciónsobrelarvas

III de Ae. aegypti. es de 3.6x106

y 1.3x107

conidios/mLrespectivamente.

 ElTL50yelTL90deB.bassiana (CCB-LE265)ala

concentraciónde1.3x105conidios/mLesde9.1

y14.6díasrespectivamente,mientrasquepara

laconcentración1.3x107conidios/mLesde1.1y

3.1díasrespectivamente.

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