Condiciones de acidez-pH de silaje destinado a la alimentación de rumiantes

Texto completo

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Facultad de Ciencias Veterinarias

-UNCPBA-

Condiciones de acidez-pH de silaje destinado a la

alimentación de rumiantes

González, María Andrea; Segui, Ricardo; Mogni, Silvina; Rubio, Roberto

Mayo, 2016

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Condiciones de acidez-pH de silaje destinado a la alimentación

de rumiantes

Tesina de la Orientación Sanidad Animal, presentada como parte de los requisitos para optar al grado de Veterinario del estudiante: González, María Andrea.

Tutor: Médico Veterinario, Segui Ricardo

Director: Ingeniero Agrónomo, Rubio Roberto A.

Co-director: Médica Veterinaria, Mogni Silvina

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Resumen

En la presente tesis, se analizó el pH y la acidez de un silaje de maíz del tambo La Tomasa, sobre la ruta 30, cercano a la ciudad de Tandil. Tanto en el silo como en el rumen se producen ácidos derivados del proceso de fermentación de los azúcares contenidos en el material y alimento. La disminución del pH en el silaje de maíz es responsable de la detención del proceso de deterioro del material ensilado. Para el mantenimiento del pH actúan sustancias llamadas buffer, las cuales regulan y conservan el valor de pH. Se realizaron tres ensayos, donde se analizaron dos parámetros en muestras de silaje: el pH con tiras reactivas comerciales, y acidez titulable con solución Dornic. El objetivo fue ver la presencia y variación de ácidos y de pH en las muestras a lo largo del tiempo posterior a la extracción del material, determinar cambios en muestras congeladas y no congeladas; y finalmente determinar el pH y la acidez en diferentes lugares de la pared del silo. El pH resultó similar en las distintas experiencias. El contenido de ácidos fue disminuyendo, sin implicar diferencias significativas a lo largo del tiempo. En las muestras congeladas y no congeladas se observó menor contenido de ácido en las muestras congeladas. Según la posición de donde se sacó la muestra, la posición superior tuvo menor contenido de ácidos. Referido al sector del silo se observaron diferencias en sector izquierdo vs el centro y el derecho muestreada. En conclusión, dependiendo del lugar donde se saca la muestra, hay variación del contenido de ácido. Se debe profundizar más el estudio del período de tiempo transcurrido entre la extracción y el análisis de la muestra, así como del tiempo transcurrido desde el descongelado y la titulación de la solución resultantes.

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Índice del Trabajo

Introducción ... 1

Hipótesis ... 2

Objetivo General ... 2

Objetivo Específico ... 2

Marco Teórico ... 3

Qué ácidos se producen ... 3

En el silaje ... 3

En el rumen ... 7

Cómo afecta el ácido al proceso fermentativo ... 8

Cómo se neutralizan los ácidos en el medio ruminal ... 9

Cómo desaparecen los ácidos del medio ruminal ... 9

Qué es la acidosis sub aguda ... 10

Marco Metodológico ... 11

Toma de Muestras ... 11

Análisis de Ácidos ... 11

Materiales y Método ... 12

Muestreo de silaje ... 12

Procedimiento del laboratorio ... 15

Ensayo 1 ... 15

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Ensayo 3 ... 16

Técnica ... 16

Cálculo realizado para determinar la concentración de ácido en la muestra de silaje ... 18

Análisis estadístico ... 18

Resultados ... 19

Ensayo 1 ... 19

Ensayo 2 ... 21

Ensayo 3 ... 21

Discusión ... 26

Conclusiones ... 28

Bibliografía ... 29

Anexo 1 ... 32

Anexo 2 ... 35

Índice de Fotografías

Fotografía 1: Zonas del Silo: Zona 1 y Zona 2 ... 12

Fotografía 2: Sectores muestreados en el silo de maíz ... 13

Fotografía 3: Tira de pH introducida en el interior del silo con la ayuda de objeto cortante ... 14

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Índice de Gráficos

Gráfico 1: Relación entre gramos equivalente (Eq) de ácido láctico en

100 gramos de materia fresca (MF) y los días en que se realizó en el ensayo 1. ... 19 Gráfico 2: Relación entre grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) y

y días en que se realizó el ensayo 1……… 20 Gráfico 3: Relación de g equivalente (Eq) de ácido láctico en 100 g

de materia fresca (MF) con las muestras de ensayo 3 según sus medias ... 24

Índice de Tablas

Tabla 1: Relación entre días 3, 5, 6, 7 y 10 y las medias de grados Dornic (°D) en

3,3g de materia fresca (MF)……… 20

Tabla 2: Relación entre media de gramos Eq de ácido láctico en 100g de materia fresca (MF) y el procedimiento realizado en la muestra

(congelada-no congelada) ... 21 Tabla 3: Comparación entre la media de materia seca (MS) y las

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vii Tabla 8: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de

materia fresca (MF) según su posición en que fueron sacadas las muestras. ... 23 Tabla 9: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de

materia fresca (MF) según su lado en que fueron sacadas las muestras ... 24 Tabla 10: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de

de materia seca (MS) según las muestras. ... 25 Tabla 11: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de

materia seca (MS) según su posición en que fueron sacadas las muestras. ... 25 Tabla 12: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de

materia seca (MS) según el lado en que fueron sacadas las muestras ... 25

Índice de Ilustraciones

Ilustración 1: Esquema simplificado de los sectores

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Introducción

En el bovino, el rumen presenta condiciones que favorecen a las bacterias celulolíticas y amilolíticas, las cuales intervienen en la degradación del alimento por medio de la fermentación, produciendo ácidos grasos volátiles útiles para el animal. Dependiendo del alimento que se le brinde, van actuar bacterias específicas encargadas de la degradación y la síntesis de proteína microbiana.

El silaje es un alimento que se produce y se conserva estratégicamente en condiciones de anaerobiosis, con alto contenido de humedad, bajo pH y con una determinada concentración de ácidos, lográndose así un alimento de alta, media o baja calidad para el bovino.

El silaje típicamente es utilizado en rumiantes para proveer fibra de alta calidad y reducir los riesgos de acidosis provocados por el uso de concentrados en la alimentación.

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Hipótesis

Los ácidos presentes en un silaje muestran variaciones en los distintos sectores del silaje.

Objetivo General

Observar el contenido de ácido en la masa de silaje.

Objetivo Específico

Medir la concentración de ácidos que poseen las muestras de silaje, en diferentes posiciones de la masa ensilada.

Medir el pH de la muestra de silaje.

Analizar qué cambios ocurren en la muestra a lo largo del tiempo transcurrido entre la extracción y la evaluación.

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Marco Teórico

Qué ácidos se producen

Los procesos fermentativos son medios de obtención de energía por parte de organismos en medios anaeróbicos. A diferencia de la respiración donde la presencia de oxígeno permite que este elemento sea el último receptor de hidrógenos derivado de la oxidación de carbohidratos, en la fermentación existen otros compuestos que se encargan de capturar los hidrógenos libres.

El aumento de los ácidos puede ser responsable de la acidificación del medio que inhibe la propia multiplicación bacteriana. Sin embargo son elementos de gran utilidad pues son fuente de energía en procesos aeróbicos.

En resumen, los ácidos se producen en procesos fermentativos, como mecanismos de captura del poder reductor. Tanto el silaje como la digestión ruminal, son procesos de degradación de compuestos orgánicos, por consecuencia de bacterias que fermentan el sustrato. El resultado de los procesos en el silo o en el rumen, es la aparición de ácidos orgánicos.

En el silaje

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4 el silaje permite disponer un gran volumen de alimento para cubrir estos baches (Rubio, 2016).

La mejor conservación del silaje se logra a partir de la fermentación láctica. La fermentación se realiza en condiciones anaeróbicas y las bacterias ácido lácticas son las que producen el ácido láctico, siendo este el más deseado a obtener. También se producen, en menor cantidad, ácido acético, y butírico. Al producirse estos ácidos, el pH del ensilado desciende y por lo tanto disminuyen todos los microorganismos (levaduras y enterobacterias), incluso aquellos que inducen a la putrefacción, que no sobreviven a la reducción del pH (Oude Elferink et al., 1999).

Dentro del silo, la respiración (proceso que se da en presencia de oxigeno) es perjudicial para el silaje; porque disminuye la calidad del mismo, ya que las reacciones entre nutrientes del ensilado, producen agua, dióxido de carbono y energía, que se pierden al medio aumentando la temperatura del silo. La respiración, además, permite la viabilidad de microorganismos nocivos para el silaje. La eliminación del oxígeno por compactación (proceso de elaboración del silo) disminuye el efecto indeseado de la respiración (Favre, 2012).

El proceso de la fermentación depende del tipo y calidad del forraje, y de la técnica empleada para la cosecha y para el ensilaje (Oude Elferink et al., 1999). Una vez que el material ya está almacenado, compactado y excluído de la presencia de aire, el proceso se puede dividir en cuatro fases:

1° Fase: Aeróbica

Esta fase dura pocas horas. Se produce la disminución de oxígeno, debido a la existencia de microorganismos aeróbicos y aeróbicos facultativos (como levaduras, hongos, clostridios y enterobacterias) que utilizan el oxígeno (Garcés Molina et al., 2004). Se genera además, a causa de la respiración, el aumento de la temperatura en un rango de 4°C a 6°C más que la temperatura ambiental (Ferrari y Alarcón, 2015). Hay actividad de enzimas vegetales, como las proteasas y carbohidrasas, que actúan hidrolizando las proteínas y los carbohidratos respectivamente, cuando el pH se mantiene en el rango de 6,5-6,0 (Garcés Molina et al., 2004).

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5 adecuada, el tipo del silo y el uso de silos con paredes de hormigón (Flores Calvete, 2004).

2° Fase: Fermentación

Cuando se llega a la ausencia de oxígeno, y se alcanza un ambiente anaeróbico, se da inicio a esta etapa. Su duración es de días a semanas dependiendo del material del ensilado y de las condiciones de temperatura, de humedad y de pH que le brinda el ambiente del silo. Las bacterias que producen ácido láctico serán la población dominante, y sus géneros son: Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostoc, Enterococcus, Lactococcus y Streptococcus. En su mayoría, son bacterias mesófilas que poseen mayor velocidad de crecimiento a temperaturas de entre 5° y 50 °C, con un óptimo entre 25° y 40 °C. Las bacterias son capaces de bajar el pH, a 4 y 5 dependiendo del forraje (Garcés Molina et al., 2004).

3° Fase: Estable o de almacenamiento

Dura desde semanas a más de un año (Flores Calvete, 2004). Es un período inactivo, la población microbiana se reduce, sobreviven las especies acidófilas y las esporas de los clostridios y bacilos. Sólo algunas enzimas carbohidrasas y proteasas, y bacterias como el Lactobacillus buchneri toleran el ambiente ácido, aun así disminuyen su actividad.

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6 Con respecto al género Bacillus, son bacterias aerobias facultativas que también forman esporas. Fermentan los carbohidratos produciendo ácidos orgánicos (ácido acético, ácido láctico y ácido butírico) o etanol, 2,3-butanodiol o glicerol. Son menos eficaces en la producción de ácido láctico y acético que las bacterias ácido lácticas. Algunas especies de Bacillus spp producen sustancias fungicidas que facilitan la inhibición del proceso de deterioro aeróbico en ensilajes, pero con excepción de estas especies, el desarrollo de los bacilos en el ensilaje es considerado como indeseable (Garcés Molina et al., 2004).

4° Fase: Deterioro Aerobio

Sucede en todos los ensilajes, al ser abierto o sellado incorrectamente o rasgado por algún animal. Los patos y gallaretas se posan sobre las bolsas y al picotear constantemente perforan el silo. Los roedores (ratas y ratones) rompen las bolsas por roído, se presenta como perforación más o menos circular, especialmente en las puntas y pliegues. Los armadillos (peludos, mulitas o pichi) rompen los silos en la zona de contacto con el suelo en laterales y en el piso. Los perros y zorros rompen las bolsas, con las uñas de las patas marcan el plástico que por contracciones y dilataciones se rasga en la parte superior (Wemun SA, 2015).

La fase aeróbica puede ser dividida en dos periodos.

 El primer período, se da por la acción de las levaduras y a veces por bacterias (producen ácido acético) que dan comienzo a la degradación de los ácidos orgánicos (ácido acético, ácido láctico y ácido butírico) que conservan el silaje. Este período favorece el aumento del pH y da inicio al segundo período de deterioro.

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7 riesgo, si son consumidos en altas concentraciones ya que sus toxinas afectan la salud del animal y de las personas (Garcés Molina et al., 2004). En un buen ensilaje, los hongos se desarrollan al inicio del almacenamiento y se limita a la capa exterior de la masa ensilada, pero durante el deterioro aeróbico (Extracción) todo el ensilaje puede ser invadido por hongos.

Para mejorar el proceso de fermentación existen en el mercado el uso de aditivos. Se encuentran aditivos inhibidores (ácido fórmico, formaldehido) y estimuladores (melaza, granos, enzimas e inoculantes bacterianos), de la fermentación (Jaurena, 2008).

En el rumen

Los rumiantes, previo al intestino, tienen el aparato digestivo dividido en cuatro compartimentos: retículo, rumen, omaso y abomaso. Sólo el último es secretor, es decir, produce enzimas capaces de degradar el alimento, al igual que el estómago de los monogástricos.

El rumen presenta microorganismos (bacterias, hongos y protozoarios) que viven en simbiosis y que son los responsables de los procesos fermentativos, donde a partir de los carbohidratos producen ácidos grasos volátiles (AGV) que serán utilizados por el animal hospedante.

La alimentación del rumiante está basada en forrajes (heno, silaje, pasto) y en alimentos concentrados (granos). En los granos, la mayor parte de los carbohidratos son no estructurales y se encuentran en el interior de la célula vegetal, entre ellos están: almidones, fructosanos y azúcares simples. En el forraje, la mayoría de los carbohidratos son estructurales y se hallan en la pared celular, ellos son: celulosa, hemicelulosa y pectina. Mientras que los carbohidratos estructurales de los forrajes son lentamente digeribles, el consumo de granos, con carbohidratos no estructurales son rápidamente digeribles genera una importante concentración de ácidos orgánicos (Febres y Vergara-López, 2007). Los carbohidratos complejos son unidades simples de glucosa y otros monosacáridos encadenados, que pueden tener o no cadenas laterales.

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8 celulolíticas están estimuladas por el consumo de alimentos fibrosos (heno, pasto) y las bacterias amilolíticas por el consumo de alimentos con alto contenido de almidón (granos básicamente) (Rubio, 2016).

Los hongos están en menor cantidad en comparación a los demás microorganismos y tienen actividad celulolítica (Relling y Mattioli, 2003).

Los protozoarios, se alimentan de bacterias amilolíticas manteniendo así el control de dicha población bacteriana. Poseen enzimas reductoras que actúan en la reducción de compuestos orgánicos a aminas (Anrique y Contreras, 2010).

La dieta influye sobre el tipo de bacteria presente en el rumen, ya que el tipo de alimento ingerido afecta el sustrato disponible, y puede afectar el pH del rumen (Van Lier y Regueiro, 2008). Las bacterias celulolíticas, protozoarios, bacterias metanógenas (productoras de metano) requieren un pH de 6,2 o mayor; y las bacterias amilolíticas son activas en condiciones más ácidas, cerca de un pH de 5,8. Cuando los valores de pH son aún menores de 5,8, actúan los lactobacilos productores de ácido láctico, desfavoreciendo a la población normal de microorganismos ruminales.

En la digestión fermentativa el piruvato sufre procesos reductivos donde da lugar a los productos terminales llamados: ácidos grasos volátiles (AGV): acético (CH3-COOH), propiónico (CH3-CH2-COOH) y butírico (CH3-CH2-CH2-COOH). También se producen: AGV de cadenas ramificadas (isovalerato, isobutirato, etc.), dióxido de carbono (CO2), metano (CH4), amoniaco (NH4+), y ocasionalmente ácido láctico

(Dean, 2014).

La producción de AGV depende de la composición de la ración, la frecuencia de alimentación, el pH del ambiente ruminal y de la actividad de los microorganismos ruminales.

Cómo afecta el ácido al proceso fermentativo

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9 aumentan por medio de los procesos fermentativos realizados por las bacterias, provocan la disminución del pH del medio.

Cómo se neutralizan los ácidos en el medio ruminal

Los rumiantes mantienen un rango de pH ruminal de 5,5-6,9 en el rumen (Relling y Mattioli, 2003). El mantenimiento del pH es el resultado de la producción y neutralización o eliminación de los protones hidrógenos en el medio ruminal; gracias a la capacidad buffer de la de saliva secretada, de los alimentos ingeridos y de los productos de la fermentación (Fernández Vazquéz, 2007).

La saliva secretada por el rumiante, posee un alto contenido en bicarbonatos de sodio y potasio y fosfatos con un pH 8,2 promedio le permite su acción buffer en el contenido ruminal. La cantidad de saliva producida depende del tiempo de masticación y rumia, del contenido de la pared celular, a mayor fibra, mayor tiempo de masticación y en consecuencia mayor volumen de saliva secretado (Niño Ramos, 2009).

Gracias a esta capacidad buffer se mantienen viables los microorganismos necesarios para la degradación y fermentación del alimento.

La capacidad buffer es producida por soluciones amortiguadoras, buffers o tampones. Son soluciones que reducen los cambios en la concentración de iones hidrógenos, es decir las variaciones de pH, cuando se le adicionan sustancias ácidas o alcalinas al medio. La solución amortiguadora se compone de una mezcla de un electrolito débil que puede ser ácido o alcalino y una sal de la misma que actúa como un electrolito fuerte (Blanco, 2006).

Cómo desaparecen los ácidos del medio ruminal

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10 AGV pasan al tracto digestivo posterior disueltos en el líquido ruminal, o adosados a la fracción sólida del alimento.

Qué es la acidosis sub aguda

La acidosis ruminal subaguda (SARA) es la reducción del pH por debajo de 5,8 durante un periodo de 6 horas o más (Rubio, 2014).

Las bacterias celulolíticas, protozoarios y bacterias metanogénicas son afectadas por este descenso del pH. Luego cuando los ácidos van disminuyendo se vuelve a la condición normal del rumen, donde el pH presenta valores normales (Rubio, 2016).

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Marco Metodológico

Toma de Muestras

Para caracterizar un silaje debemos tener en cuenta que la toma de muestra debe ser representativa de lo que el animal comerá (Alimentación, 2015). El muestreo, en el caso de silos puente o torta, debe efectuarse luego de seis semanas de haber sido confeccionado y para el silo bolsa 30 días; para que la fermentación haya llegado a ser estable (Fase 3 del proceso de formación del Silaje).También debemos contemplar que la muestra no debe tener signos de deterioro (Romero et al., 2004).

Previo a la toma de muestra hay que determinar la cantidad de submuestras y muestras que serán llevadas al laboratorio. Si es un silaje abierto, se debe tomar entre 10 y 15 submuestras, evitando la zona del piso y la superficial. Si es un silaje cerrado se debe tomar entre siete y 10 submuestras (Alimentación, 2015).

Las submuestras tomadas se mezclan, formando una muestra compuesta que se coloca en una bolsa evitando que quede aire en su interior. Se la rotula y se refrigera para el posterior envío al laboratorio (Alimentación, 2015). Realizar el análisis antes de las 12 horas de extraídas las muestras, de no poder realizarlo congelarlas hasta su utilización (Romero et al., 2004).

Análisis de Ácidos

Ward (2000) en el artículo “Fermentation analysis: Use and interpretation”, comenta que la muestra colocada en una bolsa y sellada sin aire y almacenadas a temperatura ambiente no presenta modificaciones cuando son evaluadas durante un período de días.

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Materiales y Método

Muestreo de silaje

La toma de muestra fue realizada en el campo “La Tomasa” ubicado en la zona de De la Canal, Ruta 30 a 31 km. de la ciudad de Tandil, el día 5 de marzo del 2016.

El silo a muestrear era un silo torta, elaborado en marzo del año 2015, con una altura aproximada a 3 metros.

Primero se eligió la zona a muestrear (Fotografía 1). Fotografía 1: Zonas del Silo: Zona 1 y Zona 2

La zona 1 fue elegida para extraer las muestras, siendo el sector donde fue cortado recientemente, observándose un color marrón claro, ver Fotografía 1. En comparación la zona 2, muestra un color marrón oscuro, como se observa en la Fotografía 1.

Cuando se examinó la zona 2, se pudo ver que llevaba un cierto tiempo expuesta al aire. Al remover el material expuesto y manipularlo, se notó una temperatura elevada, y un olor a rancio.

Las características organolépticas del sitio donde se tomaron las muestras, eran de un olor dulzón y un color beige o marrón claro.

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13 Fotografía 2: Sectores muestreados en el silo de maíz

Ilustración 1: Esquema simplificado de los sectores muestreados en el silo de maíz

Con la ayuda de un objeto cortante, se extrajo una capa de 10 cm aproximadamente y nuevamente con la ayuda del cuchillo se removió la zona y se sacó la muestra de silo que se colocó en una bolsa de plástico.

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14 frío, donde se la ubicó entre los conservantes que se encontraban congelados. El procedimiento se repitió con las muestras restantes.

Fotografía 3: Tira de pH introducida en el interior del silo con la ayuda de objeto cortante

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15 Fotografía 4: Medición del pH del sector 1 y sector 6.

Las muestras transportadas en la conservadora inmediatamente luego de colectadas, fueron llevadas a un freezer del edificio de Producción Animal de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNCPBA hasta su análisis.

Procedimiento del laboratorio

La experiencia tuvo una duración de 10 días, correspondiendo: día 1: toma de muestra y días 3, 5, 6, 7 y 10: días cuando se realizaron las determinaciones de laboratorio en los distintos ensayos.

Ensayo 1

El ensayo 1 tuvo como objetivo comparar el contenido de ácido y pH a lo largo de los días en que se realizaron los procedimientos del laboratorio. Las muestras de silaje analizadas en el laboratorio consistieron en el conjunto de muestras que fueron extraídas del sector 1 y se realizó la evaluación los días 3, 5, 6, 7 y 10 posteriores a la extracción de la masa de silaje.

Ensayo 2

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16 inmediatamente, luego se continuó con las no congeladas, las cuáles fueron retiradas del freezer a las 8 horas. En el día 7 se repitió el análisis.

Ensayo 3

El ensayo 3 tiene como objetivo analizar las muestras tomadas de los distintos sectores (1, 2, 3, 4, 5 y 6) comparando los valores de la materia seca (MS), contenido de ácido y pH. Todas las evaluaciones se realizaron en el día 10. Se analizaron las muestras de los sectores 1, 2, 3, 4, 5 y 6.

Las muestras fueron retiradas del freezer a las 8 horas de la mañana y llevadas al laboratorio en la conservadora con conservantes. Se las situó a temperatura ambiente hasta que se descongelen y luego se las volvió a la conservadora.

De cada muestra de los sectores 1, 2, 3, 4, 5 y 6, se extrajo una porción y se calculó la materia seca (MS) de cada una.

Se inició con la muestra 1, luego de tomar una alícuota de 25 gramos la muestra fue reintroducida a la conservadora. Se prosiguió con la muestra 2, hasta finalizar con la 6°.

Técnica

La técnica utilizada para determinar la cantidad de ácido presente en las distintas muestras de silo de maíz fue la de titulación de acidez y medición de pH.

Materiales y Equipos

Muestra de silaje de maíz Agua destilada

Fenolftaleína

Solución Dornic (Hidróxido de Sodio 0,1 N) Balanza analítica

Agitador magnético

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17 Probeta de 250 ml y de 50 ml

3 vasos de precipitado

Tiras reactivas comerciales de pH Acidímetro de Dornic

Procedimiento experimental

1. Extraer de la muestra de silaje de maíz una alícuota de 25 gramos. 2. Pesar 200 gramos de agua destilada.

3. Mezclar la alícuota de 25 gramos con 200 gramos de agua destilada con un agitador magnético por dos minutos.

4. Filtrar la muestra, y con la ayuda de una mano (o pilón) del mortero aplastar el material que está en el filtro por un minuto.

5. Medir el contenido del filtrado con una probeta de 250 ml. 6. Mezclar

7. Medir 30 ml con una probeta de 50 ml. Pasarlo a un vaso precipitado. 8. Repetir dos veces el punto 6 y 7. Para obtener tres sub-muestras

(triplicado).

9. Con el sobrante medir el pH con tiras de pH y registrar.

10. Colocar en una de las sub-muestras, de 30 ml, dos gotas de fenolftaleína. 11. Enrasar el acidímetro de Dornic.

12. Con el acidímetro Dornic, agregar gota a gota la solución de Dornic agitando continuamente el vaso precipitado.

13. Cuando la solución toma color rosado se detiene el goteo, y se registra los grados Dornic obtenidos.

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Cálculo realizado para determinar la concentración de ácido en la muestra de silaje

Luego de haberse realizado el procedimiento en el laboratorio, se obtuvieron en la titulación valores en grados Dornic (°D), lo que permitió calcular la cantidad de ácido presente en la muestra de silaje.

La relación que se utilizó consistió en 1° D equivalente a 1 mg de ácido láctico (Facultad de Medicina, 2003).

Se utilizó el equivalente (Eq) a ácido láctico, pues no se diferenció con los demás ácidos del silaje, debido al costo de realizar la técnica de cromatografía, con la que se hubiera podido realizar la diferenciación.

Análisis estadístico

Para el análisis de datos de los ensayos se realizó una estadística descriptiva. Los datos del ensayo 1 fueron analizados mediante un análisis de regresión, los datos del ensayo 2 mediante análisis de varianza con test de Tukey para la separación de medias. Y por último, el ensayo 3 mediante análisis de varianza con test de Tukey para la separación de medias.

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Resultados

Ensayo 1

Las muestras fueron comparadas en los días 3, 5, 6, 7 y 10. En el Gráfico 1 se muestran las medias de la relación del contenido de gramos Eq de ácido láctico en 100 g de materia fresca (MF) con los días donde se hicieron los procedimientos. En el día 3 se puede observar valores mayores en comparación con el día 5. En los días 6 y 7 se observan una disminución de los valores. Y en el día 10 se observa que se encuentran aumentados en comparación del día 6 y 7, pero no mayor a los del día 3 y 5.

Gráfico 1: Relación entre gramos equivalente (Eq) de ácido láctico en 100 gramos de materia fresca (MF) y los días en que se realizó en el ensayo 1.

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20 Gráfico 2: Relación entre grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) y días en que se realizó el ensayo 1

En la Tabla 1 se resumieron los valores de las medias de los grados Dornic (°D), como se observó en el Gráfico 2, el día 3 presenta el mayor valor y el día 6 el menor valor (72°D y 66,7 °D respectivamente).

Tabla 1: Relación entre días 3, 5, 6, 7 y 10 y las medias de grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF).

°D en 3,3 g de MF

Día n Media D.E.

3 9 72,0 1,22

5 15 69,8 3,04

6 9 66,7 2,49

7 9 67,2 1,87

10 9 70,8 1,2

D.E.: Desvío Estándar de la media °D: Grado Dornic

n: Número de muestras consideradas

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Ensayo 2

El contenido de ácidos (g Eq ácido láctico en 100g de MF de muestra) fue menor en las muestras congeladas que en las no congeladas (1,86 vs 2,02 respectivamente). Ver Tabla 2.

Tabla 2: Relación entre media de gramos Eq de ácido láctico en 100g de materia fresca (MF) y el procedimiento realizado en la muestra (congelada-no congelada)

Error: 0,0117 gl: 14

Procedimiento Medias n

Congelada 1,86 9 A

No Congelada 2,02 9 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas (p<0,05)

Los valores de pH registrados en ambas muestras se mantuvieron en el rango de 3-4.

Ensayo 3

En el análisis se comparó los valores de medias de la MS; de la posición de “arriba” que son los sectores 4, 5 y 6, y de la posición de “abajo” que son los sectores 1, 2 y 3 (Ilustración 1). No se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el contenido de MS% en muestras tomadas en la posición de “arriba” (35,21%) comparadas con la posición de “abajo” (32,20%) Ver Tabla 3.

Tabla 3: Comparación entre la media de materia seca (MS) y las posiciones arriba y abajo del silo muestreado.

Error: 20,4728 gl: 4

Posición Medias n p>0.05

Abajo 32,20 3 NS

Arriba 35,21 3 NS

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas (p<0,05) NS: No hay diferencias significativas

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22 Tabla 4: Valores de medias de grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) en cada muestra.

Error: 3,7947 gl: 46

Muestras Medias n

6 54,22 9 A

4 62,89 9 B

5 66,67 9 C

2 70,33 9 D

1 70,78 9 D

3 71,78 9 D

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas (p<0,05)

Esta circunstancia obliga a analizar los datos en forma diferente entre los lados “izquierdo”, “derecho” y “centro” del frente del silaje analizado, así como “arriba” y “abajo” del muestreo (Ilustración 1).

Se observa en la Tabla 5, que los lados “derecho” e “izquierdo” no presentan diferencias significativas (p>0,05) en los valores de las medias de los grados Dornic.

Tabla 5: Valores de medias de grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) según el lado donde fue sacada la muestra.

Error: 3,8460 gl: 44

Lado Medias n

Izquierdo 62,50 18 A

Derecho 67,33 18 B

Centro 68,50 18 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

En la Tabla 6 se exhiben los valores de las medias de los grados Dornic según su posición, en ambas posiciones se distingue la diferencia de valores, siendo de mayor valor de media la posición de “abajo” con un valor de 70,96°D.

Tabla 6: Valores de medias de grados Dornic (°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) según posición que fueron sacadas las muestras

Error: 3,8460 gl: 44

Posición Medias n

Arriba 61,26 27 A

Abajo 70,96 27 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

(30)

23 de dicha posición son distintos entre sí y a su vez también distintos con la posición de “abajo”. La posición de “abajo”, presenta valores que no muestran diferencias significativas (p>0,05) en sus distintos lados como se muestra en la Tabla 7.

Tabla 7: Valores de medias de grados Dornic(°D) en 3,3 g de materia fresca (MF) y gramos de Eq ácido láctico según posición y lado donde fueron sacadas las muestras.

Posición Lado Muestra

Valores Medios en cada sector Grados Dornic en 3,3

g de MF

Gramos de Eq ácido

láctico/100g MS n

Arriba Izquierdo 6 54,22 1,63 9 A

Arriba Derecho 4 62,89 1,89 9 B

Arriba Centro 5 66,67 2,00 9 C

Abajo Centro 1 70,33 2,09 9 D

Abajo Izquierdo 2 70,78 2,11 9 D

Abajo Derecho 3 71,78 2,15 9 D

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

Los valores promedios de los contenidos de Eq ácido láctico en base fresca fueron similares en las muestras 1, 2 y 3 (muestras de “abajo”) y significativamente superiores (p<0,05) a los promedios de las muestras 4, 5 y 6. Estas últimas muestras fueron diferentes entre sí (p<0,05), con la muestra 6 en la que el tenor de Eq ácido láctico fue menor (Tabla 7y Gráfico 3).

Cuando las muestras fueron analizadas agrupadas de acuerdo a la posición que ocupaban en el silo(“arriba” o “abajo”), el valor de Eq de ácido láctico(promedio de los 3 lados dentro de cada posición) fue mejor en la posición de “abajo”(Tabla 8).

Tabla 8: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de materia fresca (MF) según su posición en que fueron sacadas las muestras.

Error: 0,0039 gl: 46

Posición Medias n

Arriba 1,84 27 A

Abajo 2,12 27 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

(31)

24 Tabla 9: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de materia fresca (MF) según su lado en que

fueron sacadas las muestras

Error: 0,0039 gl: 46

Lado Medias n

Izquierdo 1,86 18 A

Derecho 2,02 18 B

Centro 2,06 18 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

El Gráfico 3, representa un “gráfico de caja” donde se presentan las medias en las muestras (Tabla 8). La muestra 6 exhibe valores de gramos Eq de ácido láctico menores al resto de las muestras. Las muestras 1, 2 y 3 se observan con escasa diferencia.

Gráfico 3: Relación de g equivalente (Eq) de ácido láctico en 100 g de materia fresca (MF) con las muestras de ensayo 3 según sus medias

(32)

25 Tabla 10: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de materia seca (MS) según las muestras.

Error: 0,0320 gl: 44

Muestras Medias n

6 3,88 9 A

4 6,07 9 B

1 6,13 9 BC

5 6,14 9 BC

2 6,37 9 C

3 7,33 9 D

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

Al analizar las muestras de acuerdo a la posición, según el contenido de ácidos (g Eq de ácido láctico en 100 g MS de muestra) la Tabla 11 indica que la posición “abajo” es mayor a la posición “arriba” (6,61 y 5,36 respectivamente).

Tabla 11: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de materia seca (MS) según su posición en que fueron sacadas las muestras.

Error: 0,0314 gl: 46

Posición Medias n

Arriba 5,36 27 A

Abajo 6,61 27 B

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

Cuando las muestras se agruparon para su análisis de acuerdo a sus lados según el contenido de ácido (g Eq ácido láctico en 100 g MS de muestra), el lado “izquierdo” resultó de menor valor y el lado “derecho” de mayor valor (Tabla 12). Tabla 12: Valores de medias de g Eq de ácido láctico en 100 g de materia seca (MS) según el lado en que fueron

sacadas las muestras

Error: 0,0314 gl: 46

Lado Medias n

Izquierdo 5,00 18 A

Centro 6,26 18 B

Derecho 6,70 18 C

gl: Grado de Libertad

n: Número de muestras consideradas

Letras distintas indican diferencias significativas(p<0,05)

(33)

26

Discusión

Cuando se comparan los ácidos en los días 3, 5, 6, 7 y 10, se observa que el día 3 resultó un mayor valor de ácido en comparación con el día 5; en los días 6 y 7 hay una disminución del contenido de ácido y en el día 10 se encuentran aumentados en comparación de los días 6 y 7, pero no mayor a los del día 3 y 5 (Gráfico 1). Se puede ver, entonces, que hay variaciones de contenido de ácido, disminuyendo la cantidad de ácidos pero no significativamente a través de los días desde que fue tomada la muestra. Este cambio de contenido de ácidos, no tienen una explicación posible que pueda darse ni tampoco se diseñó un ensayo que lo permita determinar, el cual puede ser motivo para otro trabajo de investigación.

Conociendo las condiciones de pH y acidez del silaje, mejoramos la calidad del mismo. Ambas condiciones, permiten mantener el ambiente del silaje óptimo sin que llegue a la putrefacción del mismo. Subsistiendo un pH bajo y un grado de acidez alto, los microorganismos que deterioran el silaje no pueden subsistir. Las mediciones de pH en el campo y en el laboratorio se mantuvieron en el rango. En el ensayo 3, la muestra 6 fue la excepción, donde el pH que se obtuvo fue 4. A la hora de examinar la muestra 6 se notaron un cambio de olor (rancio) y de color (marrón oscuro). La muestra 6 fue extraída de la posición de “arriba” de la zona del silo, donde se podría decir que la causa de este aumento de pH se deba a que se encontraba muy cerca de la zona expuesta a las condiciones del medio externo, correspondiendo esto a la fase 4 donde se inicia el deterioro del silaje. Otra causa posible es que a medida que se va llenando el silo, los maíces son distintos y por lo tanto el estado del maíz de la parte superior provocó que el silaje logrado fuera peor. La muestra 6, indica un valor superior de pH al de las demás muestras, pudiendo concluir que no es la misma calidad de silaje ya que a mayor pH los microorganismos a actuar van a resultar levaduras, mohos y bacterias, que deterioran el silaje, aun cuando no sea considerable la diferencia de pH con el de los demás sectores, es decir entre pH 4 de la muestra 6 y pH 3-4 del resto de las muestras.

(34)

27 y los ácidos no disociados; dependiendo de las sustancias buffer que actúen. Las sustancias buffer actúa controlando la cantidad de protones libres del medio y así lograr que el cambio de pH no sea tan brusco y que permanezca estable. Por lo tanto se puede tener aumento o disminución de ácidos a un pH estable.

La comparación de las muestras congeladas y no congeladas, permite verificar que hay diferencias entre ambas, la cantidad de ácido da mayor en las muestras no congeladas. La muestra congelada presenta menor cantidad de ácidos titulable, esto pueda deberse a que el ácido se liberó parcialmente del material congelado a la hora de mezclar con agua por dos minutos en el procedimiento del laboratorio, mientras que la muestra no congelada se mezcla con el agua liberando el ácido que presenta en el material.

(35)

28

Conclusiones

El análisis de las muestras de silo para la determinación de ácidos presenta modificaciones a lo largo de los días transcurridos posterior a la toma de la muestra, por esto sería conveniente que se realice en un día el análisis de las muestras.

Las muestras del silo, a la hora de ser manipuladas para trabajar en el laboratorio proporcionan resultados diferentes, entre las muestras congeladas y no congeladas.

(36)

29

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(39)

32

Anexo 1

Día Muestras Sub

muestras Alicuotas

gramos de silaje fresco gramos de agua volumen alicuota Grados Dornic mg Eq de ácido láctico

mg Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en 100 g MF

3 1 1 1 25 200 30 75 75 562,5 0,563 2,25

3 1 1 2 25 200 30 72 72 540,0 0,540 2,16

3 1 1 3 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13

3 1 2 1 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13

3 1 2 2 25 200 30 72 72 540,0 0,540 2,16

3 1 2 3 25 200 30 72 72 540,0 0,540 2,16

3 1 3 1 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13

3 1 3 2 25 200 30 72 72 540,0 0,540 2,16

3 1 3 3 25 200 30 72 72 540,0 0,540 2,16

5 3 1 1 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

5 3 2 1 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

5 3 3 1 25 200 30 75 75 562,5 0,563 2,25

5 3 4 1 25 200 30 70 70 525,0 0,525 2,10

5 3 5 1 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

5 3 1 2 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07

5 3 2 2 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

5 3 3 2 25 200 30 76 76 570,0 0,570 2,28

5 3 4 2 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13

5 3 5 2 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

5 3 1 3 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

5 3 2 3 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

5 3 3 3 25 200 30 74,5 74,5 558,8 0,559 2,24

5 3 4 3 25 200 30 70 70 525,0 0,525 2,10

5 3 5 3 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

6 4 1 1 25 200 30 64 64 480,0 0,480 1,92

(40)

33 Día Muestras Sub

muestras Alicuotas

gramos de silaje fresco gramos de agua volumen alicuota Grados Dornic mg Eq de ácido láctico

mg Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en 100 g MF

6 4 1 3 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89

6 4 2 1 25 200 30 61 61 457,5 0,458 1,83

6 4 2 2 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89

6 4 2 3 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89

6 4 3 1 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89

6 4 3 2 25 200 30 64 64 480,0 0,480 1,92

6 4 3 3 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89

6 2 1 1 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

6 2 1 2 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07

6 2 1 3 25 200 30 70 70 525,0 0,525 2,10

6 2 2 1 25 200 30 62 62 465,0 0,465 1,86

6 2 2 2 25 200 30 65 65 487,5 0,488 1,95

6 2 2 3 25 200 30 64,5 64,5 483,8 0,484 1,94

6 2 3 1 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

6 2 3 2 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

6 2 3 3 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

7 5 1 1 25 200 30 61 61 457,5 0,458 1,83

7 5 1 2 25 200 30 60,5 60,5 453,8 0,454 1,82

7 5 1 3 25 200 30 61 61 457,5 0,458 1,83

7 5 2 1 25 200 30 55 55 412,5 0,413 1,65

7 5 2 2 25 200 30 58 58 435,0 0,435 1,74

7 5 2 3 25 200 30 56,5 56,5 423,8 0,424 1,70

7 5 3 1 25 200 30 67,5 67,5 506,3 0,506 2,03

7 5 3 2 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

7 5 3 3 25 200 30 70 70 525,0 0,525 2,10

7 5 1 1 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01

7 5 1 2 25 200 30 66,5 66,5 498,8 0,499 2,00

7 5 1 3 25 200 30 68 68 510,0 0,510 2,04

(41)

34 Día Muestras Sub

muestras Alicuotas

gramos de silaje fresco

gramos de agua

volumen alicuota

Grados Dornic

mg Eq de ácido

láctico

mg Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en 100 g MF

7 5 2 2 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07

7 5 2 3 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07

7 5 3 1 25 200 30 69,5 69,5 521,3 0,521 2,09

7 5 3 2 25 200 30 64 64 480,0 0,480 1,92

(42)

35

Anexo 2

Día Muestras Sub

muestras Alicuotas

gramos de silaje fresco gramos de agua volumen alicuota Grados Dornic

mg Eq de ácido láctico

mg Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en 100 g MF

% MS

g Eq de ácido láctico en 100 g MS

Posición Lado

10 1 1 1 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07 34,12 6,07 Abajo Izquierda

10 1 1 2 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 34,12 6,24 Abajo Izquierda

10 1 1 3 25 200 30 72 72 540 0,540 2,16 34,12 6,33 Abajo Izquierda

10 1 2 1 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 34,12 6,24 Abajo Izquierda

10 1 2 2 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07 34,12 6,07 Abajo Izquierda

10 1 2 3 25 200 30 70 70 525 0,525 2,10 34,12 6,15 Abajo Izquierda

10 1 3 1 25 200 30 71 68 510 0,510 2,04 34,12 5,98 Abajo Izquierda

10 1 3 2 25 200 30 72 68 510 0,510 2,04 34,12 5,98 Abajo Izquierda

10 1 3 3 25 200 30 72 69 517,5 0,518 2,07 34,12 6,07 Abajo Izquierda

10 2 1 1 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 33,11 6,43 Abajo Centro

10 2 1 2 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 33,11 6,43 Abajo Centro

10 2 1 3 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 33,11 6,43 Abajo Centro

10 2 2 1 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01 33,11 6,07 Abajo Centro

10 2 2 2 25 200 30 70 70 525 0,525 2,10 33,11 6,34 Abajo Centro

10 2 2 3 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 33,11 6,43 Abajo Centro

10 2 3 1 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01 33,11 6,07 Abajo Centro

10 2 3 2 25 200 30 72 72 540 0,540 2,16 33,11 6,52 Abajo Centro

10 2 3 3 25 200 30 73 73 547,5 0,548 2,19 33,11 6,61 Abajo Centro

10 3 1 1 25 200 30 74 74 555 0,555 2,22 29,38 7,56 Abajo Derecho

10 3 1 2 25 200 30 73 73 547,5 0,548 2,19 29,38 7,45 Abajo Derecho

10 3 1 3 25 200 30 73 73 547,5 0,548 2,19 29,38 7,45 Abajo Derecho

10 3 2 1 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 29,38 7,25 Abajo Derecho

10 3 2 2 25 200 30 70 70 525 0,525 2,10 29,38 7,15 Abajo Derecho

10 3 2 3 25 200 30 71 71 532,5 0,533 2,13 29,38 7,25 Abajo Derecho

10 3 3 1 25 200 30 70 70 525 0,525 2,10 29,38 7,15 Abajo Derecho

10 3 3 2 25 200 30 72 72 540 0,540 2,16 29,38 7,35 Abajo Derecho

(43)

36 Día Muestras Sub

muestras Alicuotas

gramos de silaje fresco gramos de agua volumen alicuota Grados Dornic

mg Eq de ácido láctico

mg Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en

225g

g Eq de ácido láctico en 100 g MF

% MS

g Eq de ácido láctico en 100 g MS

Posición Lado

10 4 1 1 25 200 30 64 64 480 0,480 1,92 31,10 6,17 Arriba Derecho

10 4 1 2 25 200 30 62 62 465 0,465 1,86 31,10 5,98 Arriba Derecho

10 4 1 3 25 200 30 62 62 465 0,465 1,86 31,10 5,98 Arriba Derecho

10 4 2 1 25 200 30 61 61 457,5 0,458 1,83 31,10 5,88 Arriba Derecho

10 4 2 2 25 200 30 62 62 465 0,465 1,86 31,10 5,98 Arriba Derecho

10 4 2 3 25 200 30 61 61 457,5 0,458 1,83 31,10 5,88 Arriba Derecho

10 4 3 1 25 200 30 65 65 487,5 0,488 1,95 31,10 6,27 Arriba Derecho

10 4 3 2 25 200 30 66 66 495 0,495 1,98 31,10 6,37 Arriba Derecho

10 4 3 3 25 200 30 63 63 472,5 0,473 1,89 31,10 6,08 Arriba Derecho

10 5 1 1 25 200 30 66 66 495 0,495 1,98 32,57 6,08 Arriba Centro

10 5 1 2 25 200 30 64 64 480 0,480 1,92 32,57 5,89 Arriba Centro

10 5 1 3 25 200 30 64 64 480 0,480 1,92 32,57 5,89 Arriba Centro

10 5 2 1 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07 32,57 6,36 Arriba Centro

10 5 2 2 25 200 30 68 68 510 0,510 2,04 32,57 6,26 Arriba Centro

10 5 2 3 25 200 30 69 69 517,5 0,518 2,07 32,57 6,36 Arriba Centro

10 5 3 1 25 200 30 65 65 487,5 0,488 1,95 32,57 5,99 Arriba Centro

10 5 3 2 25 200 30 68 68 510 0,510 2,04 32,57 6,26 Arriba Centro

10 5 3 3 25 200 30 67 67 502,5 0,503 2,01 32,57 6,17 Arriba Centro

10 6 1 1 25 200 30 51 51 382,5 0,383 1,53 41,96 3,65 Arriba Izquierda

10 6 1 2 25 200 30 52 52 390 0,390 1,56 41,96 3,72 Arriba Izquierda

10 6 1 3 25 200 30 51 51 382,5 0,383 1,53 41,96 3,65 Arriba Izquierda

10 6 2 1 25 200 30 52 52 390 0,390 1,56 41,96 3,72 Arriba Izquierda

10 6 2 2 25 200 30 53 53 397,5 0,398 1,59 41,96 3,79 Arriba Izquierda

10 6 2 3 25 200 30 53 53 397,5 0,398 1,59 41,96 3,79 Arriba Izquierda

10 6 3 1 25 200 30 58 58 435 0,435 1,74 41,96 4,15 Arriba Izquierda

10 6 3 2 25 200 30 59 59 442,5 0,443 1,77 41,96 4,22 Arriba Izquierda

Figure

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Referencias

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