OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN

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OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN

Unidad del Centro de Control de Insumos y Residuos Tóxicos MET-UCCIRT/Res-87 MÉTODO DE ENSAYO: DETERMINACIÓN DE

MULTIRESIDUOS DE PLAGUICIDAS EN ABEJAS Y PRODUCTOS APÍCOLAS POR CROMATOGRAFÍA

LÍQUIDA ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS EN TANDEM (UPLC/MS-MS)

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TABLA DE CONTENIDO:

Introducción 1. Objetivo.

2. Campo de aplicación.

3. Referencias.

4. Definiciones.

5. Metodología.

6. Antecedentes.

7. Anexos.

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INTRODUCCIÓN

Es un método de ensayo que describe los pasos para la determinación de multiresiduos de plaguicidas en abejas y productos apícolas teniendo como referencia el AOAC Official Method 2007.01. "Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partioning with Magnesium Sulfate", conocida comúnmente como método QuEChERs cuyo procedimiento consiste en la extracción de los plaguicidas con acetonitrilo en medio tamponado con ácido acético-acetato de sodio seguido de una etapa de limpieza o clean- up combinada con amina primaria secundaria y sulfato de magnesio. El método se desarrolla a partir del método de la AOAC International 20 th Edition, 2016 utilizando otros estándares internos de control de calidad.

1. OBJETIVO

El presente método permite describir las actividades para determinar multiresiduos de plaguicidas en abejas y productos apícolas mediante Cromatografía Líquida acoplada con Espectrometría de Masas en Tandem.

2. CAMPO DE APLICACION

El método se aplica para la determinación de multiresiduos de plaguicidas en abejas y productos apícolas por Cromatografía Líquida acoplada con Espectrometría de Masas en Tandem. (Ver anexo N°1 listado de plaguicidas.)

3. REFERENCIAS

Referencia de los documentos relacionados al procedimiento:

 ITR-UCCIRT/Res-17 Manejo del Sistema de Cromatografía Líquida de Ultra Performance Acquity UPLC/ Xevo TQ-S.

 ITR-UCCIRT/Lab-07 Lavado de material de vidrio UCCIRT.

 REG-UCCIRT/Lab-29 Registro de materiales de referencia internos de la UCCIRT.

 REG-UCCIRT/Lab-30 Registro de verificación de la balanza.

 REG-UCCIRT/Lab-61 Hoja de trabajo de ensayo.

 REG-UCCIRT/Res-10 Registro de toma de muestra.

 PRO-UCCIRT/Lab-16: Procedimiento preparación y procesamiento de muestras agropecuarias.

 ITR-UCCIRT/Res-22: Instructivo manejo del procesador de muestras robot coupe.

 REG-UCCIRT/Lab-28 Registro listado de estándares de laboratorio de la UCCIRT

 REG-UCCIRT/Lab-46 Registro de preparación de estándares

 REG-UCCIRT/Cal-11 registro Listado de Personal Autorizado para Realizar Ensayos

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4. DEFINICIONES

 Plaguicidas: También llamados agroquímicos, son sustancias químicas destinadas a matar, repeler, atraer, regular o interrumpir el crecimiento de seres vivos considerados plagas.

 Quechers: Terminología en inglés (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) que significa rápido, fácil, económico, efectivo, robusto y seguro.

 LC/MS- MS: Cromatografía liquida acoplada a espectrometría de masas en tandem.

 LMR: Límite Máximo de residuos de un plaguicida

 UPLC: Cromatografía líquida de Ultra performance.

 ESI: Fuente de Ionización electro spray.

 MeCN: Acetonitrilo.

 MgSO4: Sulfato de magnesio anhidro.

 NaAc: Acetato de sodio.

 HOAc : ácido acético glacial

 MeOH: Metanol

 GCB: Carbón grafitizado.

5. METODOLOGÍA

El método es ejecutado por especialista o técnico autorizado en el registro Listado de Personal Autorizado para Realizar Ensayos REG-UCCIRT/Cal-11.

5.1 Principio del Método

El método consiste en 4 procesos principales: proceso de preparación de la muestra, proceso de extracción que es realizada por partición líquido-liquido, proceso de limpieza realizado por extracción en fase dispersiva (Dispersive-SPE) y proceso de medición en los equipos cromatográficos acondicionados y calibrados.

El procedimiento consiste en tomar una porción de la muestra molida y homogenizada, al cual se le adiciona acetonitrilo con ácido acético al 1% y una mezcla de sulfato de magnesio y acetato de sodio; el extracto obtenido es sometido a una limpieza o clean up en fase dispersiva (Dispersive-SPE) con sulfato de magnesio, amina primaria secundaria (PSA) y carbón grafitizado (CGB). Los residuos extraídos de plaguicidas (benzimidazoles, carbamatos, compuestos organoclorados, organofosforados, piretroides y triazinas) son determinados por Cromatografía Líquida con Espectrometría de Masa en Tandem usando Electrospray Positivo (+) y/o Electrospray Negativo (-).

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5.2 Precauciones de seguridad en el laboratorio

Para la ejecución de este método de ensayo se deben usar los siguientes equipos de protección: guantes de nitrilo, mandil, lentes de protección y mascarillas respiradoras para la manipulación de solventes y reactivos evitando así posibles accidentes.

5.3 Precauciones analíticas

Los materiales lavados de acuerdo al instructivo ITR-UCCIRT/Lab-07 deben estar acordes para la realización del análisis. Reactivos (ACS, ISO) y estándares de referencia de pesticidas, típicamente por encima del 99% de pureza (por ejemplo Chemservice, Accustandard, Dr. Ehrenstorfer), con certificado de análisis que incluya la estimación de incertidumbre. Debe considerarse para todo el análisis las buenas prácticas de Laboratorio.

5.4 Materiales y equipos.

5.4.1 Materiales:

 Tubos de polipropileno descartables de 15 y 50 mL con tapa rosca.

 Tabla de picar y/o tazones de acero inoxidable.

 Envases de vidrio para la conservación de la muestra o bolsas de polipropileno con cierre hermético.

 Cuchillos de acero inoxidables y espátulas de acero inoxidable para el pesado de estándares de referencia.

 Micropipeta con volumen variable de 10-100 uL

 Puntas para pipetas automáticas de 1000-5000 ul, de 10-100 uL y de 100-1000 uL

 Pipetas Pasteur.

 Gradillas para tubos.

 Viales de 2,0 ml para autosampler HPLC.

 Fiolas o matraces volumétricos de 5 o 10 mL clase A.

 Frascos de vidrio para guardar soluciones de extracción y viales con tapa rosca de 10 y 20 mL.

 Jeringas descartables de 1 mL.

 Filtros de jeringa PTFE 13 mm, 0.45 y/o 0.22 um.

5.4.2 Equipos:

 Robot Coupe Blixer 3 u otra equivalente disponible

 Balanza analítica Digital (marca A & D, modelo GR 200) u otra equivalente disponible.

 Agitador de tubos de ensayo Multireax, marca Heidolph u otro equivalente disponible.

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 Centrífuga (Marca : Thermoelectron, modelo : Multi RF ) u otra similar disponible

 Columna LC: – 250 x 4,6 mm id, 5 µm.(HPLC) y de 100 x 2,1 mm id; 1,7 um (UPLC)

 Cromatógrafo Líquido de Ultra performance (UPLC). Marca Waters , Modelo: Acquity.

 Espectrómetro de masas en tandem con sonda ESI en modo de operación positivo y negativo. Marca: Xevo TQS

 Software del UPLC-MSMS :Masslynx 4.1 5.5 Reactivos:

5.5.1 Sustancias químicas

 Agua grado ultrapura.

 Acido fórmico 98% p.a.

 Acetonitrilo - grado LC-MS o GC.

 Acido acético (HOAC) - Glacial.

 1% HOAc en MeCN – preparar la solución con 10 mL glacial HOAC en 1 L MeCN.

 Acido fórmico 6,7 mM en agua; añadir a una fiola de 250 ml, 100ml de agua y 64,3ul de ácido fórmico, mezclar, completar a volumen con el mismo solvente.

 Cloruro de sodio grado reactivo.

 Sulfato de magnesio anhidro – pureza >98%: previo secado a 500º C por un tiempo mínimo de 5 horas para remover los ftalatos y agua residual.

 Acetato de sodio anhidro.P.A.

 Adsorbente Amina primaria-secundaria (PSA)

 Adsorbente Carbón negro grafitizado (GCB)- para muestras con carotenoides y pigmentos.

 Adsorbente C-18 para muestras con contenido de grasas mayor al 1%.

 Acetato de amonio.p.a.

5.5.2 Fase móvil

a) Fase móvil A: Agua con acetato de amonio 10 mM y ácido acético 0.05%.

b) Fase móvil B: Metanol con acetato de amonio 10 mM y ácido acético 0.05%.

Para preparar estas fases móviles se requiere lo siguiente:

Preparar 100 mL de una solución stock de Acetato de amonio 1 M y ácido acético 5%

(SOLUCION STOCK):

 Disolver 7.7 g de acetato de amonio en 95 mL de agua

 Añadir 5 mL de ácido acético glacial.

 Para preparar 500 mL de las fases móviles:

 Fase móvil A: añadir 5 mL de la solución stock a 495 mL de agua.

 Fase móvil B: añadir 5 mL de la solución stock a 495 mL de metanol.

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5.5.3 Estándares:

 Estándares químicos de plaguicidas de alta pureza de preferencia mayor a 99.0% de pureza (verificar en el registro listado de estándares de laboratorio de la UCCIRT, código REG-UCCIRT/Lab 28).

 Mezclas de estándares en solución de concentraciones entre 100 a 2000 mg/L(verificar en el registro de preparación de estándares código REG-UCCIRT/Lab- 46).

 Estándar interno Trifenilfosfato 200 mg/L.

5.5.4 Preparación de los estándares de la curva matriz de los plaguicidas analizados por LC/MS-MS

 Solución stock primaria, aprox. 2000 ng/uL.

Pesar 20 mg de los estándar químicos de plaguicidas en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 0.1% de ácido acético. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar. Almacenar a temperatura (-10° a -30°C) y en lugar oscuro. (estable un año).

Algunos plaguicidas no se disuelven en acetonitrilo en medio ácido, para estos casos verificar el registro de preparación de estándares, código REG- UCCIRT/Lab 46 y para analitos nuevos buscar referencias bibliográficas.

 Soluciones Mix Intermedia, 40 ng/ul, 80 ng/ul, 160 ng/ul.

Transferir una alícuota de 500 µL para 40 ng/ul, 1000 µL para 80 ng/ul ó 2000 µL para 160 ng/ul de las Soluciones stock primario de plaguicidas a una fiola de 50 mL, diluir y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0,1%. Almacenar a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, ver concentración final de cada estándar en el registro REG- UCCIRT/Lab-61 Hoja de trabajo.

Nota:

(a) para fiolas preparadas de menor volumen calcular el volumen adecuado.

(b) Se han considerado cinco grupos de mezclas:

Mix I: Plaguicidas organofosforados y carbamatos Mix II: Plaguicidas tipo azoles y ureas

Mix III: Plaguicidas tipo triazinas, estrobilurinas, etc.

Mix IV: Plaguicidas comunes a ambas técnicas LC y GC (iprodiona, etoprofos, triazofos por ejemplo:

Mix V: Nuevos plaguicidas incluídos.

 Solución Mix de fortificación, 4 ng/ul,

Transferir una alícuota de 1000 µL de cada Solución Mix Intermedia a una misma fiola de 10 mL, diluir y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0,1%;

5.5.5 Preparación del estándar interno

 Solución stock de Trifenilfosfato, 200 ng/uL.

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Preparar esta solución a partir de la solución stock de 2000 ng/uL. Transferir una alícuota de 1000 uL en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 1% HOAC.

Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (- 10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 12 meses.

 Solución de trabajo de trifenilfosfato, 2 ng/uL.

Transferir una alícuota de 1000 µL de la solución stock 200 ng/uL a una fiola de 100 mL, diluir y enrasar con ácido acético al 1 % en acetonitrilo. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 6 meses.

5.5.6 Preparación de estándar de prometrina (estándar surrogado)

 Solución stock de PROMETRINA, 2000 ng/uL.

Pesar 20 mg del estándar de prometrina en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 0.1% HOAC. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0.1%.

Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (- 10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 12 meses.

 Solución de trabajo de Prometrina 40 ng/uL.

Transferir una alícuota de 500 µL de la solución stock 2000 ng/uL a una fiola de 25ml, diluir y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0.1%. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 3 meses.

5.5.7 Preparación de los estándares para la curva de calibración por UPLC-LCMS-MS Se preparan de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla 1: Curva de calibración de plaguicidas

Nivel

.

Volumen en (µL) de Solución Intermedia (40,

80 y 160 ng/uL)

Solución HAc 0,1%,

ml

Volume n final, ml

Concentración ng/ul

5 1000 1 10 4/ 8 / 16

4 500 1 10 2/ 4 / 8

3 250 1 10 1 / 2 / 4

2 50 1 10 0,2/ 0.4 / 0.8

1 25 1 10 0,1 / 0.2 / 0.4

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5.6 Procedimiento de Análisis de muestra.

Para un análisis de rutina se empleará una curva matriz, controles de calidad: blanco matriz, el fortificado al nivel más bajo de la curva y duplicados cada 10 muestras.

5.6.1 Preparación de la muestra previa al análisis

Las muestras que ingresan con su respectiva hoja de distribución son verificadas, son homogenizadas hasta formar una pasta y luego pesada para el análisis.

5.6.2 Procedimiento de extracción de residuos de plaguicidas en la muestra

a) Se pesa 2,5 g ± 0,1 g de muestra en tubos de centrifuga de polipropileno de 50 mL., una muestra control negativo o blanco de matriz, 01 blancos fortificado por lo menos al nivel más bajo de calibración o correspondiente al límite de cuantificación LOQ del plaguicida y se adiciona 10 mL de agua, homogenizar manualmente o por vortex.

b) Para las muestras fortificadas o de control positivo se usa una alícuota de la mezcla de estándares del nivel 4 o 5 de la tabla 1 de la curva de calibración, si se utiliza el nivel 4 usar una alícuota de 50 uL , se homogeniza usando vortex y dejar en reposo por 15 minutos.

c) Se adiciona una alícuota de 25 uL de la solución de trabajo de prometrina para dar una concentración de 200 µg/kg en la muestra.

d) Se adiciona 15 mL de solución de Acetonitrilo con 1% de ácido acético, homogenizar con ayuda de vortex o manualmente por 1 minuto y luego adicionar la mezcla de sales (1,5 g acetato de sodio anhidro + 6 g sulfato de magnesio anhidro). Agitar con ayuda de vortex o manualmente por 1 minuto para romper los grumos asegurando que se vuelva una mezcla homogénea, ocurre una reacción exotérmica por lo que se recomienda refrigerar por espacio de 60 segundos.

e) Se agita vigorosamente por 1 minuto adicional y luego se centrifuga mínimo 3000 rpm por 3 minutos.

5.6.2.1 Limpieza o Clean up de los extractos

a) Para la curva de estándar: Se transfiere 10 mL de extracto, Para las muestras en investigación, muestras blanco, blanco de reactivos: Se transfiere 3 mL a un vial conteniendo 150 mg de MgSO4 y 50 mg de PSA por cada mL de extracto.

b) Adicionar 7,5 mg de GCB por mL de extracto.

Adicionar 50 mg de adsorbente C18 por mL de extracto.

c) Se mezcla vigorosamente con ayuda de vortex o manualmente por espacio de 30 a 60 segundos, luego se centrifuga entre 2000 y 3000 rpm por 3 minutos de tal modo que se evite ruptura de los frascos de vidrio.

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5.6.2.2 Preparación de los extractos para análisis por UPLC-MS-MS

a) Se transfiere 500 uL del extracto limpio a otro vial o tubo eppendorf y se adiciona 50uL de Solución de trabajo de estándar interno de trifenilfosfato (2 ng/uL).

b) Se mezcla y se adiciona 25 uL de acetonitrilo para el caso de blanco, muestras y controles positivos.

c) Para los viales que servirán para la curva de calibración adicionar 25 uL de cada uno de los 5 estándares preparados en el punto 5.5.8, para obtener concentraciones de 5 hasta 200 ng/g. de cada plaguicida en la matriz.

d) Se mezcla y se adiciona 500 uL de ácido fórmico 6,7 mM a todos los viales.

e) Se filtrar a través de un filtro de jeringa PTFE 0,45 um dentro de viales del autosampler de HPLC y hacer las lecturas respectivas en el LC/MS-MS.

Curva de calibración de plaguicidas Nivel

Concentración Equivalente UPLC–MS-MS(ng/g)

5 200/400 /800

4 100/200 /400

3 50/100 /200

2 10/20 /40

1 5/10 /20

5.7 Optimización del método

5.7.1 Aptitud del sistema

Verificar la aptitud del sistema al inicio de la secuencia de corridas, después de un cambio considerable (cambio de columna o una reparación) empleando un estándar de concentración intermedia de la curva de calibración inyectado por triplicado. Evaluar el %RSD de las respuestas de un analito (como mínimo) correspondientes a un mismo vial, el cual no debe ser mayor del 10% y el %RSD de los tiempos de retención no exceda de 2.5%.

5.7.2 Condiciones Instrumentales

Columna cromatográfica Fase reversa C18, 100 mm x 2,1 mm, 1,7 um

Fase Móvil Fase Móvil A: Fase Móvil B

80 : 20

Condición de flujo : Gradiente(*)

Flujo: 0.4 ml/min

Volumen de inyección 2 uL

Temperatura 50°C

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Fase móvil A: Agua con acetato de amonio 10 mM y ácido acético 0.05%

Fase móvil B: Metanol con acetato de amonio 10 mM y ácido acético 0.05%

Equilibrar el sistema LC por lo menos 5 min con Fase móvil A: Fase móvil B (80 %:20%).

Condiciones del gradiente de elución*

Tiempo (min) A B Flujo (mL/min) Curva

0 80.0 20.0 0.40 6

0.5 80.0 20.0 0.40 6

4.0 10.0 90.0 0.40 6

6.0 10.0 90.0 0.40 6

6.1 80.0 20.0 0.40 6

8.0 80.0 20.0 0.40 6

Sistema espectrométrico (MS/MS)

Fuente de Ionización Electrospray (ESI) Modo de Ionización Positivo [M+H]⁺

Temperatura de la fuente (°C) 150

Temperatura de solvatación (°C) 350

Flujo de gas de cono ((L/Hr): 50

Flujo del gas de solvatación (L/Hr) 800

Resolución LM1 12.5 - 13

Resolución HM1 12.5 - 13

Multiplicador (V) 650

Flujo de bomba de jeringa (mL/min) 10 Presión de Gas en la Celda Pirani (mbar) 3.93 e-3 5.7.3 Optimización del MS-MS

Plaguicidas analizados por LC-MS/MS, modo de ionización ESI positivo y modo de adquisición MRM (Monitoreo Reacción Múltiple)

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5.7.4 Secuencia de inyección: Se recomienda seguir el siguiente orden el cual puede variar en función a la necesidad del análisis:

 Blanco de. Reactivos.

 Blanco de matriz

 Estándar de calibración Nivel 1.

 Blanco de reactivo.

 Muestra 1.

 Muestra 2.

 Control positivo (a nivel LMR)

 Blanco de Solvente (Fase móvil).

Se recomienda reinyectar estándares de nivel intermedio después de un grupo de 10 muestras, El RSD debe ser menor o igual a 20%. En caso contrario recalibrar nuevamente solamente cuando se obtenga muestras mayores al límite de cuantificación.

5.7.5 Cálculo y expresión de resultados

El procesamiento de datos de las muestras, blancos, y estándares se realiza con el software MassLynx 4.1 con la aplicación QuanLynx 4.1 para el LC MS-MS.

Las concentraciones obtenidas de las muestras, fortificados y blancos son resultado del ploteo de los ratios en la curva de regresión.

Los pesos de muestras concentraciones de estándares y resultados se registran en los formatos REG-UCCIRT/Res-10 y REG-UCCIRT/Lab-61 de acuerdo al procedimiento de ensayo PRO-UCCIRT/Lab-02.

5.7.5.1 La fórmula para el cálculo de plaguicidas individuales determinados por LCMSMS es la siguiente:

Donde:

 Cµg/kg CC: concentración de la muestra derivada de la curva de calibración matriz

 fd: factor de dilución

 fm : concentración final de la muestra, g/mL

 fest: concentración final del extracto para la curva matriz, g/mL.

5.7.5.2 La confirmación de los resultados se realizará a las muestras que presenten resultados positivos y teniendo en cuenta las directrices del Codex se procede a evaluar la segunda transición MRM de confirmación para el análisis por LC/MS-MS.

Fd = fest(g/ml) / fm(g/ml)

1000 / ) /

(

/kg = Cug kgCCx fd

mg C

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5.7.5.3 Recuperación: En las muestras fortificadas el porcentaje de recuperación se calcula mediante la siguiente fórmula:

% Recuperación = Conc. d x 100 Conc. f

Donde:

Conc. d =Concentración experimental del plaguicida en la muestra fortificada, ng/g Conc. f = Concentración conocida adicionada del plaguicida, ng/g

Se reportará todos los plaguicidas cuya recuperación de muestras fortificadas se encuentren entre 50 a 130 % de recuperación.

A criterio del analista se reportará solamente como screening los plaguicidas cuya recuperación se encuentra fuera de los límites aceptables siempre y cuando se evidencie linealidad en la curva matriz, y no se obtenga presencia en la muestra.

No se reportará los plaguicidas que presenten interferencia en la curva matriz y no se evidencie linealidad y además no se obtenga recuperación en la muestra fortificada.

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5.8 Control de Calidad Parámetro de

calidad Interno Frecuencia Criterio de aceptación

Acción inmediata

Acciones en casos reiterativos *

Blanco reactivo

En cada lote diario de muestras analizadas

< LoD

Corroborar la lectura, inyectando nuevamente, y verificar blanco

matriz

Verificar solventes usados.

Repetir lote analizado, tres o más casos consecutivos,

generan un SACP.

Blanco matriz

En cada lote diario de muestras analizadas y

por matriz.

< LoQ

Cuando no se encuentre disponible, utilizar como

adición estándar,

---

Calibración curva matriz mínimo 3

puntos

En cada lote de muestras analizadas

r> 0.95 Calibrar nuevamente

Verificar mantenimiento del equipo. Repetir la curva de

calibración y las inyecciones de las

muestras

Duplicados

Cada 10 muestras analizadas o

en cada lote diario.

RSD <20%

Repetir la muestra analizada

Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir el análisis de los duplicados.

Muestra o blancos fortificados

En cada lote diario de muestras analizadas o después de 30

muestras

Recuperación 50-130%**

Repetir la muestra analizada

Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir

análisis de la muestra fortificada..

Estándar de verificación de

calibración

Cada 10 muestras

RSD < 20%

respecto a la calibración

inicial

Calibrar nuevamente,

solo si hay presencia de plaguicidas en

las muestras

Verificar estándares y fechas de vencimiento, calibrar nuevamente y repetir las inyecciones del

lote analizado

Surrogados*** En todas las muestras

Recuperación 60-130%

Corroborar interferencias en la muestras,

anotar observaciones

Repetir muestras analizadas

** tres o más casos consecutivos generan una SACP LoD = Límite de detección del método

LMR = Tolerancias permitida

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6. ANTECEDENTES

 AOAC Official Method 2007.01 Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and partitioning with Magnesium Sulfate liquid Chromatography/ Tandem Mass Spectrometry. 20^th Edition 2016.

 CODEX NORMA PARA LA MIEL. CODEX STN 12-1981

7. ANEXOS

 Anexo 1: Tabla 1 Plaguicidas analizados por UPLC-MS-MS.

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ANEXO N°1

Tabla 1 Plaguicidas analizados por UPLC-MS-MS

No. Nombre Proveedor Lote Pureza

Potencia

cod.

UCCIRT

1 Acetamiprid Sigma Aldrich BCBT9185 100.0% 50

2 Aldicarb Dr.Ehrenstorfer G167727 98.7% 51

3 Aldoxycarb (aldicarb-

sulfone) Dr.Ehrenstorfer 115792 99.2% 348

4 Ametoctradin Dr Ehrenstorfer

GmbH G17689 99.7% 600

5 Ametryn Sigma Aldrich BCBT4165 98.6% 53

6 Amisulbrom Dr.Ehrenstorfer G146361 97.1% 403

7 Asulam Dr Ehrenstorfer

GmbH 100771 97.5% 54

8 Atrazine Dr Ehrenstorfer

GmbH G138086 99.3% 55

9 Azinphos methyl Sigma Aldrich BCBV5129 97.4% 126

10 Azoxystrobin Dr Ehrenstorfer

GmbH G139781 99.2% 350

11 Benalaxyl Sigma Aldrich BCBW3271 100.0% 59

12 Bensulfuron methyl Dr Ehrenstorfer

GmbH G880685 98.3% 62

13 Bentazone Dr.Ehrenstorfer G140179 99.8% 404

14 Benthiocarb

(Tiobencarb) Dr.Ehrenstorfer G150057 98.1% 63

15 Bifenazate Dr Ehrenstorfer

GmbH G138185 99.8% 36

16 Bispyribac Sodium Dr Ehrenstorfer

GmbH G122719 96.3% 66

17 Bitertanol* Dr Ehrenstorfer

GmbH G164669 99.6% 409

18 Boscalid ChemService 3925000 99.5 % 593

19 Bromuconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G139673 99.9% 497

20 Bupirimate Dr.Ehrenstorfer G983983 95.9% 68

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21 Buprofezin Sigma Aldrich BCBT5762 99.0% 69

22 Cadusafos Dr Ehrenstorfer

GmbH G753045 97.5% 506

23 Carbaryl Dr.Ehrenstorfer G150815 99.5% 71

24 Carbendazim Dr Ehrenstorfer

GmbH G133709 99.6% 72

25 Carbofuran Dr Ehrenstorfer

GmbH G140184 99.5% 73

26 Carbofuran 3-hydroxy Sigma Aldrich BCBR5973V 98.0% 540

27 Carboxin Dr Ehrenstorfer

GmbH 50730 99.0% 75

28 Chlorantraniliprole Dr Ehrenstorfer

GmbH G138079 97.8% 413

29 Chlorpyrifos Dr Ehrenstorfer

GmbH G130559 99.8% 79

30 Chlorpyrifós-Methyl Sigma Aldrich BCBS0018 99.6% 385

31 Chlorsulfuron Dr Ehrenstorfer

GmbH G148880 99.2% 402

32 Clofentezine Dr Ehrenstorfer

GmbH G159154 98.0% 82

33 Clomazone (command) Sigma Aldrich BCBV4965 98.3% 83

34 Clothianidin ChemService 4394000 99.5% 28

35 Cyazofamid Dr Ehrenstorfer

GmbH G880179 97.2% 321

36 Cycloxydim Sigma Aldrich BCBW0525 96.5% 231

37 Cymoxanil Dr.Ehrenstorfer G138500 99.9% 86

38 Cyproconazole Sigma Aldrich BCBT9296 98.5% 87

39 Cyprodinil Dr Ehrenstorfer

GmbH G139482 99.9% 453

40 Cyromazine Dr Ehrenstorfer

GmbH G175337 99.3% 88

41 Desmedipham Dr.Ehrenstorfer 118929 99.0% 351

42 Diazinon ChemService 6225400 99.5% 90

43 Dichlofluanid ChemService 3671000 99.5% 40

(17)

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44 Dichlorvos Dr Ehrenstorfer

GmbH 997919 97.6% 93

45 Dicrotophos Dr Ehrenstorfer

GmbH G163921 97.5% 94

46 Dietofencarb Dr Ehrenstorfer

GmbH G992366 99.2% 355

47 Difenoconazol Dr.Ehrenstorfer 102257 98.7% 95

48 Diflubenzuron Sigma Aldrich BCBT2377 99.8% 96

49 Dimethoate Dr Ehrenstorfer

GmbH G131991 99.3% 97

50 Dimethomorph Dr Ehrenstorfer

GmbH G139267 98.7% 98

51 Diniconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G131981 99.2% 99

52 Dinocap (ESI-)* ChemService 4394100 99.0% 29

53 Dinotefuran Dr Ehrenstorfer

GmbH G752820 95.5% 41

54 Dithianon(ESI-) Dr Ehrenstorfer

GmbH 103844 99.0% 27

55 Diuron Dr Ehrenstorfer

GmbH 31118 98.8% 100

56 Epoxiconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G139280 99.9% 406

57 Ethirimol Dr Ehrenstorfer

GmbH G163965 99.0% 408

58 Ethofenprox Fluka SZBE265XV 99.6% 103

59 Ethoprophos ChemService 5747400 98.8% 168

60 Ethiofencarb Dr Ehrenstorfer

GmbH G157441 98.5% 352

61 Etoxazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G129143 99.3% 595

62 Famoxadone Dr.Ehrenstorfer 105063 99.0% 104

63 Fenamiphos ChemService 3067000 99.0% 346

64 Fenamiphos sulfone Dr Ehrenstorfer

GmbH 137370 99.0% 598

65 Fenarimol Dr Ehrenstorfer

GmbH 131507 99.9% 105

66 Fenazaquin Sigma Aldrich BCBV6671 99.1% 106

67 Fenbuconazole Sigma Aldrich BCBW1346 99.9% 349

(18)

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68 Fenhexamid Dr Ehrenstorfer

GmbH G122515 99.9% 108

69 Fenoxycarb Sigma Aldrich BCBT7968 99.0% 353

70 Fenpropathrin Sigma Aldrich BCBT7187 98.0% 111

71 Fenpyroximate Dr.Ehrenstorfer G171817 99.4% 112

72 Fenthion Sigma Aldrich BCBT4329 98.6% 113

73 Flufenoxuron Dr Ehrenstorfer

GmbH G140219 98.6% 117

74 Fluopicolide Dr Ehrenstorfer

GmbH G140221 99.3% 596

75 Fluopyram Dr Ehrenstorfer

GmbH G996049 99.8% 24

76 Fluquinconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G171807 98.9% 405

77 Flusilazole ChemService 5869400 99.5% 119

78 Flutriafol Sigma Aldrich SZBF223XV 97.3% 34

79 Forchlorfenuron Dr Ehrenstorfer

GmbH G131520 99.6% 122

80 Hexythiazox Dr Ehrenstorfer

GmbH G130415 98.0% 128

81 Hymexazol* Dr Ehrenstorfer

GmbH G146862 99.8% 129

82 Imazalil Dr Ehrenstorfer

GmbH G158402 99.7% 130

83 Imidacloprid Dr Ehrenstorfer

GmbH G149997 99.8% 131

84 Indoxacarb Dr Ehrenstorfer

GmbH G154488 97.8% 505

85 Iprodione Sigma Aldrich BCBS3629V 99.5% 454

86 Isoprothiolane Dr Ehrenstorfer

GmbH G154422 99.9% 132

87 Isoxaben Dr Ehrenstorfer

GmbH G160633 96.5% 411

88 Isoxaflutol ChemService 393400 99.7% 133

89 Kresoxim-Methyl Sigma Aldrich BCBV7334 95.7% 134

90 Linuron Sigma Aldrich BCBS8699V 99.4% 135

91 Lufenuron Sigma Aldrich BCBV9237 99.7% 136

92 Mandipropamid Dr Ehrenstorfer

GmbH G130418 98.6% 597

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93 Meptyldinocap(ESI-) Sigma Aldrich BCBW9934 98.1% 229

94 Metalaxyl Dr Ehrenstorfer

GmbH G984930 99.3% 139

95 Metamidophos Dr Ehrenstorfer

GmbH G130424 99.6% 141

96 Methiocarb Dr Ehrenstorfer

GmbH G149051 99.3% 143

97 Methomyl Dr Ehrenstorfer

GmbH G140007 99.9% 144

98 Methoxyfenozide Dr Ehrenstorfer

GmbH G129227 99.4% 145

99 Metrafenone Dr Ehrenstorfer

GmbH G140234 99.6% 410

100 Monocrotophos Dr Ehrenstorfer

GmbH G833027 98.0% 271

101 Myclobutanil Sigma Aldrich SZBF089XV 99.6% 175

102 Nicosulfuron (Accent) Sigma Aldrich SZBE279XV 99.9% 48

103 Novaluron Dr Ehrenstorfer

GmbH G141459 99.0% 149

104 Omethoate Dr.Ehrenstorfer G149769 96.6% 342

105 Oxadixyl Sigma Aldrich BCBT5111 99.9% 354

106 Oxamyl Dr.Ehrenstorfer G163063 98.6% 153

107 Oxycarboxin Dr.Ehrenstorfer G153917 99.2% 154

108 Oxydemeton-methyl Dr Ehrenstorfer

GmbH 993080AL 99.0% 155

109 Oxyfluorfen Dr.Ehrenstorfer G150151 99.4% 407

110 Paclobutrazol Dr Ehrenstorfer

GmbH G145460 98.9% 317

111 Penconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G165444 98.8% 157

112 Phentoate Sigma Aldrich BCBS4635V 98.8% 160

113 Phosmet Sigma Aldrich BCBV7491 99.7% 38

114 Phosphamidon Sigma Aldrich BCBV8236 94.4% 161

115 Pirimicarb Sigma Aldrich BCBW3080 98.8% 345

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116 Pirimiphos-Methyl Sigma Aldrich BCBT5775 98.5% 162

117 Prochloraz Sigma Aldrich BCBW4694 98.7% 163

118 Profenofós Dr Ehrenstorfer

GmbH G154491 99.0% 165

119 Prometryn Dr Ehrenstorfer

GmbH G166358 99.9% 166

120 Propamocarb Dr Ehrenstorfer

GmbH G141705 98.2% 167

121 Propetamphos Sigma Aldrich BCBV4603 96.0% 604

122 Propiconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G993810 98.5% 185

123 Pymetrozine Dr Ehrenstorfer

GmbH G832819 97.8% 343

124 Pyraclostrobin Sigma Aldrich BCBT7756 99.9% 451

125 Pyridaben Dr Ehrenstorfer

GmbH G169002 99.8% 170

126 Pyrimethanil Dr Ehrenstorfer

GmbH G154496 99.9% 344

127 Pyriproxyfen ChemService 6233200 99.4% 208

128 Quinoxyfen Fluka BCBW5456 99.6% 35

129 Rotenone Dr Ehrenstorfer

GmbH G149894 99.3% 172

130 Saflufenacil Dr Ehrenstorfer

GmbH G148624 94.2% 591

131 Spinosad ChemService 4010800 98.3% 465

132 Spinetoram* Dr Ehrenstorfer

GmbH G983373 97.4% 26

133 Spirodiclofen Sigma Aldrich BCBW2752 98.9% 37

134 Spirotetramate Dr Ehrenstorfer

GmbH G249647 99.0% 31

135 Spiroxamine* Dr Ehrenstorfer

GmbH G162298 98.3% 272

136 Tebuconazole Sigma Aldrich BCBS6124V 99.4% 120

137 Sulfoxaflor Dr Ehrenstorfer

GmbH 150622 99.4% 609

138 Tebufenozide Sigma Aldrich BCBV7492 100.0% 338

139 Tebufenpyrad Dr Ehrenstorfer

GmbH G249649 99.9% 496

140 Teflubenzuron Sigma Aldrich BCBT3800 98.5% 177

(21)

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141 Temephos (Abate TM) Sigma Aldrich BCBV2878 95.5% 47

142 Tetraconazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G154055 99.7% 339

143 Thiabendazole Dr Ehrenstorfer

GmbH G147404 98.9% 181

144 Thiacloprid Dr Ehrenstorfer

GmbH G130509 99.5% 340

145 Thiamethoxam Dr.Ehrenstorfer 6133046 99.6% 608

146 Thiophanate methyl Dr.Ehrenstorfer G125445 99.9% 184

147 Thidiazuron Dr.Ehrenstorfer G687087 99.3% 182

148 Thiodicarb Sigma Aldrich BCBV7272 98.6% 183

149 Tolclofos methyl ChemService 5573800 98.2% 186

150 Triadimefon Sigma Aldrich BCBW0134 99.1% 187

151 Triadimenol ( Baytan) Sigma Aldrich BCBT6935 98.2% 57

152 Triazophos Sigma Aldrich BCBW1542 99.3% 188

153 Trifloxystrobin Dr Ehrenstorfer

GmbH G163560 99.4% 347

154 Triflumizole Dr Ehrenstorfer

GmbH G129212 99.9% 190

155 Triflumuron Dr.Ehrenstorfer G146877 98.8% 191

156 Zoxamide Sigma Aldrich BCBW0947 99.6% 232

*La sensibilidad es muy baja pudiéndose reportar como screening.