CONTROL
BIOLÓGICO
EXTRACTOS ENZIMÁTICOS DE Beauveria bassiana, UNA ALTERNATIVA PARA EL CONTROL DE Metamasius spinolae (GYLLENHAL BUSK), BAJO CONDICIONES DE
LABORATORIO
Lluvia de Carolina Sánchez-Pérez1; Silvia Rodríguez-Navarro1; Juan Esteban Barranco-Florido2; Erika Chávez-Ibañez1; Miguel Ángel Ramos-López2. 1Departamento de Producción Agrícola y Animal. 2Departamento de Sistemas Biológicos. Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Xochimilco. Calzada del Hueso #1100, Colonia Villa Quietud, Delegación Coyoacán. México 04960. [email protected]; [email protected]; [email protected]. mx.
RESUMEN. Se evaluó la acción de conidios y extractos enzimáticos de Beauveria bassiana individualmente y en conjunto con el fin de acelerar el proceso infectivo del B. bassiana sobre Metamasius spinolae obtenidos de Milpa Alta, D. F., bajo condiciones de laboratorio, planteándose como alternativa para el control de esta plaga en el cultivo del nopal. Se montó un bioensayo con 6 tratamientos obteniendo un 100% de mortalidad en todos los tratamientos sin existir diferencia significativa; pero al evaluar el tiempo de muerte existió diferencia significativa que muestra una aceleración de mortalidad. La propuesta de utilizar simultáneamente conidios + extractos enzimáticos se propuso debido a que probablemente acelera y facilita la degradación y penetración del tegumento del insecto.
Palabras clave: extractos enzimáticos, Beauveria bassiana, Metamasius spinolae, degradación, fermentación sólida.
Enzymatic extracts of Beauveria bassiana, an alternative to control Metamasius spinolae (Gyllenhal Busk) under laboratory conditions
ABSTRACT. We evaluated the action of enzymatic extracts of conidia and Beauveria bassiana individually and together in order to accelerate the infective process of B. bassiana on Metamasius spinolae from Milpa Alta, D. F., under laboratory conditions, as v f h f h p ¨ p ”. A b w w h 6 m 100% m in all treatments without significant differences. However to assess the time of death, there were significant differences showing significant difference in mortality acceleration. The proposal to use simultaneously conidia + enzyme extracts was proposed because it probably accelerates and facilitates the degradation and penetration of the insect integument.
Key words: enzymatic extracts, Beauveria bassiana, Metamasius spinolae, degradation, solid fermentation Introducción
E “p ” (Metamasius spinolae Gyllenhal Busk) (Coleoptera: Curculionidae) se distribuye por todo el país (Mann, 1969). El daño lo causan las larvas que se alimentan del tejido interno del nopal; viven dentro de las pencas favoreciendo la entrada de patógenos a la planta y al alimentarse forman galerías en el interior de las pencas restándole estructura de soporte ocasionando su acame; adultos se alimentan de pencas tiernas (Orduño, 2009); la presencia de esta plaga disminuye la producción y reduce la calidad del cultivo (Mann, 1969; Muñiz, 1998; Mena-Covarrubias, 2004).
El control biológico es una alternativa para el manejo de plagas, ya que no deja residuos en el medio ni en los cultivos (Sánchez et al., 2012); los hongos entomopatógenos (HE) son utilizados por su capacidad insecticida, pues producen la muerte en insectos por contacto (Assaf, 2007). Como es el caso de Beauveria bassiana, patógeno de distribución cosmopolita y de amplio espectro, capaz de causar epizootias (Alves et al., 2002). El proceso bajo el cual los HE infectan a su hospedero es mediante dos mecanismos uno físico, presión que ejerce el tubo germinativo hacia el interior del insecto y uno bioquímico donde segrega enzimas hidrolíticas como subtilisina Pr1 y Tripsina Pr2, quitinasas y un complejo enzimático del citocromo P450s,
que degradan la cutícula y proporcionar a su vez nutrientes al hongo (Monzón, 2001; Huang et
al., 2004; Yang et al., 2007).
Una de las ventajas de los extractos enzimáticos es la reducción del tiempo en el proceso infeccioso del hongo sobre el insecto y además de alterar la capacidad de alimentación de M.
spinolae y por lo tanto la disminución de daños en el nopal (Sánchez et al., 2012). Los síntomas
de los insectos infectados por HE son la pérdida de coordinación en sus movimientos, falta de movimiento y dejar de alimentarse para posteriormente ocasionar la muerte. La fermentación sólida es útil para producir enzimas con gran estabilidad; tiene como ventajas: uso de sustratos insolubles como fuentes de carbono y nitrógeno (Goettel et al., 1997); es un sistema simple; similar al ambiente natural de los hongos entomopatógenos; facilita la recuperación del extracto enzimático y la viabilidad de los conidios se incrementa al ser resistentes a los rayos UV (Rangel
et al., 2008).
El objetivo de presente trabajo fue evaluar la aplicación de conidios junto con extractos enzimáticos del cultivo sólido para acelerar el proceso infectivo de B. bassiana b “p ” (Metamasius spinolae) en el nopal verdura (Opuntia ficus indica Mill) provenientes de Milpa Alta, D.F. en condiciones de laboratorio.
Materiales y Método
Hongos entomopatógenos. Se utilizó la cepa de Beauveria bassiana donada por la Dra. Raquel Alatorre Rosas; se creció en agar dextrosa sabouraud a 25° C durante 7 días. Se colectaron las esporas con una solución de Tween 80 al 0.05 % y se conservaron a 4 ºC. La fermentación sólida se realizó en matraces Erlenmeyer de 250 ml usando como soporte bagazo de caña, un medio mineral de acuerdo con Barranco y cols. (2009) y como fuente de carbono cutícula de camarón (60 g l -1); los matraces contenían 35 g de materia húmeda, con una humedad
inicial 75 %, pH 5.4 y temperatura de 25°C. Se inocularon con 1 x 107 esporas (g Peso húmedo)-1. Los extractos enzimáticos se obtuvieron después de 5 días de fermentación, pesando el contenido de cada matraz y se adicionó agua destilada en una proporción (1:1) se homogeneizó y se comprimió, se centrifugó a 10, 000 rpm durante 10 minutos, se almacenaron a 4ºC (Polanczyk et
al, 2000). La obtención de conidios fue de una fermentación de 12 días con una solución de
Tween 80 % ajustando a una cantidad de 1x108 conidios por mL (Barranco et al, 2009). Insectos.
S “p ” b p q m b p parcelas de San Juan Tepenahuac, Milpa alta, D.F., posteriormente se llevaron al Insectario de la UAM-X, donde se pesaron, midieron y sexaron; se colocaron individualmente en vasos de plástico transparente de 265 ml de capacidad, se les alimentó con 20 g de nopal tierno, el cual se cambió cada dos días. Se aclimataron a 25°C y 65% HR durante 30 días. Bioensayo. Los insectos fueron inoculados mediante el método de inmersión durante 10 seg, para eliminar el exceso de humedad se dejaron sobre papel absorbente, cuando se secaron se metieron en vaso estéril y rotulado, con el nombre del tratamiento, repetición y fecha de inoculación (Fig. 2). Se usó un diseño completamente al azar, de 6 tratamientos con 5 repeticiones, los cuales fueron: Control negativo, extractos enzimáticos, conidios + extracto enzimático, conidios 1x108, control positivo
(Bea Tron ®) y control positivo + extractos enzimático. Cada tratamiento se suspendió en una solución acuosa de 100 mL de Tween 80 al 0.05%. Manteniéndose en condiciones controladas de 25 ± 2° C, 65% ± 5% HR y fotoperiodo de 16 h luz. Análisis estadístico: Los datos obtenidos fueron analizados con un análisis de varianza de una vía y una prueba de ajuste de medias de Tukey, con el paquete estadístico SYSTAT9.
Resultados
En el bioensayo realizado para evaluar la acción de conidios y extractos enzimáticos de B.
bassiana producidos por fermentación sólida sobre M. spinolae, se tuvieron los siguientes
resultados: en todos los tratamientos se obtuvo el 100% de mortalidad, excepto en el control negativo donde solo se produjo la muerte de uno de los individuos por causas no determinadas, no existiendo diferencia significativa en la mortalidad (Cuadro 1). Sin embargo al evaluar el tiempo que corresponde a la CL50 existen diferencias significativas que evidencian una
aceleración de mortalidad 6.89 ± 1.69 con el tratamiento de extractos enzimáticos + conidios obtenidos de fermentación sólida, seguido por el control positivo + extractos de acuerdo con la prueba de Tukey. Los insectos muertos mostraron crecimiento del micelio posterior a ser inoculados vistos a través de un microscopio estereoscópico, en donde se observó el crecimiento del micelio en los espacios inter segmentales del insecto que facilitan la emergencia del hongo del interior del insecto muerto (Fig. 3).
Cuadro 1. Porcentaje de mortalidad de insectos y valores de mortalidad evaluados en días. A y B Grupos de acuerdo a Tukey
Figura 1a y 1b. Graficas de las desviaciones estándar de mortalidad (Prom) y mortalidad en días del efecto de B.
bassiana sobre M. spinolae en el cultivo del nopal
Discusión
Existe escasa literatura sobre la utilización de extractos enzimáticos que se obtienen en el cultivo sólido junto cuando se producen conidios a través de este sistema. La propuesta en que se utilizan simultáneamente conidios (cultivo sólido y producto comercial) + extractos enzimáticos acelera el proceso infectivo debido probablemente a que facilita la penetración de la superficie de la cutícula porque sufre un proceso de degradación que permite al conidio, el apresorio y el tubo germinativo del hongo encuentren sitios receptores específicos y la penetración mecánica y
0 20 40 60 80 100 120 A B C D E F 1a 0 5 10 15 20 B C D E F 1b
Tratamiento Mortalidad (Prom) Mortalidad (días)
(A) Control negativo (Tween 80 al .05%) 20 (ND)
(B) Extracto enzimático 80±20 10±1.35B
(C) Extracto enzimático + Conidios 1x108 100±0 6.8±1.69A
(D) Conidios 1x108 100±0 12.8±4.44B
(E) Control positivo ( Bea Tron ® 100±0 13±0.41B
enzimática. Recientemente se ha buscado estrategias que conjunten el uso de hongos entomopatógenos junto con extractos vegetales, feromonas y atrayentes (Nana et al, 2012), sin embargo cuando se utilizan extractos de Neem se ha demostrado que reducen el crecimiento de
B. bassiana afectando su virulencia (Depieriet al., 2005). La ventaja de esta propuesta es que no
se presenta ese problema porque son extractos enzimáticos que el mismo hongo sintetiza y de manera efectiva disminuyó el tiempo de infección, aun utilizando los extractos enzimáticos junto con un producto comercial.
Figura 2. M. spinolae micosado por B. bassiana Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el CONACYT como becaria de la Maestría de Ciencias Agropecuarias y por la Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Xochimilco con los proyectos divisionales: Insectos y ácaros de importancia Agrícola en México y Evaluación de conidios y quitinasas de hongos filamentosos producidos en cultivo sólido para su uso potencial en el control biológico y en la industria farmacéutica. A la M. C. Rosaura Luna Reyes por la revisión y sugerencias al trabajo y al Dr. Francisco Cervantes Mayagoitia, Profesor investigador del Dpto.de Producción Agrícola y Animal de la UAM-X por la revisión y comentarios al trabajo.
Literatura Citada
Assaf, L. H. A. 2007. Ecological study and evaluation of activity of Beauveria bassiana (Bals)Vuill and Paecilomycesfarinosus (Dicks ex Fr.) Against the poplar leaf beetle
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Chrysoperla carnea (STEPHEN), Chrysoperla comanche (BANKS) Y Ceraeochrysa valida (BANKS) (NEUROPTERA: CHRYSOPIDAE) COMO DEPREDADORES DE Diaphorina
citri KUWAYAMA (HEMIPTERA: PSYLIDAE)
Juan José Pacheco-Covarrubias y Martiniano Perales-Amador. Campo Experimental Norman E. Borlaug. Centro de Investigación Regional del Noroeste. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Calle Norman E. Borlaug km. 12. C. P. 85000 Cd. Obregón, Sonora. México. [email protected], [email protected].
RESUMEN. La capacidad de depredación de Chrysoperla comanche, Chrysoperla carnea y Ceraeochrysa valida sobre adultos y ninfas N4-5 del Psílido Asiático de los Cítricos (PAC) fue evaluada con el fin de contribuir a determinar la especie de depredador más idónea a criar con fines de liberación en campo. Los resultados indican diferencias biológicas y estadísticas entre los estados larvarios L3 y L2 en la depredación de adultos del PAC, independientemente de las especies de crisopas evaluadas. Para larvas L3, el mayor consumo de adultos correspondió a Chrysoperla comanche, seguido de Ceraeochrysa valida. En larvas L2, Chrysoperla carnea registró la menor depredación de adultos. Diferencias importantes fueron documentadas en la depredación de ninfas N4-5 del PAC por larvas L3, donde Ceraeochrysa valida registró más del doble de ninfas depredadas que Chrysoperla comanche. Para larvas L2 la especie menos eficiente fue Chrysoperla carnea.
Palabras clave: Depredación, chrysopa, psílido asiático de los cítricos.
Chrysoperla carnea (Stephen), Chrysoperla comanche (Banks) and Ceraeochrysa valida (Banks) (Neuroptera: Chrysopidae) as predators of adults and nymphs of Asian Citrus
Psyllid
ABSTRACT. Depredation of adults and nynphs N4-5 of Asian Citrus Psyllid (ACP) by Chrysoperla comanche, Chrysoperla carnea and Ceraeochrysa valida was evaluated in order to determine the best predator for field release. The data indicated biological and statistical differences between L2 and L3 larvae of lacewings as ACP adult predators; regardless of the species of lacewing evaluated. For L3 larvae, Chrysoperla comanche was the lacewing that registered the highesr adult ACP predation, followed by Ceraeochrysa valida. In L2 larvae, Chrysoperla carnea registered the lowest adult predation. Significant differences were documented for the predation of nymphs N4-5 ACP by L3 larvae, where Ceraeochrysa valida consumed more than twice nymphs than Chrysoperla comanche. Finally, for L2 larvae Chrysoperla carnea was the specie lest efficient as nymphal predator. Key words: Predation, lacewing, Asian Citrus Psyllid.
Introducción
El psílido asiático de los cítricos (PAC), vector de la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus es el responsable de la enfermedad Huanglongbing o enverdecimiento de los cítricos (Mead, 2007). El Huanglongbing tiene en crisis la citricultura nacional y mundial por ser responsable de la muerte gradual de árboles de cítricos, primeramente afectando la calidad de la fruta, su producción y posteriormente la muerte del árbol (Rogers et al, 2009). La bacteria es altamente fastidiosa y se encuentra en el floema de las plantas, misma que está restringida a los cítricos y otros hospedantes cercanos como limonaria, por lo que se afirma que Candidatus Liberibacter spp. tiene un rango estrecho de hospedantes (Halbert and Keremane, 2004).
A nivel mundial, las áreas citrícolas afectadas por este patógeno han resentido este problema a través de la historia de la enfermedad; mientras que en México se empiezan a documentar rápidamente los primeros daños en el cultivo de limón, ya que en abril de 2010 se encontraron los primeros árboles con síntomas de la enfermedad en una huerta comercial en la zona productora de limón mexicano de Colima; actualmente en dicha zona ya se han encontrado varias centenas de árboles enfermos en ese predio, así como plantas que muestran los síntomas
característicos de la enfermedad en más de 100 predios en cuatro municipios de Colima. (Flores
et al, 2010). En el estado de Colima, los arboles presentan reducción de hasta el 50% en la
producción de fruta. A consecuencia de falta de acciones oportunas, aunado al comportamiento fenológico del cultivo, en tan solo dos años se alcanzó una incidencia superior al 60% en la región. (Manzanilla-Ramírez et al., 2012).
Desde 2002, el psílido asiático de los cítricos en México fue reportado y actualmente ya se encuentra presente en todas las zonas productoras de cítricos. El combate integrado del PAC, hace necesario explotar al máximo todas las tácticas de control dentro del Manejo Integrado de Plagas, que entre otras incluyen medidas de carácter biológico como la liberación de insectos depredadores.
Chrysoperla carnea es el depredador que sobresale dentro del control biológico inducido
por ser la especie más reproducida por las diferentes Juntas Locales de Sanidad Vegetal en el ámbito nacional; sin embargo, existen otras especies de crisopidos que pueden apoyar esta función y cuyo potencial en México está siendo estudiado. En este sentido, Pacheco y Perales (2012) encontraron diferencias en el número de días en el consumo de adultos del PCA, demostrando que Chrysoperla carnea es la especie que presentó el menor número de días alimentándose de adultos del PAC con siete días; seguido de Chrysoperla comanche con nueve días y finalmente Ceraeochrysa valida con diez días.
Este trabajo tuvo como finalidad continuar con los estudios para documentar la capacidad de depredación de especies de crisopa sobre el PAC, con el objetivo de impulsar la cría artificial de estos depredadores de acuerdo a su capacidad de impacto en la pendiente de crecimiento poblacional del PAC.
Materiales y Método
El estudio se realizó en el Campo Experimental Norman E. Borlaug, del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, ubicado en el Valle del Yaqui, en Cd. Obregón, Sonora, durante el 2012.
Se evaluó la capacidad de depredación de tres especies de crisopa: Chrysoperla carnea,
Chrysoperla comanche y Ceraeochrysa valida, en adultos y ninfas del PAC.
Para obtener el material biológico de evaluación se procedió a levantar un pie de cría de cada una de las especies de crisopa. Para tal fin, se usaron huevecillos de crisopa obtenidos en el Centro de Reproducción de Organismos Benéficos de la Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Yaqui.
Los huevecillos de las tres especies de crisopa, ya próximos a eclosionar, se colocaron por separado en cajas de PVC aplanadas y con cavidades individuales en cuyo fondo se agregó previamente vermiculita. Una vez que los huevecillos eclosionaron se seleccionaron las larvas recién emergidas y se cambiaron a una caja nueva a la que se le colocó una malla con pegamento en las orillas y por encima de la malla se deposito huevecillos de palomilla de los cereales (Sitotroga cerealella) para su alimentación. Las cajas con el material biológico se mantuvieron a la temperatura ambiente de laboratorio y se revisaron hasta que los depredadores alcanzaron el estado biológico de larva L2 ó L3, según el caso, para proceder a la evaluación.
Los tratamientos evaluados se presentan en el Cuadro 1.
La metodología de evaluación se basó en la técnica de confinamiento e infestación inducida, tanto para el caso de las tres especies de depredadores como para el psílido.
Cuadro 1.Tratamientos evaluados para la depredación de adultos y ninfas del Psílido Asiático de los Cítricos. INIFAP-CIRNO-CENEB.
Depredador Edo. Biol. Cond. Rep. PCA
Ceraeochrysa valida L2 AY 4 Adultos
Ceraeochrysa valida L3 AY 20 Adultos
Ceraeochrysa valida L2 AY 12 N4-5
Ceraeochrysa valida L2 SA 4 N4-5
Ceraeochrysa valida L3 AY 4 N4-5
Chrysoperla carnea L2 AY 8 Adultos
Chrysoperla carnea L3 AY 12 Adultos
Chrysoperla carnea L2 AY 12 N4-5
Chrysoperla carnea L2 SA 4 N4-5
Chrysoperla comanche L2 AY 4 Adultos
Chrysoperla comanche L3 AY 20 Adultos
Chrysoperla comanche L2 AY 12 N4-5
Chrysoperla comanche L2 SA 4 N4-5
Chrysoperla comanche L3 AY 4 N4-5
AY= ayuno; SA= sin ayuno
Para la recolección de los adultos del PAC se usó un aspirador adaptado para su captura los cuales se obtuvieron de una colonia criada ex-profeso en plantas de cítricos dentro de las instalaciones del Campo Experimental Norman E. Borlaug. Grupos de diez adultos del PAC sin sexar (de 1 a 3 días de emergidos) fueron recolectados, entre 8:00 y 9:00 am y separados en frascos individuales, para realizar las infestaciones requeridas en la prueba de depredación de adultos.
Para la prueba de depredación de adultos del PAC, en cada uno de los brotes preparados para la evaluación se introdujeron diez adultos. Las bolsas se cerraron perfectamente para evitar que se escaparan los insectos. Posteriormente, se introdujo en cada uno de los brotes una larva de crisopa recién ingresada al estado biológico L2 ó L3, según el caso, y se mantuvo en confinamiento en dicho brote por un periodo de 24 horas.
Para determinar la capacidad de consumo de las larvas L2 y L3 de las tres especies de crisopa usadas en esta evaluación, sobre ninfas N4-5 del PAC, en un periodo de 24 horas, se procedió a localizar en campo infestaciones con estados inmaduros del PAC. Una vez localizados brotes con infestaciones de inmaduros, estos se depuraron para conservar solamente ninfas correspondientes a los estadios N4-5, mediante la eliminación manual de ninfas que no correspondieran a dichos estadios. El número de ninfas sometidos a depredación fue variable para cada uno de los ensayos, pero en todos los casos se aseguró que el total consumido por las larvas de crisopas fuera menor que la disponibilidad de ninfas objetivo a ser depredadas, es decir se eliminaron los tratamientos donde el consumo de ninfas fue del 100%; lo anterior, permitió que se pudiera cuantificar la capacidad de consumo por 24 horas. En todos los casos, se contabilizó bajo microscopio el total de ninfas N4-5 y las ninfas N4-5 depredadas por las larvas de crisopas.
El criterio tanto para adulto o ninfa N4-5 del PAC depredado por larvas de crisopa fue insecto con al menos una perforación hecha con las mandíbulas y maxilas de las especies de crisopa evaluadas.
El número de repeticiones por tratamiento siendo el mínimo cuatro repeticiones, lo anterior, debido a la disposición de material biológico de evaluación. Se usó un diseño completamente al azar. Los datos se sometieron a un análisis de varianza mediante el paquete estadístico MINITAB® Release 14.13, y cuando se encontró diferencia significativa entre tratamientos se aplicó la separación de medias basada en desviación standard de Pooled a una probabilidad del 95%.
Resultados y Discusión
Depredación de adultos del PCA. El promedio de depredación (por un periodo de 24 h) sobre adultos del PCA por las tres especies de crisopas se presenta en el Cuadro 2. Dicha información muestra diferencias biológicas y estadísticas entre los estados larvarios L3 y L2, para los casos de Chrysoperla comanche y Ceraeochrysa valida.
Cuadro 2. Promedio de adultos del psílido asiático de los cítricos depredados (24 h) por dos estadios larvarios de tres especies de crisopa, bajo condiciones de ayuno por 24 h y confinamiento.
Depredador Estadío Rep Adultos PAC depredados Desv. Standard Pooled 0.05 Chrysoperla comanche L3 20 7.50 2.83 a Ceraeochrysa valida L3 20 5.90 1.80 b Chrysoperla carnea L3 12 4.41 0.99 c L2 4 3.75 0.85 c Chrysoperla carnea L2 8 3.50 1.30 c Chrysoperla comanche L2 4 2.75 0.50 c
Pooled desv standard = 1.972
Dentro del estado biológico L3, el mayor consumo de adultos correspondió a Chrysoperla
comanche, seguido de Ceraeochrysa valida y finalmente Chrysoperla carnea. Mientras que
dentro del estado biológico L2 no se detectaron diferencias ni biológicas ni estadísticas entre las tres especies de crisopidos evaluados.
Los anteriores resultados muestran una diferencia en consumo por estadío biológico a favor de Ceraeochrysa valida debido al ciclo de vida más largo, es decir, los días que la larva vive es mayor en el caso de Ceraechrysa valida lo que implicará un mayor consumo de presas a través de sus estados biológicos (Pacheco y Perales, 2012).
Depredación de ninfas N4-5 del PCA. Por otra parte, el promedio de depredación (por un periodo de 24 h) sobre ninfas N4-5 del PCA por crisopas se presenta en el Cuadro 3. Dicha información muestra diferencias biológicas y estadísticas entre las condiciones de ayuno y no ayuno previo a la depredación por parte de las tres especies de crisopa.
Bajo las condiciones de no ayuno las larvas L2 de Chrysoperla comanche registraron la menor cantidad de ninfas N4-5 depredadas; mientras que los valores obtenidos para fueron muy similares.
Diferencias fueron documentadas entre los estadíos larvarios L2 y L3 en las especies de crisopidos evaluados. Las larvas L2 de Chrysoperla comanche como de Ceraeochrysa valida
registraron un comportamiento similar, mientras que las larvas de Chrysoperla carnea registraron la menor depredación.
Cuadro 3. Promedio de ninfas N4-5 del psílido asiático de los cítricos depredados (24 h) por dos estadios larvarios de tres especies de crisopa, bajo condiciones de ayuno y sin ayuno, ambas en confinamiento.
Depredador Estadío Cond* Rep N4-5 PAC
depredadas Desv. Standard Pooled 0.05
Ceraeochrysa valida L3 AY 4 27.75 10.04 a Chrysoperla comanche L3 AY 4 12.50 6.40 b Chrysoperla comanche L2 AY 12 12.16 3.66 b Ceraeochrysa valida L2 AY 12 12.08 3.39 b Chrysoperla carnea L2 AY 12 9.83 3.40 bc Chrysoperla carnea L2 SA 4 9.75 0.5 bc Ceraeochrysa valida L2 SA 4 8.50 1.29 bc Chrysoperla comanche L2 SA 4 6.50 4.12 c
*AY= ayuno 24 h; SA= sin ayuno Pooled desv standard = 4.293
También se determinaron diferencias en el estadío L3 en las especies de crisopidos.
Ceraeochrysa valida registró más del doble de ninfas depredadas que Chrysoperla comanche.
Las diferencias de depredación encontradas entre las especies de crisopas estudiadas no concuerdan con lo indicadopor Pacheco-Rueda et al. (2012) quienes, no encontraron diferencia en la capacidad de depredación del PAC entre Chrysoperla comanche, C. rufilabris, C. externa y
Ceraeochrysa valida. Por otra parte, Cortez et al. (2011) registran en el estado de Sinaloa la
capacidad de consumo de Chrysoperla comanche, Chrysoperla rufilabris y Ceraeocrysa valida en ninfas N4-5 del PAC; sin embargo. no detectaron diferencias importantes en el consumo de ninfas grades del PAC entre las especies de crisopa evaluadas, a diferencia de este estudio donde sobresale Ceraeochrysa valida seguido de Chrysoperla comanche como especies de crisopa más activas en la depredación del PAC.
Por otra parte, el registro de depredación de los diferentes estados biológicos del PAC por las diferentes especies de crisopas reportado por Cortez et al. (2011) fue muy superior al registrado en este estudio, lo anterior, probablemente debido al método entre los estudios realizados.
Conclusiones
Ceraeochrysa valida y Chrysoperla comanche presentan resultados interesantes como
para ser considerados como opciones dentro del control biológico inducido para regular poblaciones del PAC.
Agradecimientos
Agradecemos a la Junta Local de Sanidad Vegetal del Valle del Yaqui, al Patronato para la Investigación y Experimentación Agrícola en el Estado de Sonora y a la Fundación Produce Sonora, A.C. el apoyo para la realización de este trabajo.
Literatura Citada
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AISLAMIENTO DE NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS NATIVOS EN CAMPOS CULTIVADOS CON MAGUEY MEZCALERO EN OAXACA
Juan Reyes Delgado-Gamboa1, Jaime Ruíz-Vega1, Jorge Eugenio Ibarra-Rendón2, Teodulfo Aquino-Bolaños1, Federico Gaytán-Zárate3. 1Centro Interdisciplinario de Investigación para el Desarrollo Integral Regional Unidad Oaxaca. IPN. Calle Hornos 1003. Santa Cruz Xoxocotlán. C.P. 71230. Oaxaca. México. [email protected]; [email protected]; [email protected]. 2Departamento de Biotecnología y Bioquímica, Centro de Investigación y Estudios Avanzados, Unidad Irapuato, 36500, Irapuato, Guanajuato, México. [email protected]. 3Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca. Ex-Hda de Nazareno, Xoxocotlan, Oaxaca. [email protected].
RESUMEN. Los nematodos entomopatógenos (NEP) se consideran como agentes potenciales para el control de plagas en ambientes crípticos, encontrándose en diversidad de hábitats a través del mundo. Este estudio se realizó con la finalidad de aislar juveniles infectivos (JI) de NEP nativos en campos cultivados con Agave angustifolia Haw, para su posterior utilización en el control del picudo del agave Sciphophorus acupunctatus. Se colectaron 60 muestras de suelo (1000 g de suelo c/u) en 13 comunidades en el período de marzo a junio y de septiembre a noviembre de 2012. Se utilizó la técnica de insecto-trampa con larvas de Galleria mellonella (L.). Después que se comprobó la entomopatogenicidad de los aislados utilizando los postulados de Koch, se multiplicaron en larvas de G. mellonella y almacenaron en frascos a 10°C a concentraciones de 1000 JI/ml. Se detectaron NEP en 33.3% de las muestras y de acuerdo a su coloración todas estuvieron aparentemente infectadas por especies del género Steinernema.
Palabras clave: Steinernema, Galleria mellonella, juveniles infectivos, control biológico, Sciphophorus acupunctatus. Isolation of native entomopathogenic nematodes in fields planted to maguey mescal in
Oaxaca
ABSTRACT. Entomopathogenic nematodes (EPN) are considered a potential control agents for insects pests in cryptic habitat and are found in many habitats worldwide. This study was aimed to isolate infective juveniles (IJ) of native entomopathogenic nematodes (EPN) in fields planted to Agave angustifolia Haw in the Central Valleys of Oaxaca for control of the agave weevil Sciphophorus acupunctatus. Sixty (60) soil samples (1000 g of soil each) were collected in 13 communities in the time periods from March to june and from september to november of 2012. The technique of baiting with larvae of Galleria mellonella (L.) was used. After verifying the entomopathogenicity of the samples by Koch postulates, we multiplied in G. mellonella larvae, and stored in tissue culture flasks (1000 JI/ml ) at 10 °C. Entomopathogenic nematodes were detected in 33.3% of samples and according to the color of the dead larvae only the genus Steinernema was found.
Keys words. Steinernema, Galleria mellonella, infective juvenils, biological control, Sciphophorus acupunctatus. Introducción
Los nematodos entomopatógenos que habitan en el suelo se encuentran ampliamente distribuidos en diferentes ecosistemas terrestres en todos los continentes, excepto en la Antártica (Ngo-Kanga, et al., 2012). Estos son reconocidos como agentes de control biológico, particularmente contra insectos barrenadores y algunas plagas edafícolas o que presentan una fase de desarrollo en el suelo (Gaugler, 2002; Alatorre, 2010). Los nematodos entomopatógenos de las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae, son alternativas biológicas al uso de insecticidas químicos, considerando su nulo impacto sobre invertebrados, plantas, y otros organismos no plaga (Mekete et al., 2005). Pueden ser almacenados por largos períodos y mantener su viabilidad y patogenicidad hasta por 6-12 meses a temperaturas de 4-10°C. El único estadio de vida libre en el suelo es el infectivo juvenil (JI), el cual busca, infecta y mata a los insectos hospederos. El control de plagas por los steinernematidos y heterorhabditidos se debe a la asociación simbiótica con bacterias específicas del género Xenorhabdus y Photorhabdus respectivamente, ubicadas en
el intestino de los infectivos juveniles. Después de localizar a su hospedero susceptible el JI invade a través de las aberturas naturales (boca, ano, espiráculos, membranas intersegmentales) y penetra al hemocele (Lewis et al. 2006). Los JI liberan la bacteria, la cual causa una septicemia letal, usualmente dentro de 24-48 horas (Mekete et al., 2005). Los nematodos se alimentan de la bacteria y del cadáver en descomposición del insecto, se reproducen por 2-3 generaciones dentro del cadáver completando su desarrollo y emergen como juveniles de tercer estadio o JI, dispersándose dentro del suelo en búsqueda de nuevos hospederos (Alatorre, 2010).
En México, es poca la información con respecto al potencial, identificación y distribución de nematodos entomopatógenos nativos, que puedan permitir la selección de aislamientos o especies eficaces (Salas-Luévano et al., 2001). Uno de los trabajos pioneros data de 2003, cuando en un muestreo de suelos realizado a nivel estado de Oaxaca se identificaron solo dos nematodos entomopatógenos, Heterorhabditis sp. y Steinernema feltiae (Ruiz et al., 2003).
El objetivo del presente estudio fue aislar nematodos entomopatógenos nativos en zonas cultivadas con agave mezcalero de la región de Valles Centrales de Oaxaca, con el propósito de avanzar en el conocimiento de la biodiversidad existente e identificar especies con potencial biocontrolador.
Materiales y Método
Los Valles Centrales de Oaxaca, se localizan a una altitud de 1000-1600 msnm. Predomina el Clima semicálido-semiseco con lluvias entre abril-octubre y presenta un verano cálido con una temperatura media mensual que oscila entre 20 y 24 °C, y una precipitación media de 1000 mm (García, 1988).
Muestreo de Suelos. Dentro del cultivo de agave se seleccionaron 3-5 sitios, y en cada uno de ellos se recolectaron tres muestras compuestas de suelo de 1 kg con una pala de mano; después de retirar los 5 cm superficiales, se muestreó a una profundidad de 15-20 cm, cubriendo un área de aproximadamente 20 m2, dejando al menos 100 m de separación entre cada sitio
(Stock et al., 1999). Los muestreos se llevaron a cabo de marzo a junio y de septiembre a noviembre de 2012.
Las muestras obtenidas de cada sitio, se mezclaron uniformemente en una cubeta y posteriormente se tomó 1 kg en una bolsa de polietileno, para evitar la pérdida de humedad, se etiquetó y colocó en una hielera (10 °C) para mantenerlas en condiciones de frío durante su traslado al laboratorio, donde se almacenaron a 5°C hasta su procesamiento y análisis en el laboratorio al día siguiente.
Insecto Cebo. Para la captura de los nematodos entomopatógenos se utilizaron larvas del último instar de Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae), insecto muy susceptible al ataque de estos organismos (Bedding y Arkhust 1975).
La cría de G. mellonella mantenida en una cámara (67% de humedad relativa y 29°C de temperatura), se alimentó con una dieta constituida con 40 g de salvado de trigo, 75 g de levadura de cerveza, 300 g de cereal de arroz, 120 ml de glicerina, 100 ml de miel de abeja. Los adultos se mantuvieron en frascos grandes de vidrio para la oviposición y, los huevos y larvas en recipientes de plástico rectangulares de uso doméstico (24 x 32 x 11 cm). El tiempo de obtención de estas larvas fue aproximadamente 40 días.
Aislamiento de NEP. Se colocó una cantidad de 300 g de suelo en un recipiente de plástico de 500 ml, humedeciendo las muestras muy secas con agua destilada (10 %). Enseguida a cada contenedor se le agregaron cinco larvas del último estadio de G. mellonella, los cuales se
taparon e invirtieron, permaneciendo a temperatura ambiente (25±3°C) durante siete días (Stock
et al., 1999).
Después del período de incubación los cadáveres de las larvas se recolectaron, se lavaron con agua destilada estéril, y se desinfectaron superficialmente por inmersión en hipoclorito de sodio al 0.1% durante 30 segundos, después se enjuagaron tres veces en recipientes con agua destilada estéril (Woodring y Kaya, 1988).
Para recolectar los juveniles infectivos que emergieron de los cadáveres, se transfirieron e incubaron en trampas de White (1927) modificada (Kaya y Stock, 1997). Los cadáveres que mostraron signos y síntomas característicos de infecciones por nematodos entomopatógenos se examinaron bajo un microscopio estereoscópico. Los cadáveres permanecieron en la trampa por una semana, esperando a que los juveniles infectivos salieran y migraran al agua.
Patogenicidad y almacenamiento de NEP. Se colocaron cinco larvas del último estadio de G. mellonella sobre un papel filtro húmedo con suspensión de JI dentro de una caja Petri (100 x 15 mm), para verificar si había reinfección de acuerdo a los postulados de Koch.
Los juveniles infectivos que emergieron en la trampa de White, se conservaron en matraces de 250 ml en agua destilada estéril, manteniéndolos en refrigeración a 10°C (Woodring y Kaya, 1988).
Resultados y Discusión
De 60 muestras analizadas se encontraron 20 con nematodos entomopatógenos (33.3%). El porcentaje de muestras positivas localizadas para cada una de las regiones en función al número de muestras recogidas se encontró 35% para Tlacolula, 30% para Ocotlán-Ejutla y 35% para Zimatlán-Zaachila (Cuadro 1).
Cuadro 1. Porcentaje de localidades positivas con nematodos entomopatógenos en cinco distritos de Oaxaca. Región No. de muestras No. de muestras positivas Muestras positivas para
NEP (%)
Tlacolula 20 7 35
Ocotlán-Ejutla 20 6 30
Zimatlán-Zaachila 20 7 35
TOTALES 60 20 100
Actualmente no existe referencia de estudio en plantas de agave en el estado de Oaxaca, que sirva de comparación o referencia de caso. La presencia de nematodos entomopatógenos con 33.3% es mayor a lo reportado por Stock (1995) en la región de las pampas de Argentina (13.2%), García del Pino (1996) en la región de Cataluña España (23.3%), Stock et al., (1999) en California (26.3%), Steiner (1996) en los Alpes Suizos (27%), Mekete et al., (2005) en Etipía (6.9%), Melo et al., (2009) en Colombia (6%), González, (2006) en el Pacífico centro mexicano (23.8%).
Sin embargo, esta proporción está por debajo de lo reportado por otros autores; Méndez et
al., (2011) en Valle del Cauca, Colombia (36.84%) y Girón et al., (2012) en Valles centrales de
Oaxaca, México (49.1%).
Los nematodos aislados en las diferentes localidades se identificaron a nivel de género con base en la sintomatología que mostraron los cadáveres, de acuerdo a la coloración de los
insectos infectados, que a menudo son flácidos y de color crema. Kaya y Stock (1997) mencionan que larvas de G. Mellonella infectadas con nematodos entomopatogenos del género Steinernema spp., muestran una coloración creomosa a gris pardo.
Para este estudio la prevalencia de 100% de nematodos entomopatógenos del género
Steinernema en las muestras de suelo indican una alta incidencia de estos organismos, lo cual
concuerda con Stock et al., (1999), quienes reportan 80% de Steinernema, así mismo, Ruiz-Vega
et al., (2003) reportan 67% de prevalencia del género Steinernema en muestras de suelo y Girón et al., (2012) reportaron a su vez 81% de Steinernema.
Posteriormente se realizará la caracterización molecular de los NEPs aislados, así como la determinación de su potencial biocontrolador mediante bioensayos.
Conclusiones
Los nematodos entomopatogenos fueron detectados en 33.3% de las muestras, con base en la coloración de las larvas muertas, solo se identificó el género Steinernema.
Literatura Citada
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ENTOMOTOXICIDAD DE EXTRACTOS DE LIRIO ACUÁTICO Eichhornia crassipes SOBRE EL GUSANO FALSO MEDIDOR Trichoplusia ni (LEPIDOPTERA:
NOCTUIDAE)
Antonio Flores-Macías1, Miguel Angel Ramos-López2, Silvia Rodríguez-Navarro1, María Guadalupe Ramos-Espinosa1, Juan Esteban Barranco-Florido3. 1Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Xochimilco, Departamento de Producción Agrícola y Animal, Calzada del Hueso 1100, Col. Villa Quietud, C.P. 04960, México D.F., 2Universidad Autónoma de Querétaro, Facultad de Química, Cerro de las Campanas s/n, Santiago de Querétaro, Querétaro, C.P. 76010., 3Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Xochimilco, Departamento de Sistemas Biológicos. [email protected]
RESUMEN. La investigación tuvo la finalidad principal de evaluar la toxicidad de cinco extractos (metanol, hexano, acetato de etilo, diclorometano y agua) de la planta E. crassipes (lirio acuático) sobre el insecto plaga T. ni (gusano falso medidor). Los datos obtenidos de los bioensayos mostraron que los extractos obtenidos con solventes de polaridad media (acetato de etilo y diclorometano) mostraron una toxicidad significativamente superior que los demás tratamientos. Ello pudiera significar que estos extractos tienen un alto potencial para ser utilizados como insecticidas botánicos en el combate del insecto plaga mencionado. Estudios de campo complementarios son necesarios para determinar si la insecticida se mantiene en condiciones de campo no controladas
Palabras clave. Lirio acuático, entomotoxicidad, insecto plaga, falso medidor de lechuga.
Entomotoxicity of extracts from water hyacinth Eichhornia crassipes on cabbage looper Trichoplusia ni (Lepidoptera: Noctuidae)
ABSTRACT. The aim of this research was to assess the toxicity of five extracts (methanol, hexane, ethyl acetate, dichloromethane and water) from the plant E. crassipes (water hyacinth) on the insect pest T. ni (cabbage looper). Data from the bioassays showed that extracts obtained with medium polarity solvent (ethyl acetate and dichloromethane) showed a significantly higher toxicity than the other treatments. This could mean that these extracts have a high potential for use as botanical insecticides in controlling the mentioned insect pests. Complementary field studies are needed to determine if the insecticide effect remains under uncontrolled field conditions.
Key words. Water Lily, entomotoxicity, insect pest, cabbage looper. Introducción
Hoy en día la necesidad no sólo es producir alimentos para una población creciente, sino asegurar que estos sean saludables y sostenibles. Uno de los componentes que forman parte del sistema agrícola, que merma su producción, es la presencia de plagas. Si bien los insecticidas químicos han permitido un control eficaz de estas (Gelman et al., 2001), se ha establecido que estos compuestos son altamente perjudiciales para la salud humana y los ecosistemas, por su persistencia en el ambiente, favorecen que los insectos plaga sean resistentes a ellos, lo que ha motivado el uso de dosis cada vez mayores o de productos cada vez más tóxicos. Esto ha generado una gran preocupación en el ámbito mundial, por lo que ahora los científicos se enfrentan a la necesidad de buscar alternativas efectivas y ecológicamente menos nocivas al entorno para el control de plagas. Una de las alternativas a este problema, es la utilización de insecticidas botánicos, que son extractos naturales obtenidos a partir de plantas que causen la muerte de los insectos (acción insecticida) o que interfieran con su desarrollo (acción insectistática). El objetivo de éstos, es reducir la dependencia de químicos sintéticos, sin que ello este asociado a una disminución de la productividad en campo (Gelman et al., 2001; Tamez et
aplicación en los países en desarrollo debido a que en éstos existe un conocimiento ancestral y práctica tradicional sobre la utilización de plantas (Isman, 2008).
La práctica de usar aceites esenciales de plantas, por sus cualidades medicinales y sus propiedades insecticidas, obtenidos a través de destilación mediante vapor, se remonta al menos a dos milenios entre las culturas china, egipcia, griega e india (Isman, 2006). En este sentido, México tiene una cultura y experiencia ancestral en la utilización de plantas para ambos fines.
La investigación y tecnología moderna han demostrado que ciertos aceites esenciales de plantas y/o sus constituyentes tienen un amplio espectro de actividad contra insectos y ácaros plaga, patógenos de plantas, hongos y nematodos (Isman, 2000; Miresmailli, 2006). Sin embargo, la investigación a realizar con plantas con capacidad insecticida tiene un enorme potencial por desarrollar, especialmente en países con una gran biodiversidad como es el caso de México.
Los avances tecnológicos han permitido un gran adelanto en el estudio de los metabolitos secundarios obtenidos a partir de plantas, que son constituyentes primarios de los insecticidas botánicos, los que se perfilan para ser un componente principal en el logro de una producción de alimentos sostenible.
La planta E. crassipes ha sido un problema en los ecosistemas acuáticos, de donde al ser extraída se convierte en desperdicio costoso de manejar. Por ello, se han realizado trabajos orientados a utilizarla como materia prima; éste es el caso de su empleo como material de investigación en el área de los insecticidas botánicos (Jayanthi et al., 2012).
Lo anteriormente expuesto es la razón principal por la cual se desarrolló la presente investigación, en la que el objetivo principal fue evaluar la actividad insecticida de los extractos obtenidos a partir de la planta E. crassipes (lirio acuático) sobre el insecto plaga T. ni (gusano falso medidor).
Materiales y Método
Obtención de extractos.Para la obtención de los extractos se utilizaron disolventes, que se constituyeron en los tratamientos evaluados en la investigación (agua, metanol, hexano, cloruro de metileno y acetato de etileno).
El trabajo se inició con la recolección de material vegetal obtenido de los canales de Xochimilco, el cual se secó a la sombra. Se pesó 1 Kg de tejido foliar, el que se molió manualmente en un mortero de ágata; posteriormente se mezcló con 500 ml de metanol, se dejó reposar 24h y se procedió a realizar la separación mediante ebullición durante 4 h, se filtró y el disolvente se eliminó a presión reducida en un evaporador rotatorio. El disolvente terminó de evaporarse utilizando una corriente de nitrógeno inyectado mediante una terminal tipo aguja. El extracto de guardó dentro de un frasco color ámbar y se refrigeró a 4oC hasta su utilización.
Un gramo del extracto obtenido fue separado mediante la técnica del embudo de separación, para lo cual se le mezcló con 45 mL de metanol, 5 mL de agua y 50 mL de hexano, se agitó manualmente durante un minuto y se dejó reposar dentro del embudo. Este procedimiento y el de los disolventes descritos a continuación se repitieron tres veces. Las primeras soluciones obtenidas fueron una con hexano y la otra con metanol. A esta última se le agregaron 60 mL de agua y 50 mL de cloruro de metileno (diclorometano), se volvió a agitar durante un minuto y se dejó reposar nuevamente durante el mismo tiempo. La solución de cloruro de metileno se guardó en un frasco ámbar, mientras que la solución restante se colocó en el rotovapor para eliminar el metanol existente. La solución restante se mezcló con 50 mL de acetato de etileno y se dejó
reposar durante el tiempo antes mencionado, para posteriormente obtener por diferencia de densidad en el embudo otras dos soluciones; la de acetato de etileno y la de agua.
Todas las soluciones fueron evaporadas utilizando el rotovapor para obtener un sólido de cada una, el cual fue pesado al final del proceso.
Bioensayos. La especie Trichoplusia ni (Lepidoptera: Noctuidae fue obtenida de colonias establecidas por más 50 generaciones, las que estuvieron en una cámara bioclimática a 24 0C y
periodo de 16:8 horas luz:oscuridad.
Para determinar la toxicidad de los extractos, se realizaron aplicaciones tópicas sobre larvas del tercer instar. Diez larvas fueron colocadas en una caja de Petri de 10 cm de diámetro que tenía un papel filtro en su fondo. Mediante una microjeringa se aplicó 1 µL de solución metanólica al 1%, previamente preparada para cada uno de los cinco extractos. Cada larva por separado fue introducida en una caja de Petri con papel filtro en el fondo, colocando 5 g de dieta artificial (No. 9795, Bio-Serve Inc., Frenchtown, NJ. USA). Para el tratamiento control se utilizó sólo metanol. Los tratamientos fueron distribuidos al azar dentro de una cámara bioclimática en las mismas condiciones a las anteriormente indicadas. Después de un periodo de 24 h se realizó un conteo de larvas vivas y muertas, con las que se determinó la mortalidad.
Análisis estadísticos. Los datos obtenidos fueron sometidos a pruebas de normalidad (prueba de Shapiro-Wilk W) y homosedasticidad (prueba de Welch), análisis de varianza (p≤0.05) p b f m (T k ≤0.05): E á ó programa de análisis estadístico (SAS, 2001).
Resultados y Discusión
La toxicidad ocasionada por los seis tratamiento varío desde un porcentaje bajo (17.6%) hasta uno alto (90.9%). El extracto con hexano como solvente fue el tratamiento que ocasionó la menor mortalidad, seguido por el control (metanol), mientras que el extracto crudo y el de agua presentaron el mismo porcentaje. El extracto obtenido con acetato de etilo y el de cloruro de metileno fueron los que lograron un mayor porcentaje de mortalidad (Fig. 1).
El análisis de varianza indicó que se rechaza la hipótesis nula y se acepta la alterna, lo que indica que existe una diferencia entre los tratamientos. La prueba de diferencia de medias muestra q f í (T k ≤0.05). m ad ocasionada por el tratamiento diclorometano y acetato de etileno, pero si entre estos dos respecto a los demás extractos y control. El mismo tipo de análisis muestra que no hay diferencia significativa entre el control y los extractos obtenidos con el disolvente hexano, agua y extracto crudo.
El trabajo de Jayanthi (2012) evaluó extractos de éter de petróleo, acetona, acetato de etilo, metanol y etanol, encontrando que la fracción de etanol mostró la más alta actividad larvicida y pupicida contra Culex. quinquefasciatus. En comparación con los resultados obtenidos en el presente trabajo, los tratamientos que ocasionaron mayor mortalidad fueron obtenidos con disolventes que ocupan posiciones intermedias en cuanto a su polaridad, esto es, no son poco polares (como el hexano) ni muy polares (como el agua, metanol y el etanol). Ello hace suponer que los metabolitos presentes en las soluciones de diclorometano y acetato de etilo fueron removidos cuando se utilizaron los otros disolventes estudiados. Se ha encontrado que E.
crassipes es una planta que absorbe elementos contaminantes (Chatterjee, 2011) que pudieron
influir en el efecto tóxico evaluado en el presente trabajo. Sin embargo, esto no fue investigado y más trabajos serán necesarios para determinar esta variable que pudiera afectar la capacidad insecticida de los extractos estudiados.
Figura 1. Mortalidad larval promedio de T. ni ocasionada por los diferentes extractos obtenidos a partir de E.
crassipes (* indica igualdad entre tratam T k ≤0.05).
Conclusiones
Se requiere de la realización de más trabajos para determinar con mayor precisión el potencial insecticida de los extractos de E. crassipes, principalmente, realizando bioensayos de toxicidad sobre otras especies de insectos plaga. Sin embargo, los resultados de la presente investigación muestran que la planta tiene capacidad para producir metabolitos que pueden ser utilizados como un insecticida botánico, cuando sus compuestos son extraídos empleando los disolventes de polaridad media como el acetato de etilo y el diclorometano. Posteriores pruebas de campo son indispensables para determinar si la toxicidad permanece constante bajo condiciones diferentes a las estudiadas en condiciones de laboratorio.
Agradecimientos
Expresamos nuestro reconocimiento y agradecimiento al Dr. Martín López Hernández del ICMyL de la Universidad Nacional Autónoma de México por su colaboración en el manejo de datos y sus valiosas sugerencia que mejoraron el presente manuscrito.
Literatura Citada
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EVALUACIÓN DEL EXTRACTO CLOROFÓRMICO DE Salvia keerlii (LAMIACEAE) CONTRA EL GUSANO COGOLLERO DEL MAIZ Spodoptera frugiperda
(LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE)
Miguel Angel Ramos-López1, Antonio Flores-Macías2, Diana Romo-Asunción3, Cesáreo Rodríguez-Hernández4, Juan Ramiro Pacheco-Aguilar1, Ramón Álvar Martínez-Peniche1. 1Universidad Autónoma de Querétaro, Facultad de Química, Cerro de las Campanas s/n, Santiago de Querétaro, Querétaro, C.P. 76010., 2Universidad Autónoma Metropolitana unidad Xochimilco, Departamento de Producción Agrícola y Animal, Calzada del Hueso 1100, Col. Villa Quietud, C.P. 04960, México D.F., 3Exalumna de la licenciatura de Agronomía, Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Xochimilco, Calzada del Hueso 1100, Col. Villa Quietud, C.P. 04960, México D.F., 4Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas, Campus Montecillos Km 36.5 Carretera México-Texcoco, Texcoco, Estado de México, C.P. 56230.
RESUMEN. Se evaluaron las actividades insectistática e insecticida del extracto clorofórmico de las partes aéreas de Salvia keerlii (Lamiaceae), desde larva de primer instar hasta la emergencia de adultos del gusano cogollero del maíz Spodopterafrugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). El extracto mostró ambas actividades. La viabilidad larval media fue (VL50) de 1527 ppm. A 1000 ppm la actividad insectistática aumento las fases larval/pupal en 4.9/3.1 d respectivamente, y el peso pupal disminuyó 16.4%. Estos resultados indican que este extracto puede ser usado para controlar S. frugiperda, por presentar actividad insecticida e insectistática contra este insecto plaga. Sin embargo, deberán hacerse evaluaciones extras para determinar si el comportamiento insecticida e insectistático se conservan bajo condiciones de campo.
Palabras clave: insectistático, insecticida, gusano cogollero de maíz, Salvia keerlii.
Chloroformic extract evaluation of Salvia keerlii (Lamiaceae) against fall armyworm Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae)
ABSTRACT. Insectistatic and insecticidal activities of aerial parts of chloroform extract from Salvia keerlii (Lamiaceae) were evaluated from first larval instar to adult emergence of fall armyworm Spodopterafrugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). The extract showed both activities. Its larvae viability fifty was VL50 1527 ppm. At 1000 ppm the insectistatic activity augmented the larval/pupal phase 4.9/3.1 d respectively, and the pupal weight was diminished 16.4%. These results indicate that this extract may be used to control S. frugiperda due to their insecticide and insectistatic activities against this insect pest. However, further research must be done in order to determine if this activity remains under field conditions.
Key words: insectistatic, insecticide, fall armyworm, Salvia keerlii. Introducción
El gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) es la principal plaga que afecta al maíz, pero también ataca a otras 50 especies de plantas (Arana, 1996; Molina et al., 2003); el abuso en el uso de insecticidas químico sintéticos para su control ocasiona contaminación y resistencia por lo que se deben implementar medidas biorracionales (Mareggiani, 2001). Muchas sustancias químicas vegetales tienen actividad insectistática y/o insecticida (Rodríguez-Hernández y Vendramim, 1996).
De la familia Lamiaceae ya se han reportado varios géneros y especies con actividad insectistática y/o insecticida (Khalfiet al., 2006; Sanon et al., 2006; Kotan et al., 2008). Con el uso de sustancias vegetales para el control de insectos que son plaga como S. frugiperda se reduce la probabilidad de generar resistencia ya que ejercen menor presión selectiva (Saxena, 1986). Por lo que la finalidad de la presente investigación fue la de determinar la actividad insectistática e insecticida del extracto clorofórmico de Salvia keerlii (Lamiaceae) en larvas de primer instar de S. frugiperda.
