TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE RABIA
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(2) Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 2.
(3) Contenido. 3.
(4) Importancia. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 4.
(5) Importancia. Indicaciones y recomendaciones para evitar accidentes 5.
(6) DEFINICIONES. •. Seguridad(ISO 45001). •. Accidente de trabajo. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 6.
(7) ¿POR QUÉ PODRÍA SUCEDER UN ACCIDENTE?. a) Condiciones Inseguras:(4%). b) Actos Inseguros: (96%). Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 7.
(8) DEFINICIONES Peligro: Fuente o situación potencial de daño , lesión o daño. Riesgo: lesión o enfermedad. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 8.
(9) BIOSEGURIDAD. Es un conjunto de normas y medidas para proteger la salud del personal, frente a riesgos biológicos, químicos y físicos a los que está expuesto en el desempeño de sus funciones, también a los pacientes y al medio ambiente. (OMS 2005). Fuente: El desarrollo del símbolo de riesgo biológico. https://seguridadbiologica.blogspot.com/2010/07/el-desarrollo-del-simbolo-deriesgo.html. 9.
(10) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD. 1. Universalidad 2. Barreras de protección 3. Medidas de eliminación. Fuente: "Medidas de Bioseguridad“. jueves, 8 de septiembre de 2016. http://medidasdebioseguridadgraco.blogspot.com/2016/09/medidas-debioseguridad.html.. 10.
(11) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD 1.- UNIVERSALIDAD. Todo el personal debe seguir las precauciones estándares •. Capacitación. •. Instructivos Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 11.
(12) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD 2.- USO DE BARRERAS PROTECTORAS. Establece el concepto de evitar la exposición directa minimizando los accidentes.. Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 12.
(13) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD. Considerar: que las muestras procesadas durante la rutina pueden contener otros agentes patógenos que atacan el sistema nervioso central.. 13.
(14) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD INMUNIZACIÓN. Esquema profiláctico pre-exposición 3 semanas después de la última 0,5 UI/ml Monitoreo de titulación de anticuerpos rábicos. 14.
(15) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD EQUIPO DE PROTECCIÓN PERSONAL. •. Overol. •. Guantes de hule grueso. •. Careta o mascarillas con protección. •. Cubre bocas- mascarilla. •. Cofia. •. Botas de campo. •. Faja. •. Mandil impermeable. 15.
(16) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD CONSIDERAR. • Lavarse siempre las manos • Cubrir cortadas. • Herida lavada con agua y jabón, Desinfección del material utilizado. 16.
(17) PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD 3. MEDIDAS DE ELIMINACIÓN Es el conjunto de dispositivos y procedimientos a través de los cuales se procesan y eliminan muestras biológicas sin riesgo para los operadores y la comunidad. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 17.
(18) APERTURA DEL CRÁNEO Y TOMA DE MUESTRA GRANDES Y MEDIANAS ESPECIES Recolección de muestras de animales sospechosos de rabia o de aquellos animales que muestren signos de alguna enfermedad nerviosa. El proceso de sacrificio no debe dañar el encéfalo (NOM-033SAG/ZOO-2014). 18.
(19) APERTURA DEL CRÁNEO Y TOMA DE MUESTRA. Extracción y toma de muestra: •. MVZ o personal entrenado. •. EPP. •. Se recomienda lavar antes de iniciar la necropsia con abundante agua y jabón. •. Separar la cabeza del cuerpo del animal a nivel de la articulación atlanto-occipital. •. Ubicarla sobre una mesa o soporte.. •. Sujetar firmemente la cabeza. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 19.
(20) APERTURA DEL CRÁNEO INSTRUMENTOS Y MATERIAL •Segueta o sierra de carnicero •Cuchillo •Tijeras para cirugía •Pinzas. PARA EL ENVÍO DE LAS MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO: •Bolsas de plástico (de preferencia con cierre hermético, tipo ziploc). •Frascos de plástico de boca ancha con cierre hermético de un volumen de 1 y medio litros •Refrigerantes en cantidad suficiente o Glicerina fosfatada al 50 por ciento •Hielera. 20.
(21) APERTURA DEL CRÁNEO APÉNDICE “A” (NORMATIVO) 1. Retirar la piel del cráneo y efectuar los siguientes cortes con segueta o sierra de carnicero para el corte de los huesos. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 21.
(22) APERTURA DEL CRÁNEO 2. El primer corte es el del hueso frontal, transversal y posterior a las cuencas oculares, las cuales sirven para sujetar la cabeza y como puntos de referencia.. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 22.
(23) APERTURA DEL CRÁNEO 3. Se hacen dos cortes, uno en cada hueso parietal, desde el agujero occipital hasta el hueso frontal haciendo un corte longitudinal. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 23.
(24) APERTURA DEL CRÁNEO 4. Desprender la bóveda craneana para exponer el encéfalo. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. •. 5. se disecan las meninges y se extrae cuidadosamente el encéfalo completo a partir del mesencéfalo (tallo cerebral) hasta los dos hemisferios. 24.
(25) APERTURA DEL CRÁNEO. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 25.
(26) APERTURA DEL CRÁNEO PRENSA MECÁNICA Garantizar la bioseguridad, la salud y seguridad del personal. Disminuye el riesgo de accidentes y enfermedades. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 26.
(27) 27.
(28) ENVÍO DE LA MUESTRA Normativa nacional e internacional. Normas Especiales Relativas a Mercancías Peligrosas establecidas por la Asociación Internacional del Transporte Aéreo (AITA). Estas indicaciones se resumen en el Capítulo 1.1.1. Recolección y envío de muestras para el diagnóstico (Sistema Básico de Triple Embalaje). NOM-051-SCT2/2003, ESPECIFICACIONES ESPECIALES Y ADICIONALES PARA LOS ENVASES Y EMBALAJES DE LAS SUBSTANCIAS PELIGROSAS DE LA DIVISIÓN 6.2 AGENTES INFECCIOSOS. 28.
(29) ENVÍO DE LA MUESTRA. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 29.
(30) ENVÍO DE LA MUESTRA. Diúrex. Cráneo. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 30.
(31) ENVÍO DE LA MUESTRA. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 31.
(32) ENVÍO DE LA MUESTRA. Principios de la bioseguridad Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 32.
(33) ENVÍO DE LA MUESTRA. 33.
(34) ENVÍO DE LA MUESTRA. Envío menor de 24 hrs: refrigeración. Mayor a 24 hrs: congelación.. Glicerol al 50% en PBS. Coordinar envíos.. 34.
(35) ACEPTACIÓN Y RECHAZO Muestras para aceptación: Bovino: encéfalo, médula espinal y cerebelo.. Perro: encéfalo, médula espinal y cerebelo (cabeza del animal). Quirópteros: se debe enviar el espécimen completo congelado. Roedores: se debe enviar el espécimen completo congelado. Foto: Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. 35.
(36) ENVÍO DE LA MUESTRA. Criterios de rechazo: Muestras inadecuadas (diferentes a las establecidas). Muestra insuficiente. Muestras en estado de descomposición con avanzados cambios autolíticos. Muestras no identificadas. Muestras en formaldehído, fenol o alcohol.. 36.
(37) 37.
(38) CENASA-LABORATORIO DE REFERENCIA DE OIE PARA RABIA Dirección: Rogelio Estrada Rodriguez [email protected] 38.
(39) 39.
(40) “DIAGNÓSTICO DE RABIA” Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA) Laboratorio de Referencia de la OIE para rabia MVZ EPA ISRAEL NICOLÁS REYES. Agosto, 2021. 40.
(41) Índice. Introducción. Pruebas diagnósticas. Conclusiones. 41.
(42) Introducción Laboratorio certificado en NMX 17025, ISO 9001, ISO 14001,ISO 45001 e ISO 17043. Fotos: Rogelio Barrios. 42.
(43) Laboratorio de Referencia de OIE para la rabia Alemania, Canadá, China, Corea, USA, Francia, Reino Unido, Sudáfrica, Rumania, India, Israel y México.. Mayo de 2014. https://www.oie.int/es/que-ofrecemos/red-de-expertos/laboratorios-de-referencia/ 43.
(44) Laboratorio de Referencia. Utilizar, promover y difundir los métodos de diagnóstico validados Utilizar, desarrollar Material de Referencia de acuerdo a las prescripciones de la OIE Distribuir a los laboratorios nacionales los productos biológicos 44.
(45) Laboratorio de Referencia. Organizar ensayos “interlaboratorios” con el fin de asegurar la equivalencia de los resultados (ISO/IEC17043). 45.
(46) Ensayos de Aptitud (AP) Evaluar. Estandarizar y armonizar. Emisión de resultados. Objetivo:. Identificar diferencias. Identificar problemáticas y acciones 46.
(47) Red de Laboratorios. SON CHIH Foto: CENASA. DUR. ZAC. YUC. QRO. CDMX. CENASA. CAMP TAB CHI. Foto: CENASA, BSL-2. 47.
(48) Diagnóstico. 48.
(49) Pruebas de laboratorio para el diagnóstico de rabia Área de rabia del Centro Nacional de Servicios de Diagnóstico en Salud Animal (CENASA).. - Manual de Sistema de Gestión Integral CNSADIM02. - Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres . OIE Manual of Diagnostics Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds, and bees). 8th edition, 2018 Capt. 3.1.17 - Eliminación de residuos (CNSATVP07).. 49.
(50) Métodos Diagnósticos Demostración de un componente viral:. Caracterización:. Inmunofluorescencia (IF). Secuenciación. Aislamiento del virus AVCC Prueba Biológica. Detección de ácido nucleico . RT-PCR convencional . PCR Tiempo Real. Foto: CENASA, BSL-2. Constatación. Detección de anticuerpos (FAVN). 50.
(51) Lineamientos Exposición con personas:. Positivo IFD. Secuenciación. Procesamiento y emisión de resultado Inmediato. Negativo. PCR AV. 51.
(52) Caracterización. ? SECUENCIAS DE REFERENCIA. CPA CENASA LASD SECUENCIACIÓN. ANÁLISIS FILOGÉNICO. Troupin et al., 2016 Venegas-Cureño et al., 2018. 52.
(53) IF. 1958 Goldwasser and Kissling +, ++, +++, ++++. https://www.cdc.gov/rabies/diagnosis/direct_fluorescent_antibody.html 53.
(54) Técnica de oro. +. 54.
(55) Inmunofluorescencia directa. 1. Corte o impronta (Ag desconocido). 3. Anticuerpo conjugado con FITC (reactivo). 5. OBSERVACIÓN Microscopio fondo oscuro-Luz UV. Incubación. 2. Fijado con acetona. 4. Lavado. 55.
(56) VENTAJAS. • Rápida, sencilla • Especificidad y sensibilidad del 96% al 99%. DESVENTAJAS. • Costo equipo • Lectura subjetiva. 56.
(57) AISLAMIENTO VIRAL (INOCULACIÓN EN RATÓN) •. Ratones 3-4 semanas. •. Inóculo: sobrenadante clarificado homogenado de material cerebral al 20%. •. Antibióticos. •. Observación 28 días. 57.
(58) Aislamiento viral (prueba biológica). El inóculo es el sobrenadante clarificado de un homogenado de material cerebral al 20%. 1. Corte o impronta (Ag desconocido). 3. Anticuerpo conjugado con FITC (reactivo). 5. OBSERVACIÓN Microscopio fondo oscuro-Luz UV. Incubación. 2. Fijado con acetona. 4. Lavado. Controles 58.
(59) RT- PCR. 59.
(60) Histopatología. • Cuerpos de Negri.. • Para las pruebas inmunohistoquímicas en muestras de encéfalo fresco o en cortes de tejido fijado en formalina también puede utilizarse conjugado de peroxidasa.. 60.
(61) Diagnóstico serológico Puede utilizarse para: • Determinar si existen o no anticuerpos como correlación de la presencia del virus • Anticuerpos maternos. • Evaluación de campaña de vacunación • Monitorear la eficacia de la vacunación (Comercio internacional) • Seroperfil: edad y etapa reproductiva. 61.
(62) Métodos serológicos SERONEUTRALIZACIÓN. 62.
(63) Método FAVN • Examen de laboratorio para detectar y medir la cantidad de anticuerpos en el suero. • Sueros Patrón.. • Utiliza cultivos celulares (células BHK21). • Cuando hay anticuerpos en el suero, previenen la infección de los cultivos por el virus rábico (CVS).. 63.
(64) Método FAVN • La lectura de las placas se realiza con el uso de un conjugado monoclonal marcados con un fluoróforo, el cual se adhiere a las células infectadas con el virus de la rabia. • En la lectura se cuentan los pozos infectados, y se hace el cálculo del título de anticuerpos, el cual se expresa en UI/ml.. 64.
(65) Resultados Si la mascota tiene un resultado satisfactorio (≥0,5 UI/ml) : • Tiene un determinado tiempo para entrar al país de destino o revacunación en algunos casos.. Si la mascota tiene un resultado no satisfactorio (<0,5 UI/ml): Puede recibir un refuerzo y volver a hacer la prueba (30 días pos vacunación). Es susceptible de sufrir un periodo de cuarentena en el país de destino.. 65.
(66) Criterios. https://sistemasssl.senasica.gob.mx/sinacertweb/pages/publico/consultaRequisitosExportacion.xhtml (GOB.MX - SENASICA.html) 66.
(67) 67.
(68) CENASA-LABORATORIO DE REFERENCIA PARA RABIA. Contactos: Dirección: Rogelio Estrada Rodriguez [email protected]. 68.
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