AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTIFUNGICA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Syzygium aromaticum SOBRE Aspergillus flavus

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(1)AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTIFUNGICA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Syzygium aromaticum SOBRE Aspergillus flavus. Luiz Torres Neto 1 Adriane Lettnin Roll Feijó 2 Karolina Cunha Schlosser 3 Flavio Dias Ferreira 4 Silvana Peterini Boeira 5. Resumo: Fungos têm sido evidenciados como micro-organismos de grande importância para os alimentos. O gênero Aspergillus são os principais deterioradores de alimentos e, apresentam como principais metabolitos secundários tóxicos as aflatoxinas, sendo substancias mutagênicas, teratogênicas e carcinogênicas. Com intuito de controlar a contaminação fúngica e consequentemente seus metabólitos secundários, produtos naturais têm sido relatado na literatura científica como uma alternativa viável e eficaz no controle de fungos toxigênicos. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito inibitório do óleo essencial de Syzygium aromaticum frente ao Aspergillus flavus. O óleo essencial de S. aromaticum foi obtido por hidrodestilação e foram avaliados a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM). Foi obtido um CIM de 80 µg mL-1 e a CFM de 300 µg mL-1. Portanto, esse óleo essencial demonstrou-se eficaz na inibição de Aspergillus flavus.. Palavras-chave: Óleo essencial; Syzygium aromaticum; Ação antifúngica; Aspergillus flavus. Modalidade de Participação: Pesquisador. AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTIFUNGICA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Syzygium aromaticum SOBRE Aspergillus flavus 1 Aluno de pós-graduação. torresneto1995@gmail.com. Autor principal 2 Técnico Administrativo em Educação. adrane.roll@gmail.com. Co-autor 3 Aluno de pós-graduação. karolinacunhas@gmail.com. Co-autor 4 Docente. ferreirafd@yahoo.com.br. Co-orientador 5 Docente. silvespeter@yahoo.com.br. Co-orientador. Anais do 9º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE.

(2) AVALIAÇÃO DA AÇÃO ANTIFUNGICA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Syzygium aromaticum SOBRE Aspergillus flavus 1. INTRODUÇÃO Os fungos dos gêneros Aspergillus são os principais deterioradores de alimentos e. possuem. distribuição. mundial,. devido. a. numerosos. esporos. aerotransportados (Hedayati et al., 2007). Os fungos deste gênero apresentam como principais metabólitos secundários tóxicos as aflatoxinas, as quais tem origem bioquímica a partir da molécula de acetil-CoA, através da via policetídica. Sendo conhecidas por serem substâncias altamente tóxicas, mutagênicas, teratogênicas e carcinogênicas (Mossini, 2006; Santos et al., 2014). Com intuito de reduzir a contaminação fúngica e reduzir impactos ambientes e danos à saúde do consumidor, extratos naturais têm sido amplamente relados na literatura científica como uma alternativa viável de substituição aos fungicidas químicos (Khan & Ahmad, 2011; IAPAR, 2008). Os óleos essenciais apresentam-se como uma alternativa potencial, pois possuem alto grau de atividade antimicrobiana, característica atribuída à ação de substâncias presentes em sua composição como os compostos fenólicos, monoterpenos e terpenóides (Antunes & Cavacob, 2010; Gilles et al., 2010). O cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) é uma árvore, da família Myrtaceae, sendo nativa das ilhas Mollucas do Norte (Indonésia) adaptada ao clima africano e brasileiro (Santos et al., 2007). Botões de cravo são compostos de cerda de 20% de óleo volátil rico em eugenol com concentração variando de 85 a 95% (Hemaiswarya & Doble, 2009). Este óleo essencial ainda vem sendo alvo de estudos pela sua ampla gama de atividades farmacológicas e biológicas, tais como, antioxidante, antifúngica e anticarcinogênica (Wannes et al., 2010; Xing et al., 2012; Uju et al., 2011). Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito inibitório do óleo essencial de S. aromaticum frente ao Aspergillus flavus. 2. METODOLOGIA.

(3) 2.1 Obtenção do óleo essencial Os botões de Cravo-da-índia foram obtidos comercialmente na cidade de Santa Maria, Rio Grande do Sul. A extração do óleo essencial foi realizada por hidrodestilação com aparato de Clevenger seguindo a metodologia de Santos et al., (2007). Após a extração, foi recolhida a parte oleosa e submetido à centrifugação com sulfato de sódio anidro para retirar água residual, adicionado em frasco âmbar e mantido sob-refrigeração a 4 ºC até a sua utilização. 2.2 Preparação do óleo essencial Para realização do experimento as concentrações do óleo essencial foram preparadas com 25 diluições variando de 0,1 a 0,00005% e distribuídas em tubos de ensaio de 5 mL. As diluições foram realizadas com solução estéril de Tween 80 a 0,1%. 2.3 Micro-organismo O fungo Aspergillus flavus foi obtido do banco de isolados do Laboratório de Toxicologia da Universidade Estadual de Maringá (DBS/UEM). As cepas foram mantidas em estoque de sílica e acondicionadas em refrigerador a 4 °C. Para a produção de esporos os fungos foram cultivados em meio de Ágar Batata Dextrose (BDA) por 7 dias a 28 °C no escuro em incubadora B.O.D (Nova Ética Modelo 411FPDE, Vargem Grande Paulista, São Paulo, Brasil). 2.4 Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) Os testes da atividade antifúngica foram realizados pela técnica de microdiluição em caldo, tendo a obtenção do inoculo baseada no recomendado pelo Manual Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) com algumas adaptações, documento M38-A CLSI, (2002). Para o ensaio, foram adicionados a cada concentraçãR DIHULGR. / GR &DOGR 6DERXUDXG 'H[WURVDGR &6' H. / GR LQyFXOR / GR yOHR HVVHQFLDO. na concentração previamente ajustada com solução Tween 80 a 0,1%, posteriormente os tubos foram incubados a 28 ºC sem agitação. O controle positivo foi representado pelo crescimento do fungo sem a presença de óleo essencial e o controle negativo com a ausência do óleo essencial e do fungo..

(4) A menor concentração capaz de produzir inibição visual do crescimento fúngico foi considerada como a CIM do óleo essencial para esta amostra. 2.5 Determinação da Concentração Fungicida Mínima (CFM) 8PD DOtTXRWD GH. / GRV WXERV XWLOL]DGRV SDUD D GHWHUPLQDomR GR &,0. bem como os controles positivos, foram subcultivados em placas de Ágar Sabouraud Dextrose, sem a presença de qualquer antifúngico. Após 72 e 120 horas de incubação a 28 °C foi realizada a leitura, sendo considerada CFM a menor concentração do óleo essencial que não apresentou visualmente crescimento fúngico na superfície do meio de cultivo após incubação. 3. RESULTADOS e DISCUSSÃO Neste estudo, a concentração inibitória mínima apresentou-se em 80 µg mL-1, e a concentração fungicida mínima foi de 300 µg mL-1. Outros estudos que avaliaram a ação do óleo essencial de S. aromaticum frente a fungos do gênero Aspergillus obtiveram CIM de 500 µg mL-1 e 3200 µg mL-1, sendo maiores ao encontrado em nossa pesquisa (Khan et al., 2011; Omidbeygi et al., 2007). Entretanto, Xing et al., (2012) encontraram uma concentração inibitória de 25 µL mL -1. Essa diferença nos valores da atividade biológica se deve principalmente pela variabilidade na composição do óleo essencial, a qual é influenciada pelo local de origem da planta, temperatura de secagem, processo de extração, além de outras variáveis como ciclo vegetativo, solo e clima (Morais, 2009; Msaada et al., 2012; Simões et al., 2005). Devido à inexistência de um consenso sobre o nível de inibição aceitável de extratos de plantas, Aligiannis et al., (2001) disponibiliza uma classificação para caracterizar a viabilidade ou não do extrato vegetal. Neste sentido, o autor classifica como forte inibidor, extrato vegetal que apresentar uma CIM até 500 µg mL -1, inibidor moderado, CIM entre 600 e 1500 µg mL -1 e fraco inibidor que apresentar uma CIM superior a 1600 µg mL-1. Seguindo esta classificação poderemos considerar que o nosso extrato pode ser considerado como um forte inibidor frente ao Aspergillus flavus, justificando desta forma a viabilidade no uso deste óleo essencial. 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS O presente estudo demonstrou que o óleo essencial de Syzygium aromaticum apresenta uma inibição satisfatória frente ao Asgergillus flavus, podendo ser um.

(5) potencial alternativo a fungicidas sintéticos. Entretanto se fazem necessários mais estudos com a perspectiva de identificar sua composição química e toxicidade. 5. REFERÊNCIAS ALIGIANNIS N.; KALPOTZAKIS E.; MITAKU S.; CHINOU I. B. Composition and antimicrobial activity of the essential oil of two Origanum species. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 40, p. 4168-4170, 2001. ANTUNES, M. D. C.; CAVACOB, A. The use of essential oils for postharvest decay control. A review. Flavour Fragrance Journal, v. 25, p. 351-366, 2010. GILLES, M.; ZHAO, J.; AN, M.; AGBOOLA, S. Chemical composition and antimicrobial properties of essential oils of three Australian Eucalyptus species. Food Chemistry, v. 119, p. 731-737, 2010. HEDAYATI, M. T.; PASQUALOTTO, A. C.; WARN, P. A.; BOWYER, P.; DENNING, D. W. Aspergillus flavus: human pathogen, allergen and mycotoxin producer. Microbiology, v. 153, p. 1677-1692, 2007. HEMAISWARYA. S.; DOBLE, M.; Synergistic interaction of eugenol with antibiotics against Gram negative bacteria. Phytomedicine. v. 16, p. 997-1005, 2009. KHAN, M. S. A.; AHMAD, I. In vitro antifungal, anti-elastase and anti keratinase activity of essential oils of Cinnamomum-, Syzygium- and Cymbopogon-species against Aspergillus fumigatus and Trichophyton rubrum. Phytomedicine, v. 19, p. 48± 55, 2011. CLSI. National Committee for Clinical Laboratory Standards Institute. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of filamentous fungi ± M38A. [Internet]. Wayne, Pa: National Committee for Clinical Laboratory Standards Institute;. 2008. [acesso. em. 10. out. 2016].. Disponível. em:. https://clsi.org/media/1455/m38a2_sample.pdf IAPAR. Instituto Agronômico do Paraná. O Nim - Azadirachta indica - um Inseticida Natural [Internet]. Paraná, PR: Instituto Agronômico do Paraná; 2008 [acesso em 22 ago. 2016].. Disponível. em:. http://www.iapar.br/modules/conteudo/conteudo.php?conteudo=410 MORAIS, L. A. S. Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais. Horticultura Brasileira, v. 27, p. 4050-4063, 2009..

(6) MOSSINI, S. A. G. Efeitos de extratos de Azadirachta indica A. Juss (Meliaceae) na produção de micotoxinas e na morfologia de fungos toxigênicos. 49f. 2006. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas), Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Maringá, Maringá, 2006. MSAADA. K.; TAÂRIT, M. B.; HOSNI, K.; SALEM, N.; TAMMAR, S.; BETTAIEB, I.; HAMMAMI, M.; LIMAM, F.; MARZOUK, B. Comparison of Different Extraction Methods for the Determination of Essential oils and Related Compounds from Coriander (Coriandrum sativum L.). Acta Chimica Slovenica, v. 59, p. 803-813, 2012. OMIDBEYGI, M.; BARZEGAR, M.; HAMIDI, Z.; NAGHDIBADI, H. Antifungal activity of thyme, summer savory and clove essential oils against Aspergillus favus in liquid medium and tomato paste. Food Control, v. 18, p. 1518±1523, 2007. SANTOS, L. G. M.; CARDOSO, M. G,; LIMA, R. K.; SOUZA, P. E.; GUIMARÃES, L. G. L.; ANDRADE, M. A. Avaliação do potencial fungitóxico do óleo essencial de Syzygium aromaticum (L.) Merr & Perry (CRAVO-DA-ÍNDIA). Tecno-lógica, v. 11, p. 11-14, 2007. SANTOS, M. C.; SOUSA, R. B.; OLIVEIRA, S. E. M.; LIMA, K. S. C.; LIMA, A. L. S. Micotoxinas e seu Potencial como Agentes de Guerra. Revista Virtual de Química, v. 6, p. 761-778, 2014. SIMÕES, M. O.; SCHENKEL, E. P.; GOSMANN, G.; MELLO, J. C. P.; MENTZ, L. A.; PETROVICK, P. R. Farmacologia da planta ao medicamento. 5.ed. Porto Alegre: UFRGS/UFSM, 2005. UJU, D. E.; OBIOMA, N. P. Anticariogenic potentials of clove: tobacco and bitterkola. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, v. 4, p. 814±818, 2011. WANNES, W. A., MHAMDI B., SRITI, J., JEMIA, M. B., OUCHIKH, O., HAMDAOUI, G., KCHOUK, M. E., & MARZOUK, B. Antioxidant activities of the essential oils and methanol extracts from myrtle (Myrtus communis var. italica L.) leaf, stem and flower. Food and Chemical Toxicology, v. 48, p. 1362-1370, 2010. XING, Y. G.; XU, Q. L.; LI, X. H.; CHE, Z. M.; YUN, J. Antifungal activities of clove oilagainst Rhizopus Nigricans, Aspergillus Flavus and Penicillium Citrinum in vitroand in wounded fruit test. Journal of Food Safety, v. 32, p. 84±93, 2012..

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