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FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

Diversidad bacteriana asociada al suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana mediante análisis metataxonómicos

Tesis

para optar el Título Profesional de Biólogo

AUTORA: Br. Ruiz Agurto, Silvana Carolina.

ASESOR: Dr. Quijano Jara, Carlos Helí.

CO-ASESORA: M.Sc. Santa-Cruz Vásquez, Yesenia Melissa.

TRUJILLO-PERÚ

2022

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II

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

RECTOR

Dr. CARLOS ALBERTO VÁSQUEZ BOYER

VICERRECTOR ACADÉMICO Dr. JUAN AMARO VILLACORTA VÁSQUEZ

VICERRECTOR INVESTIGACIÓN Dr. GUILLERMO ARTURO GARCIA PÉREZ

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III

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Dr. HEBER MAX ROBLEX CASTILLO

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIASBIOLÓGICAS Dra. ANGELITA CABRERA DE CIPRIANO

´

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IV

PRESENTACIÓN

Señores miembros del jurado:

En cumplimiento de las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la

Escuela Académico Profesional de Ciencias biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto su consideración y criterio, el presente trabajo de investigación titulado:

Diversidad bacteriana asociada al suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana mediante análisis metataxonómicos.

Con el cual cumplo uno de los requisitos indispensables para obtener el título de Biólogo.

Trujillo, diciembre del 2022.

………..

Br. RUIZ AGURTO, SILVANA CAROLINA

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V

CERTIFICACION DEL ASESOR

El que suscribe, Dr. Quijano Jara, Carlos Helí, en calidad de profesor asesor y M.Sc.

Santa-Cruz Vásquez, Yesenia Melissa, en calidad de co-asesora de la tesis Diversidad bacteriana asociada al suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana mediante análisis metataxonómicos.

Certifica:

Que la presente tesis ha sido ejecutada conforme a los objetivos propuestos y con las orientaciones pertinentes al Tesista.

En cuanto al informe, éste ha sido revisado y acogido a las observaciones y sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo al bachiller Silvana Carolina Ruiz Agurto para continuar con los trámites correspondientes.

Trujillo, diciembre del 2022.

………

Dr. Quijano Jara, Carlos Helí

ASESOR

………

M.Sc. Santa Cruz Vásquez, Yesenia Melissa

CO-ASESORA

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VI

JURADO DICTAMINADOR

Dr. Ana Marlene Guerrero Padilla PRESIDENTE

Dr. Carlos Alberto León Torres SECRETARIO

Dr. César Augusto Medina Tafur MIEMBRO

Dr. Carlos Helí Quijano Jara ASESOR

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VII

APROBACION

Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaramos que el presente informe de la tesis ha cumplido con los requisitos fundamentales exigidos;

siendo aprobado por unanimidad.

Dr. Ana Marlene Guerrero Padilla PRESIDENTE

Dr. Carlos Alberto León Torres SECRETARIO

Dr. César Augusto Medina Tafur MIEMBRO

Dr. Carlos Helí Quijano Jara ASESOR

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VIII

DEDICATORIA

A Dios quien ha sido mi guía y fortaleza que me ha permitido llegar al día de hoy.

A mis padres con los cuales siempre me brindaron su apoyo incondicional, amor y confianza. Está tesis y todo lo

que he logrado en la vida es en base a su esfuerzo, fortaleza, virtudes y valores inculcados en mí.

A mi hermana Lourdes por estar siempre a mi lado desde pequeñas en todo momento cuidándome y apoyándome a nivel personal y profesional y a mi sobrino Matheo por su gran cariño y amor. A mi cuñado Abel por ser como un hermano y es un ejemplo de perserverancia para mí.

A mi Mami Toche, mi Papi Luis y mi Tío Alfonso, mis ángeles en el cielo, los cuales siempre me inculcaron valores y sus consejos siempre están presentes en todo momento de mi vida.

A mis tias Ana y Aida por ser como segundas madres para mí, siempre cuidandome y dandome sus consejos.

A mi enamorado Pedro quien en todo momento me apoya y anima a conseguir mis sueños, motivándome a salir adelante y nunca darme por vencida.

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IX

AGRADECIMIENTO

A mis asesores de tesis; Dr. Carlos Helí Quijano Jara y Ms.Sc.

Yesenia Melissa Santa Cruz Vásquez; por su gran apoyo en las salidas a campo, en el procesamiento de datos, y guiarme en la

ejecución de la tesis con paciencia, compartiendo su experiencia y conocimientos.

Al señor Eric Rodríguez Rodríguez por su apoyo en la identificación de la flora.

A mis amigos Alfredo León, Frank Chico, Víctor Sánchez, José Neyra y mi primo José Ponce por su disposición y

apoyo en las en las salidas a campo a pesar del difícil acceso a la zona.

A la profesora Zulita Prieto Lara por la facilitación del laboratorio de Genética de poblaciones.

Agradecimiento profesor Cesar Medina Tafur encargado del Área de Conservación Privada Lomas del Cerro Campana.

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X

RESUMEN

El desarrollo de nuevas estrategias para la conservación de la biodiversidad y la gestión sostenible requieren una comprensión completa del proceso abiótico del suelo.

Sin embargo, los cambios estacionales causan estrés en el suelo, lo que afecta directamente la actividad del microbioma. El objetivo de esta tesis es determinar la diversidad bacteriana presente en el suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana en 2 épocas diferentes, empleándose metodologías moleculares actuales para obtener perfiles metataxonómicos. Se recolectaron tres muestras de suelo tanto para época húmeda (julio) y seca (diciembre), identificándose como flora acompañante a Solanum habrochaites S. Knapp & D.M. Spooner “tomate silvestre” y Tillandsia multiflora Benth. [=Racinaea multiflora (Benth.) M.A. Spencer & L.B. Sm.]

“achupalla verde”. Así mismo, se analizaron diversos parámetros físicos-químicos del suelo siendo los más influyentes la conductividad eléctrica (época seca) y materia orgánica (época húmeda). Los resultados del análisis metataxonómicos del suelo contienen 41 clases, 110 familias y 140 géneros, las clases principales son Alphaproteobacteria (época húmeda) y Actinobacteria (época seca), mientras que Acidobacteriae, Bacteroidia, Cyanobacteria, Gammaproteobacteria, Vicinamibacteria, Thermoleophilia, Blastocatellia, Phycisphaerae y Verrucomicrobiae se encontraron en menor proporción en ambas épocas. En las familias principales está Xantobacteraceae, Sphingomonadaceae, Geodermatophilaceae, Micrococcaceae, Pseudonocardiaceae, Streptomycetaceae, Spirosomaceae, Nostocaceae, Phycisphaerae. Finalmente, entre los géneros predominantes se encuentra a Pseudolabrys, Microvirga, Ellin 6055, Afipia, Sphingomonas, Blastococcus, Streptomyces, WD2101 soil group, Nostoc PCC 73102, Dyadobacter.

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XI En conclusión, los parámetros físico-químicos, la flora aledaña a los puntos de muestreo y la estación en el Área de Conservación Privada Lomas del Cerro Campana, ejerce una fuerte influencia en la estructura de la comunidad bacteriana del suelo del sotavento del piso superior de dicho recinto.

Por último, las comunidades microbianas presentes podrían ser de interés biotecnológico en diversas áreas como en la minería, medica, agroindustria, entre otros.

Palabras claves: Metataxonómica; Comunidad bacteriana; ACP Lomas del Cerro Campana; Época seca; Época húmeda.

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XII

ABSTRACT

The development of new strategies for biodiversity conservation and sustainable management requires a comprehensive understanding of the abiotic process of the soil.

However, seasonal changes cause stress in the soil, which directly affects the activity of the microbiome. The objective of this thesis is to determine the bacterial diversity present in the leeward soil of the upper floor of the ACP Lomas del Cerro Campana in 2 different times, using modern molecular methodologies to obtain metataxonomic profiles. Three soil samples were collected for both the wet season (July) and the dry season (December), identifying Solanum habrochaites S. Knapp & D.M. Spooner “wild tomato” and Tillandsia multiflora Benth. [=Racinaea multiflora (Benth.) M.A. Spencer & L.B. Sm.]

“green achupalla” as accompanying flora. Likewise, different physical-chemical parameters of the soil were analysed, the most influential being electrical conductivity (dry season) and organic matter (wet season). The results of the soil metataxonomic analysis contain 41 classes, 110 families and 140 genera, the main classes are Alphaproteobacteria (wet season) and Actinobacteria (dry season), while Acidobacteriae, Bacteroidia, Cyanobacteria, Gammaproteobacteria, Vicinamibacteria, Thermoleophilia, Blastocatellia, Phycisphaerae and Verrucomicrobiae were found in a lower proportion in both seasons. In the main families are Xantobacteraceae, Sphingomonadaceae, Geodermatophilaceae, Micrococcaceae, Pseudonocardiaceae, Streptomycetaceae, Spirosomaceae, Nostocaceae, Phycisphaerae. Finally, among the predominant genera are Pseudolabrys, Microvirga, Ellin 6055, Afipia, Sphingomonas, Blastococcus, Streptomyces, WD2101 soil group, Nostoc PCC 73102, Dyadobacter.

In conclusion, the physical-chemical parameters, the flora surrounding the sampling points and the season in the Lomas del Cerro Campana Private Conservation Area, exert a strong influence on the structure of the bacterial community of the leeward

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XIII soil of the upper floor of this precinct.

Finally, the microbial communities present could be of biotechnological interest in various areas such as mining, medicine, agro-industry, among others.

Keywords: Metataxonomics; Bacterial community; ACP Lomas del Cerro Campana; dry season; wet season.

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XIV

INDICE

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DETRUJILLO ... II AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS...III PRESENTACIÓN ... IV CERTIFICACION DEL ASESOR ... V JURADO DICTAMINADOR ... VI APROBACION ... VII DEDICATORIA ... VIII AGRADECIMIENTO... IX RESUMEN ... X ABSTRACT ... XII INDICE ... XIV

I. INTRODUCCIÓN ...1

II. MATERIALES Y MÉTODOS ...6

2.1. DESCRIPCIÓN DEL ÁREA DE ESTUDIO. ...6

2.2. UBICACIÓN DE LAS ESTACIONES DE MUESTREO ...8

2.3. CRITERIOS DEL MONITOREO EN LAS ESTACIONES DEMUESTREO ...8

2.4. PROCEDIMIENTO PARA LA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DESUELO ...10

2.4.1. PARA PARÁMETROS FÍSICO – QUÍMICOS ...10

2.4.1.1. RECOLECCIÓN DE MUESTRA ... 10

2.4.1.2. ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICOS ... 10

2.4.1.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO PARA ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICOS ... 11

2.5. IDENTIFICACION DE FLORA ALEDAÑA A LOS PUNTOS DEMUESTREO ... 11

2.5.1. GESTIÓN DE AUTORIZACIÓN DE COLECTA DE FLORA SILVESTRE CON FINES DE INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA ANTE EL SERVICIO NACIONAL FORESTAL Y DE FAUNA SILVESTRE (SERFOR) ... 11

2.5.2. RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE FLORA DEL SOTAVENTO DEL PISO SUPERIOR DEL ACP LOMAS DEL CERRO CAMPANA(500 A 1000 M.S.N.M.) .11 2.6. ANÁLISIS METATAXONOMICOS ASOCIADO AL SUELO ...12

2.6.1. EXTRACCIÓN DE ADN AMBIENTAL ...12

2.6.2. PREPARACIÓN Y SECUENCIACIÓN DE BIBLIOTECAS ...12

2.7. PROCEDIMIENTOS ANALITICOS ...13

2.7.1. ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO... 13

2.7.2. ASIGNACIÓN TAXONÓMICA. ... 14

III. RESULTADOS ...15

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XV

IV. DISCUSIÓN ... 31

V. CONCLUSIONES ...45

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...47

ANEXOS ...59

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I. INTRODUCCIÓN

En las costas del continente de América del Sur desde el norte de Perú y Chile, se encuentra ubicado un cinturón hiperárido conocido como lomas costeras abarcando aproximadamente 3 500 Km de forma continua (Dillon et al., 2003). La influencia de factores ambientales como el aislamiento de la cordillera de los andes, sumado a las bajas temperatura del mar debido a la corriente de Humboldt y el anticiclón del Pacifico Sur;

favorecen a la formación de nubes por debajo de los 1000 m.s.n.m (Brack y Mendiola, 2000). Estas formaciones se desplazan hacia las costas y si encuentran las condiciones ambientales adecuadas como viento, altura y humedad, desciende en forma de niebla, condensándose en la superficie de las plantas y afloramientos presentes en estas Lomas (Whaley et al., 2010).

El ACP Lomas del Cerro Campana se encuentra ubicada a lo largo de la árida franja costera entre las coordenadas 7°58’30” S–79°06’30” W. Este sistema lomal consta de tres pisos altitudinales: base del cerro, piso intermedio y piso superior. La base comienza desde los 50 hasta los 200 m.s.n.m. tiene características del Desierto Superarido - Templado Cálido, con un suelo de características arenoso; el piso intermedio empieza desde 200 a 500 m.s.n.m. con características del Desierto Perarido - Templado Cálido, presenta un suelo arenoso-rocoso y piso superior con características del Matorral Desértico - Templado Cálido inicia desde los 500 a 996 m.s.n.m. con un suelo arenoso- arcilloso y pedregoso (Rodríguez et al., 2012; Sagastegui et al., 1988). El ACP Lomas del Cerro Campana constituye el ecosistema lomal más importante del todo el cinturón hiperarido, debido a que alberga vegetación única en Sudamérica (Rodríguez, 2015).

El suelo constituye un reservorio clave en el desarrollo entidades biológicas que habitan este de ecosistema lomal. Así mismo, es uno de los ambientes con una amplia

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2 diversidad de flora y fauna, incluyendo poblaciones de gusanos de tierra, artrópodos, nematodos, protozoos, hongos y bacterias (Bender et al., 2016). Se estima que en un gramo de suelo forestal contiene alrededor de 4 × 10 7 células procariotas y el suelo cultivado alrededor de 2 × 10 9. Asi mismo, el ADN genómico aislado del suelo indica que en un gramo de suelo fresco puede haber entre 2000 y 18 000 genomas procarióticos (Daniel, 2005; Richter & Markewitz, 1995).

Sin embargo, la diversidad de microorganismos en el ambiente del suelo depende de los factores que influyen en la composición y propiedades del microbioma. El suelo es influenciado de forma directa por factores ambientales de procedencia natural como antropogénica, que determina la fertilidad del suelo donde las reservas en minerales, pH, contenido de materia orgánica y actividad microbiológica son los factores más importantes que determinan la calidad del suelo (Gałązka et al., 2018).

Así mismo, la alteración de algunos factores naturales como la acidez, salinidad, humedad, temperatura, luz, presión atmosférica, composición química del agua y atmósfera afecta directamente a los microorganismos que habitan en el suelo. Las comunidades microbianas del suelo también se ven afectadas por la estructura, la textura y los perfiles del suelo (Yan et al., 2015).

Los microorganismos representan una de las fuentes de biodiversidad del planeta, son los principales protagonistas de los ciclos biogeoquímicos del suelo como los del carbono, el nitrógeno, el azufre y el fósforo (Long et al., 2016), se encargan del mantenimiento de la fertilidad del suelo y la captación del carbono del suelo (Fierer, 2017).

El estudiar y monitorear de las comunidades microbianas del suelo representa un desafío importante para valorizar los recursos del suelo e implementar una gestión

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3 adecuada y sostenible (Lemanceau et al., 2015). Además de brindarnos un gran potencial biotecnológico para diferentes áreas como la agricultura, salud e industria para la elaboración de productos químicos, combustibles, enzimas, antibióticos (Chen et al., 2018; S. Y. Lee et al., 2019).

Estudios previos de microorganismos basados en cultivos microbiológicos en medios específicos, eliminaron una proporción significativa de microorganismos considerada como no cultivada (Mhuantong et al., 2015). Se estima que más del 90 % de los microorganismos no se pueden cultivar en las condiciones habituales de laboratorio y muchos de ellos siguen siendo desconocidos o no se examinan con ningún método disponible (Wolińska, 2019).

Aunque en los últimos años, las técnicas para el aislamiento y cultivo de microorganismos se han ido mejorado (Glaring et al., 2015; Lewin et al., 2013), solo 0,01 a 1% de los microorganismos de una muestra ambiental es recuperado por el aislamiento y cultivo (Amann et al., 1995; Rappé & Giovannoni, 2003; Vartoukian et al., 2010). Esto quiere decir que; las técnicas convencionales no son eficientes para la identificación de diversidades bacterianas. Actualmente se vienen utilizando métodos alternativos que ofrecen una sensibilidad excelente y un tiempo de reacción reducido (Mcconnell et al., 2020).

La aplicación de tecnologías de secuenciación de nueva generación (NGS) como Illumina Miseq ha permitido la generación de gigabases de datos brutos de alta calidad a bajo costo (Hong et al., 2015). Mediante esta técnica se puede realizar diferentes estudios como la metatrascriptómica, metagenómica y metataxonómica. Esta última siendo utilizada para identificar microorganismos dentro de un entorno complejo, con el fin de hacer inferencias taxonómicas (Trifi et al., 2020). Este es un proceso de alto rendimiento

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4 que tiene por finalidad caracterizar a bacterias, arqueas, hongos y protozoos (X. Li et al., 2020). Asimismo, es una herramienta útil donde empleando marcadores moleculares como 16S o 18S, se obtienen datos de abundancia, composición, diversidad y estructuras con la finalidad de obtener árboles metataxonómicos donde nos muestra la interacción de los organismos presentes en la muestra por medio de sus secuencias de ADN (Hoyles &

Swann, 2019).

La metataxonómica es una herramienta invaluable para la ecología microbiana. Las secuencias de genes de ARNr son las secuencias marcadoras más utilizadas; estos incluyen el gen 16S rRNA para bacterias, el gen 18S rRNA para eucariotas y las regiones espaciadoras internas transcritas (ITS) del ribosoma fúngico para hongos (Schoch et al., 2012).

Estos marcadores funcionan bien para la elaboración de perfiles filogenéticos porque están presentes de forma ubicua en la población, tienen regiones hipervariables que diferencian las especies y están flanqueadas por regiones conservadas que pueden ser objeto de cebadores "universales" (Woese & Fox, 1977). Una de las principales ventajas del análisis de ARNr es que las bases de datos como Greengenes (DeSantis et al., 2006), RDP (Cole, 2004) y SILVA (Carlton et al., 2002), contienen genes de millones de especies, lo que las hace mucho más completas que las bases de datos de genomas, que contienen decenas de miles de especies. El flujo de trabajo para el análisis 16S generalmente incluye filtrado de calidad, corrección de errores (a veces llamada eliminación de ruido), eliminación de secuencias quiméricas, agrupación de lecturas en 'Unidades taxonómicas operativas' (OTU) basadas en la similitud de secuencia y clasificación de las OTU (Siegwald et al., 2017).

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5 Sin embargo, a la fecha no existen antecedentes sobre estudios microbiológicos, mucho menos metataxonómicos de las comunidades bacterianas que alberga el ACP Lomas del Cerro Campana siendo importante comprender su diversidad bacteriana y su potencial biotecnológico.

Existen diversas investigaciones donde se utilizó análisis metataxonomicos en muestras de suelos, se utilizó como método para la identificación y caracterización de bacterias en fluvisoles determinando bacterias endémicas y exóticas, comprobaron que las inundaciones afectan la diversidad estructural de las comunidades de bacterias presentes en el suelo (Furtak et al., 2020). Otra investigación realizada en los manglares de Paranaguá Bay, Brasil, demostró que los factores ambientales como la salinidad, proximidad o ausencia de plantas y la composición química de los sedimentos, ejercen una fuerte influencia en la regulación de la estructura de las comunidades microbianas.

Encontrando los phylum Cyanobacteria, Acidobacteria, Bacteroidetes, Chloroflexi, Actinobacteria, y Proteobacteria (Marcel et al., 2019). Se analizo el perfil metataxonómico bacteriano asociados al proceso del ciclo del C y N como consecuencia de la deforestación, determinaron alteraciones en la comunidad bacteriana y no se observaron diferencias significativas en los phylum dominantes Proteobacteria y Actinobacteria (Mushinski et al., 2018). También se identificó bacterias autóctonas asociadas al yeso fosforado, subproducto acido de la industria de fertilizantes fosfatados, potenciando su aplicación en la eliminación de elementos radiactivos y metales pesados tóxicos, promoción del crecimiento de las plantas, oxidación y reducción de sulfato (Trifi et al., 2020). En pastizales naturales subtropicales ubicados en Pampa, Brasil se utilizó la metataxonómica y metatrascriptomica obteniendo como resultado comunidades microbianas que se mantuvieron estables a lo largo del año, pero se observaron variaciones en la abundancia (Muller et al., 2018). También se evaluaron los consorcios

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6 microbianos degradantes de biomasa vegetal, realizando análisis metataxonómicos y metagenómicos, donde se obtuvo mayor prevalencia de las familias como Enterobacteriales, Pseudomonadales, Flavobacteriales y Sphingobacteriales.

Concluyendo los estudios realizados constituyen una fuente valiosa de información y análisis de datos de microorganismos con potencial biotecnológico (Avella, 2016).

II. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1. DESCRIPCIÓN DEL ÁREA DE ESTUDIO.

El presente estudio se llevó a cabo en el sotavento del piso superior (Figura N°1) desde los 500 a 1000 m.s.n.m. del ACP Lomas del Cerro Campana entre las coordenadas 7°58’30” S y 79°06’30” W, en el distrito de Huanchaco, provincia de Trujillo, departamento La Libertad (Figura N°2).

Figura N°01. Vista panorámica del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, época húmeda.

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7 Figura N°02. Mapa de ubicación del Área de Conservación Privada Lomas del Cerro

Campana

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8 2.2. UBICACIÓN DE LAS ESTACIONES DE MUESTREO.

Se ubicaron tres puntos de muestreo (Figura N°3), los mismos que fueron georeferenciados con el sistema posicional geográfico (GPS) marca Garmin Etrex Vista HCx con grado de precisión ±10, seguido de la posición geográfica, como se indica en la tabla N°01:

Tabla N°01. Ubicación georeferencial de los puntos de muestreo del ACP Lomas del Cerro Campana.

Punto de muestreo

Coordenadas UTM

Este Norte

M-1 y R-1 709103 9116850

M-2 y R-2 709134 9116807

M-3 y R-3 709040 9116880

2.3. CRITERIOS DEL MONITOREO EN LAS ESTACIONES DE MUESTREO.

El monitoreo se llevó a cabo en dos épocas: época húmeda (mes de julio) y seca (mes de diciembre) del ACP Lomas del Cerro Campana comprendiendo la recolección de muestras de suelo en el sotavento del piso superior desde los 500 a 1000 m.s.n.m.

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9 Figura N°03. Ubicación de los puntos de muestreo en el sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana

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10 2.4. PROCEDIMIENTO PARA LA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE

SUELO.

2.4.1. PARA PARÁMETROS FÍSICO – QUÍMICOS 2.4.1.1. RECOLECCIÓN DE MUESTRA

Se realizo durante la época húmeda en el mes de julio y en la época seca en el mes de diciembre en ACP Lomas del Cerro Campana en el sotavento del piso superior desde los 500 a 1000 m.s.n.m. se recolectaron las muestras de suelo siguiendo la metodología de (Imchen et al., 2017) con ayuda de un tubo de acero de 6 cm de diámetro con 20 cm de profundidad aproximadamente, retirándose el tubo de acero con ayuda de una palana (Anexo N°1). Luego, el suelo contenido dentro del tubo de acero se vertió en bolsas herméticas Ziploc estériles, para luego ser etiquetados con los siguientes datos: nombre de la muestra para la época seca se denominó M-1, M-2 y M-3 y en la época húmeda se denominó R-1, R-2 y R- 3, número del punto de muestreo, fecha y coordenadas geográficas.

2.4.1.2. ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICOS

Se analizaron 3 muestras de suelo, tanto para época seca y húmeda siendo en total de 6 muestras, las cuales fueron analizadas en el Laboratorio de Cerámicos y Suelos perteneciente a la Facultad de Ingeniería de Materiales de la Universidad Nacional de Trujillo.

Los parámetros físico-químicos de suelo analizados fueron los siguientes Determinación de textura de suelos, pH, Conductividad eléctrica (μS/cm), Calcio (Ca) ppm, Fósforo (P) ppm, Potasio (K) ppm, Sodio (Na) ppm, Aluminio (Al) ppm, Magnesio (Mg) ppm e Intercambio catiónico CIC (meq/100 gr)) NOM-021- RECNAT-2000 (Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales, 2000).

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11 2.4.1.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO PARA ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICOS

Para los análisis físico-químicos se utilizó el Sofware R (R Core Team, 2021) siguiendo la metodología de (Dey, 2020), para la realización de los Análisis de Componentes Principales (PCA).

2.5. IDENTIFICACION DE FLORA ALEDAÑA A LOS PUNTOS DE MUESTREO

2.5.1. GESTIÓN DE AUTORIZACIÓN DE COLECTA DE FLORA SILVESTRE CON FINES DE INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA ANTE EL SERVICIO NACIONAL FORESTAL Y DE FAUNA SILVESTRE (SERFOR)

Se realizó la gestión ante el Servicio Nacional Forestal y de Fauna Silvestre (SERFOR) la autorización con fines de investigación científica de flora silvestre.

Presentando la documentación requerida según lo estipulado en el Articulo 154 y el Numeral 9 del Anexo 1 del reglamento para la gestión Forestal aprobado mediante DS N° 018-2015-MINAGRI aprobado mediante DS N° 019-2015- MANGRI y la Resolución de Dirección Ejecutiva N° 060-2016-SERFOR/DE.

Acreditándose el compromiso del depósito de material biológico colectado el HUT que es una Institución Científica Nacional depositaria de material biológico registrada.

2.5.2. RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE FLORA DEL SOTAVENTO DEL PISO SUPERIOR DEL ACP LOMAS DEL CERRO CAMPANA (500 A 1000 M.S.N.M.)

La recolección de especímenes completos de flora para su identificación en el herbario se realizó en el mes de mayo siendo la época húmeda. En los puntos de extracción de muestra de suelo se extrajo el ejemplar de flora más cercano.

La herborización de estos especímenes se realizó siguiendo la metodología y

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12 técnicas convencionales (Rodríguez & Rojas, 2006). El material botánico fue depositado en el Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo con los siguientes códigos con código HUT- 63332 y con código HUT- 63333.

2.6. ANÁLISIS METATAXONOMICOS ASOCIADO AL SUELO

2.6.1. EXTRACCIÓN DE ADN AMBIENTAL

El ADN de las muestras de suelo se extrajo en el laboratorio de Genética de poblaciones utilizando el Powersoil® DNA Isolation Kit siguiendo las instrucciones del fabricante (Qiagen, 2016) (Anexo N°2). La pureza del ADN recolectado se midió con el espectrofotómetro UV-Vis NanoDrop™ One Microvolume (Thermo Scientific, EE. UU.), el kit de ensayo Qubit dsDNA HS (Life Technologies) (Anexo N°3). El ADN ambiental fue enviado para su secuenciación a la empresa NGS Soluções Genômicas, ubicada en Sao Paulo- Brasil.

2.6.2. PREPARACIÓN Y SECUENCIACIÓN DE BIBLIOTECAS

Para la amplificación de muestras de ADN ambiental provenientes de suelo del sotavento del ACP Lomas del Cerro Campana se utilizó el cebador de amplificación específica ARNr 16S de locus de arqueas o bacterias. La composición y estructura de las comunidades microbianas se evaluó mediante la amplificación y secuenciación de las regiones variables V3-V4 del gen 16S rRNA.

Se utilizó el enfoque de secuenciación Illumina Miseq, siguiendo los pasos como se detalla en el Figura N°4, las secuencias obtenidas fueron de 2 x 250 pb.

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13 1° PCR:

Amplificación Purificación Electroforesis en gel de agarosa

Electroforesis en

gel de agarosa Purificación 2° PCR:

Indexación Cuantificación,

estandarización y multiplexación

Desnaturalización de bibliotecas y Phix

Figura N°4. Pasos para la secuenciación del ADN ambiental.

2.7. PROCEDIMIENTOS ANALITICOS

2.7.1. ANÁLISIS BIOINFORMÁTICO

Los datos se analizaron siguiendo la metodología de Callahan et al. en 2016, utilizando un conjunto de paquetes implementados en el lenguaje R (R Core Team, 2021) y disponibles a través del proyecto BioConductor (Gentleman et al.,2004;

W. Huber et al., 2015).

Con ayuda del programa DADA2 se eliminaron errores del secuenciamiento de las lecturas de ADN obtenidas. Posteriormente, se realizó el filtrado de archivos fastq con la finalidad de cortar las secuencias de los cebadores de PCR, filtrando las lecturas que tengan un índice de calidad menor a 30 y eliminando las quimeras.

Obteniendo como resultado una lista detallada de secuencias únicas con sus respectivas abundancias.

Las métricas de diversidad alfa, La diversidad de Shannon y Simpson, el índice Chao1, se obtuvieron en el nivel ASV después de realizar de análisis de rarefacción usando la función rrarefy del paquete vegan en R. Se utilizó el análisis de coordenadas principales (PCoA) de la matriz de similitud de Bray-Curtis para visualizar las similitudes del microbiota (Jari Oksanen, 2022). finalmente se

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14 utilizó ggplot2 (Lahti & Shetty, 2022; Wickham, 2009) para producir gráficos de alta calidad.

2.7.2. ASIGNACIÓN TAXONÓMICA.

Después del procesamiento inicial de los datos de secuenciación por DADA2, se asignaron taxonomías a cada ASV (Amplicon Sequencing Variants) utilizando una implementación del programa DADA2 del método clasificador bayesiano (Q.

Wang et al., 2007). Utilizándose como referencia la base de datos SILVA (https://www.arb-silva.de/) (Glöckner et al., 2017).

Las clasificaciones taxonómicas generadas por DADA2 y sus cuantificaciones se importaron al programa phyloseq, también implementado en R. El paquete phyloseq es una herramienta para importar, almacenar, analizar y mostrar gráficamente datos complejos de secuenciación filogenética que ya se han agrupado en ASV (McMurdie & Holmes, 2013).

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15

III. RESULTADOS

La presente tesis se llevó a cabo en el sotavento del piso superior (Figura N°1) desde los 500 a 1000 m.s.n.m. del ACP Lomas del Cerro Campana que se encuentra ubicado a 7°58’30” S y 79°06’30” W, en el distrito de Huanchaco, provincia de Trujillo, departamento La Libertad (Figura N°2). Donde se ubicaron tres puntos de muestreo (Figura N°3) y se extrajeron especímenes completos de flora aledaña a las muestras de suelo extraídas del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana con la finalidad de realizar la identificación taxonómica. La gestión ante Servicio Nacional Forestal y de Fauna Silvestre (SERFOR) emitió la resolución directoral RD N° D0000012-2022-MIDAGRI- SERFOR-DGGSPFFS-DGSPF-PCB, siguiendo lo estipulado en el Articulo 154 y el Numeral 9 del Anexo 1 del reglamento para la gestión Forestal aprobado mediante DS N° 018-2015-MINAGRI y la Resolución de Dirección Ejecutiva N°

060-2016-SERFOR/DE. Siendo las especies colectadas depositadas en el Herbarium Truxillense con ayuda del personal capacitado para la determinación, se identificó a Solanum habrochaites S. Knapp & D.M. Spooner “tomate silvestre”

con código HUT- 63332 ubicada a los 698 m.s.n.m., 709134E-9116807N (Anexo N°06) y Tillandsia multiflora Benth. [=Racinaea multiflora (Benth.) M.A. Spencer

& L.B. Sm.] “achupalla verde” con código HUT-63333 ubicada 647 m.s.n.m., 709103E- 9116850N y 663 m.s.n.m., 709040E-9116880N (Anexo N°07).

Se realizaron análisis físico-químicos y metataxonómicos, para las 3 muestras de suelo extraídas en época seca como húmeda. Referente a los análisisfísico- químicos (Tabla N°02), los resultados arrojaron 3 tipos de clases texturalesde suelo en M-1 fue Franco-Arcillosa-Arenosa, la muestra M-2 tiene suelo Francoy en la muestra M-3 es Arcillosa los resultados fueron para época húmeda y seca.

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16 Referente al pH, las 3 muestras sus valores fluctúan entre 7.1 a 7.4 en época húmeda y en época seca los valores estuvieron comprendidos entre 7.1 y 7.3. La conductividad eléctrica los valores fluctúan entre 694 a 824 𝜇S/cm en poca húmeda y en época seca los valores se encontraron entre 722 a 824 𝜇S/cm.

También se analizaron los macronutrientes como Calcio, Fosforo, Potasio, Magnesio y elementos químicos como Sodio y Aluminio. En el caso del Calcio los valores para época seca fueron entre 32.1 a 42.5 ppm, mientras que para época húmeda los valores se encontraron entre 35.4 a 42.5 ppm, en Fosforo los valores para época seca fueron de 23.4 a 36.9 ppm y para la época húmeda los valores fluctuaron entre 29.4 a 36.9 ppm, en Potasio los valores para la época seca estuvieron entre 156 a 175.1 ppm mientras para la época húmeda los valores se encontraron entre 142.5 a 175.1 ppm; en Sodio los valores variaron entre 5 a 6.9 ppm en la época seca, para la época húmeda los valores oscilaron entre 5.1 a 8.45 ppm, en Aluminio se obtuvieron valores entre 0.24 a 0.48 ppm para época seca mientras para la época húmeda los valores estuvieron entre 0.24 a 0.36 ppm y Magnesio los valores se encontraron entre 0.43 a 0.75 ppm para época seca y en época húmeda los valores estuvieron entre 0.24 a 0.45 ppm.

Otro parámetro analizado fue la capacidad del intercambio catiónico donde la muestras para época seca dieron valores entre 12.8 a 38.4 meq/100g, para el caso de la época húmeda los valores oscilaron entre 11.9 a 41.1 meq/100g. Finalmente, se analizó el contenido de Materia orgánica en la época seca los valores fueron de 0.6 a 2.3 % y para la época húmeda los valores se mantuvieron.

Posteriormente, con los valores obtenidos de los análisis físico-químicos se realizó el análisis de componentes principales (PCA) tanto para época seca y húmeda de las 3 muestras tanto provenientes del sotavento del piso superior a

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17 partir de los 500 a 1000 m.s.n.m. del ACP Lomas del Cerro Campana se muestrael comportamiento de las variables y la contribución de cada uno de los parámetros físicos-químicos (Figura N°04 y 05).

ESTACIÓN EPOCA SECA EPOCA HUMEDA

M-1 M-2 M-3 R-1 R-2 R-3

Clase textural de suelo

Franco- Arcillosa-

Arenosa

Franco Arcillosa

Franco- Arcillosa-

Arenosa

Franco Arcillosa

pH 7.3 7.1 7.2 7.2 7.4 7.3

Conductividad electica

(𝜇S/cm) 824 754 722 814 694 802

Calcio (ppm) 42.5 33.8 32.1 42.5 35.4 36.4

Fosforo (ppm) 36.9 27 23.4 36.9 29.4 31.1

Potasio (ppm) 175.1 164 156 175.1 168.1 142.5

Sodio (ppm) 5 6.9 6.5 5.1 5.94 8.45

Aluminio (ppm) 0.32 0.48 0.24 0.32 0.24 0.36

Magnesio (ppm) 0.45 0.75 0.43 0.45 0.39 0.24

Intercambio catiónico

(meq/100g) 28.4 12.8 38.4 26.1 11.9 41.1

Materia organica (%) 0.6 1.6 2.3 0.6 1.6 2.3

Tabla N°02. Valores físico-químicos obtenidos para cada punto de muestreo en época seca y húmeda en muestras de suelo perteneciente al sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana.

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18 Figura N°04. Gráfico biplot de los componentes principales de resultados de análisis físico- químico proveniente de muestras

de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca.

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19 Figura N°05. Gráfico biplot de los componentes principales de resultados de análisis físico- químico proveniente de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época húmeda

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20 Para realizar la secuenciación por metataxonómica verificamos la relación (260/280) o calidad y concentración (ng/𝜇l) o cantidad de ADN ambiental; donde los resultados para la época seca en el caso de M-1, M-2 y M-3 la cantidad fue de 14.30, 7.98 y 1.97 y para calidad 1.79, 1.80 y 1.79 respectivamente, en la época húmeda los resultados para R-1, R-2 y R-3 para cantidad fueron de 3.5, 10.0 y 5.8 y en calidad los valores fueron 1.86, 1.84 y 1.65, respectivamente (Tabla N° 03).

MUESTRA EPOCA

CONCENTRACIÓN (ng/𝜇l)

RELACIÓN (260/280)

M-1 SECA 14.30 1.79

M-2 SECA 7.98 1.80

M-3 SECA 1.87 1.79

R-1 HUMEDA 3.5 1.86

R-2 HUMEDA 10.0 1.84

R-3 HUMEDA 5.8 1.65

Tabla N°03. Valores calidad y cantidad de ADN ambiental obtenidos para cada punto de muestreo en época seca y húmeda en muestras de suelo perteneciente al sotavento del

piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana.

Durante la secuenciación se obtienen las curvas de rarefacción presentes en la Figura N°06 en las muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

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21 Figura N°06. Índice de rarefacción de cada muestra de suelo del sotavento del piso

superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

En la Anexo N°05, se muestran los índices de biodiversidad alfa del gen 16S rRNA bacteriano donde se calculó el número de especies observadas, el estimador de riqueza Chao1 con p < 0.05, índice de diversidad de Shannon, índice de diversidad de Simpson, todos estos índices fueron representados de manera grafica como se muestra en la Figura N°07.

M 1 M 2 M 3 R 1 R 2 R 3

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22 Figura N°07. Índices de diversidad alfa cada muestra de suelo del sotavento del piso

superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

En el Figura N°08 muestra la abundancia relativa a nivel de clase obtenida por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda. Teniendo como las clases más abundantes en las tres muestras fueron Actinobacteria y Alphaproteobacteria. En menor abundancia se encuentran las clases Acidobacteriae, Bacteroidia, Cyanobacteria, Gammaproteobacteria, Thermoleophilia, Gemmatimonadetes, Phycisphaerae, Verrucomicrobiae.

En el Figura N°09 muestra la abundancia relativa a nivel de familia, obtenidas por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda. Encontrando a Caulobacteraceae, Chtiniobacteraceae, Gemmatimonadaceae, Bryobacteraceae,

Época húmeda Época seca

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23 Geodermatophilaceae, Micrococcaceae, Nostocaceae, Pseudonocardiaceae, Rhizobiaceae, Sphingomonadaceae, Streptomycetaceae, WD2101 soil group, Xanthobateraceae.

En el Figura N°10 muestra la abundancia relativa a nivel de género, obtenidas por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda. Conformado por Afipia, Blastococcus, Brevundiomonas, Bryobacter, Candatus koribacter, Candidatus udaeobacter, Crossiella, Dyadobacter, Ellin6055, Flavobacterium, Massilia, Microvirga, Nostoc PCC-73102, Paracoccus, Pedobacter, Pseudolabrys, RB-41, Rubrobacter, Skermanella, Sphingomonas, Steroidobacter, Streptomyces.

En el Figura N°11 muestra el gráfico de mapa de calor de la abundancia relativa de las clases en cada muestra analizada. En M-1 la clase más abundante fue Actinobacteria, seguida en menor proporción Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria y Thermoleophilia, en época seca, mientras que en época húmeda en R-1 la clase más abundante fue Alphaproteobacteria, seguida de Bacteroidia y en menor proporción estuvo Actinobacteria, Cyanobacteria, Gammaproteobacteria. En el caso de M-2 las clases encontradas fueron Actinobacteria, siendo esta la más abundante, seguida de Alphaproteobacteria, Cyanobacteria, Thermoleophilia y en mínima parte por Phycisphaerae, para la época seca. Sin embargo, en R-2 perteneciente a la época húmeda la clase más abundante fue Alphaproteobacteria, seguida de Acidobacteriae y en menor proporción estuvo Actinobacteria, Thermoleophilia, y en menor abundancia a Phycisphaerae. En M-3 la clase más abundante fue Actinobacteria, seguida en menor proporción Alphaproteobacteria y Thermoleophilia, en época seca, en el

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24 caso de R-3, perteneciendo a la época húmeda, la clase más abundante fue Alphaproteobacteria, seguida de Actinobacteria y en menor proporción estuvo, Bacteroidia y en menor abundancia a Thermoleophilia.

Así mismo, con las secuencias de ADN ambiental se realizó un diagrama de burbujas a nivel de familias presentes en muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda, mostrándose en la Figura N°12, donde se puede apreciar que las familias más abundantes fueron Xanthobacteraceae, Sphingobacteriaceae y Bryobacteraceae, en época húmeda, mientras que Nostocaceae, Sphingomonadaceae Pseudonocardiaceae fueron las más abundantes en la época seca.

Finalmente, se realizó la representación de la diversidad beta mediante los índices de Bray-Curtis y Jaccard mostrados en la figura N° 13.

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25 Figura N°08. Distribución taxonómica de las clases bacterianas con relación a su

abundancia relativa obtenidas por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

ÉPOCA HÚMEDA ÉPOCA SECA

Clase

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26 Figura N°09. Distribución taxonómica de las familias bacterianas con relación a su abundancia relativa obtenidas por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

ÉPOCA HÚMEDA ÉPOCA SECA

Familia

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27 ÉPOCA HÚMEDA ÉPOCA SECA

Género

Figura N°10. Distribución taxonómica de los géneros bacterianos con relación a su abundancia relativa obtenidas por análisis metataxonómico de muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

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28 Figura N°11. Gráfico de mapa de calor de la abundancia relativa de las clases en cada muestra analizada de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

Clase M-1 M-2 M-3 R-1 R-2 R-3

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29 Figura N°12. Gráfico de burbujas de la abundancia relativa de familias bacterianas en muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro

Campana, en época seca y húmeda.

ÉPOCA HÚMEDA ÉPOCA SECA

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Época seca

Época húmeda

Figura N°13. Diversidad beta (índices de Bray-Curtis y Jaccard) para en muestras de suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, en época seca y húmeda.

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IV. DISCUSIÓN

El suelo del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana, consta de características diferentes físico-químicas y metataxonómicas entre las dos épocas evaluadas; sin embargo, hasta la fecha aún no existen antecedentes de investigaciones similares realizadas.

Los 3 puntos de muestreo extraídos M-1 y R-1, M-2 y R-2, M-3 y R-3;

estuvieron cercanos a plantas entre ellas tenemos a Solanum habrochaites S.

Knapp & D.M. Spooner “tomate silvestre” y Tillandsia multiflora Benth.

[=Racinaea multiflora (Benth.) M.A. Spencer & L.B. Sm.] “achupalla verde”, se consideraron debido a que las plantas ejercen una presión selectiva sobre la diversidad estructural y funcional de las poblaciones microbianas a través de la exudación de las raíces y en relación con las propiedades del suelo, las especies de plantas y muchos otros factores de estrés (Hassani et al., 2018). Los muestreos se realizaron tanto para época seca como húmeda con la finalidad de comprender cómo y en qué medida la dinámica estacional influye en los perfiles microbianos taxonómicos en suelos (Marchesi & Ravel, 2015) del piso superior del sotavento del ACP Lomas del Cerro Campana, con base en metataxonómica.

En el Tabla N°2 se encuentran los resultados obtenidos en los análisis de parámetros físico-químicos del sotavento del piso superior del ACP Lomas del Cerro Campana. Las muestras analizadas tienen distintas clases texturales de suelo que coinciden tanto para época húmeda como para época seca, para M-1 y R-1 su suelo es de naturaleza Franco – Arcillosa – Arenosa, mientras que M-2 y R-2 tiene suelo Franco y en el caso de M-3 y R-3 la clase textural fue un suelo Arcilloso.

Contrastando los resultados con la investigación realizada por (Sagastegui et al.,

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32 1988), donde se puede evidenciar ciertas diferencias en la clase textural, el autor señala que en el piso superior la clase textural del suelo es arenoso-arcilloso y pedregoso, arcillosa-pedregosa o rocosa, siendo sus resultados marcadamente diferentes a los realizados en la presente tesis teniendo como clases texturales de suelos a Franco-Arcillosa-Arenosa, Franco y Arcillosa.

En los suelos de naturaleza Franco – Arcillosa – Arenosa el pH oscila entre ligeramente neutro a neutro (Campos, 2019; Mendoza et al., 2022; Vargas &

Céspedes, 2019), donde los resultados obtenidos indican que las 3 muestras tienen pH neutro, tanto para época húmeda como para seca.

Los valores de conductividad eléctrica obtenidos en los análisis físico- químicos fueron 694 a 824 𝜇S/cm en poca húmeda y en época seca los valores se encontraron entre 722 a 824 𝜇S/cm considerados altos, normalmente en zonas que no han sido intervenidas por laagricultura o por intervención del hombre los suelos cuentan con valores altos parala conductividad eléctrica (Castillo, 2019).

En cuanto al contenido de macronutrientes como Calcio (Ca), se encontraron valores entre 32.1 a 42.5 ppm para la época seca, mientras que para época húmeda los valores se encontraron entre 35.4 a 42.5 ppm, los niveles quepresentaron las muestras de suelo son bajos, esto podría estar asociado al pH acido del suelo, lluvias o al exceso de humedad facilitando la filtración del calcio en el suelo (Hirzel & Rojas, 2004; Thompson et al., 2017).

Los resultados obtenidos para Fosforo (P) en la época seca fueron de 23.4 a 36.9 ppm y para la época húmeda los valores fluctuaron entre 29.4 a 36.9 ppm los valores indican un alto contenido, se debe a que la mayoría de las especies vegetales forman asociaciones con microorganismos, los cuales aumentan la disponibilidad de nutrientes liberando productos como ácidos de naturaleza orgánica los cuales van a acelerar la meteorización, así mismo, van a secretar

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33 enzimas que tienen la función de agilizar la descomposición de la materia orgánica (Cisneros et al., 2017; Schoonover & Crim, 2015; Serri et al., 2017).

Otro macronutriente evaluado fue Potasio (K) donde los valores obtenidos en la época seca fueron 156 a 175.1 ppm mientras para la época húmeda los valores se encontraron entre 142.5 a 175.1 ppm, por lo tanto los valores obtenidos fueron medios, siendo un factor importante el pH, si este es de naturaleza neutra el potasio se encontrará más disponible para las plantas. Otro factor importante es el contenido de arcilla, si un suelo tiene arcilla en su composición este va a contener más K que otros tipos de suelos (Torrez & Chinchilla, 2006; Vasquez, 2019). En el caso del Sodio (Na) los valores variaron entre 5 a 6.9 ppm en la época seca, para la época húmeda los valores oscilaron entre 5.1 a 8.45 ppm, estos niveles son normales, el sodio ayuda a la regulación de turgencia, captación y transporte de dióxido de carbono en la fotosíntesis (Macías-Echeverri et al., 2019). En el caso de aluminio (Al) se obtuvieron valores entre 0.24 a 0.48 ppm para época seca mientras para la época húmeda los valores estuvieron entre 0.24 a 0.36 ppm, los valores son bajos, este elemento se encuentra tienen una relación inversamente proporcional, donde a menor pH mayor será contenido de Al; sin embargo, los niveles elevados de este metal son tóxicos para los organismos habitantes (Morton

& Moir, 2018). A pH neutro a ligeramente neutro los niveles de aluminio en suelo fueron valores entre 0.24 a 0.48 ppm para época seca mientras para la época húmeda los valores estuvieron entre 0.24 a 0.36 ppm considerándose bajos mientras el ion predominante será calcio (Soriano, 2018).

Para Magnesio (Mg) los valores se encontraron entre 0.43 a 0.75 ppm para época seca y en época húmeda los valores estuvieron entre 0.24 a 0.45 ppm, estos valores son muy bajos, este nivel afecta directamente a las plantas que habitan en el suelo debido a que ocasiona una baja tasa de fotosíntesis (Wang et al., 2020),

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