Evaluación de la Actividad Antimicótica de los Aceites Esenciales de Plantas Aromáticas

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EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA DE LOS

ACEITES ESENCIALES DE PLANTAS AROMÁTICAS

EVALUATION OF THE ANTIFUNGALACTJVJTY OF ESSENTIAL

OILS OF AROMATIC PLANTS

Ibone Marizol Condori-Rodríguez1, Luzmila Benique-Carrión2 RESUMEN

El Objetivo del trabajo de investigación fue determinar el porcentaje de extracción, las propiedades fisicoquímicas y la actividad fungicida de los aceites de tres especies vegetales: Aloysiatriphylla (Cedrón), Rosmarinusofficinalis (Romero) y Pinus radiata (Pino), en los hongos que producen las micosis más frecuentes como lo son: Candida albicans, Microspo­ rumcanis y Trichophytonrubrum, en comparación con el fluconazol. Metodología: se uti- lizó como materiales las hojas de las muestras vegetales, cepas de hongos de C. albicans y dermatofitos, y los métodos de) Picnómetro, Refractómetria, Solubilidady Agar en Difusión. Los resultados del porcentaje de rendimiento mostraron una variabilidad de 0.49 a 0.80%, la densidad menor que el agua, el índice de refracción desde 1,46 a l .48n0, concluyéndose que los aceites esenciales del Aloysiatriphylla (Cedrón), Rosmarínusoffictnalis (Romero) y

Pinus radiata (Pino), mostraron actividad fungicida especialmente para Candida albicans, Microsporumcanis y Trichophytonrubrum similar al control positivo de Fluconazol.

Palabras clave: Aceite esencial, Aloysiatriphylla,Rosmarinusofficinalis y Pinus radiata, Candidaalbicans, Microsporumcanis, Trichophytonrubrum.

ABSTRACT

The purpose of the work investigation was to determine the percentage of extraction, the physicochemical properties and fungicida/ activity of three plant oils: Aloysiatriphylla (Cedronl.Rosmarinusofficinalis (Romero) and Pinus radiata (Pino), in fungí mycosis fre­ quently occur such as Candida albicans, Microsporumcanis and Trichophytonrubrum, com: pared with fiuconazole. used as materials of plant leaves samples fungal strains of Candida albicans and dermatophytes, and methods of the Pycnometer; Refractometry, Solubi/ity and Diffusión Agar: The results showed a yield percentage variationfrom 0.49 to 0.80% ad , en­ sity less than water, the refractive indexfrom 1.46 to 1.481101 concluding that the ess .

l. entta s

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Q.F., Magíster, docente de Farmacia y Bioquímica. Q.CO, docente de la Universidad Nacional de Juliaca.

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lbone Marizo] Condori / Luzmíla Beníque

oils of Aloysiatriphylla (Cedrón), Rosmarinusofficinalis (Romero) and Pinus radiata (Pino}, showed fungicidal activity especially for Candida albican, Microsporumcanis and Tricho­ phytonrubrum, similar to the positive control of Fluconazole.

Keywords: Essential oil Aloysiatriphylla, Rosmarinusofficinalis and Pinus radiate, Candida albican, Microsporumcanis and Trichophytonrubrum,

INTRODUCCIÓN

El empleo terapéutico de las plantas en los pueblos constituye una parte importante de la cultura universal que ha acumulado la humanidad, las antiguas civilizaciones fueron las especies vegetales tanto para fines alimenticios, como en medicina y cosmética. "El Perú presenta una riqueza y megadiversidad de plantas medicinales nativas, que es uno de los pilares de la etnofarmacología y la medicina tradicional, desde la época del Incanato hasta la actualidad. Siendo estas utilizadas en forma empírica por sus bondades terapéuticas en el cuidado

y

restauración de la salud" (Salaverry O., 2005).

"La actividad antifúngica de las plantas ha sido muy estudiada por la resistencia de los gérmenes de las micosis a los distintos tratamientos, sobre todas las micosis superficiales producidas por las diferentes especies de dermatofitos" (Bajpai K: et.al., 2006).

A nivel mundial, se explora el uso y valoración de los productos naturales como fuentes de nuevos y variados agentes micóticos (Cowan, M.M., 1999). Las plantas, en particular, repre- sentan un alto potencial terapéutico si se considera que desde la antigüedad son utilizados para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas (Mesa-Arango, A.C., Bueno Sán- chez, J.G., 2004.). Las plantas sintetizan metabolitos secundarios con actividad fungicida se encuentran los provenientes de la fracción liquida volátil que contiene las sustancias respon- sables del aroma de las plantas o aceites esenciales (Harbone, J.B. 1998). "Generalmente son mezclas complejas de hasta más de 100 componentes de bajo peso molecular como com- puestos alifáticos simples, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y ácidos, que hacen parte de los monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos" (Schelz, Z. et. al., 2006).

"En la actualidad, se ha revalorado el campo de aplicación de las plantas y especias aromá- ticas, en farmacología y biotecnología, la investigación científica le abre un nuevo espacio a los aceites esenciales, evaluando su efecto antibacteriano, antimicótico e insecticida, por medio de pruebas in vitro" (López A: et.al., 2001, Inga BA., Guerra MB., 2000)

"Los aceites esenciales de estas especies muestran un amplio espectro de actividades bioló- gicas contra hongos" (Bajpai K: et. al., 2006) ·.

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objetivos .. - 1) Determinar el porcentaje de extracción. 2) Determinar las propiedades fisico- químicas. 3) Evaluar la actividad antimicótica frente a la

Candida albicans

y dennatofitos, en comparación con el fluconazol.

METODOLOGÍA

El presente trabajo de investigación fue: Experimental y transversal.

Material biológico: Se utilizaron las muestras vegetales de Aloysiatriphylla (Cedrón),

Rosmari­

nusojjicinalis

(Romero) y

Pinus radiata

(Pino), que fueron recolectados entre los periodos de Agosto a Setiembre del 2013, pertenecientes al distrito de Chucuito. Se recolectaron 1 O Kilogra- mos de cada muestra, en horas tempranas por la mañana para evitar la evaporación de los aceites esenciales y luego se separaron las hojas y fueron estabilizadas por 24 horas y secadas durante 2 semanas. Microorganismos usados: Se utilizaron cepas de hongos de C albicans y dennatofitos

Extracción del aceite esencial por arrastre de vapor:

Cuatro kilos de la muestra vegetal fueron colocados en el equipo de destilación a la salida se ob- tuvo una emulsión líquida ( agua y aceite ).El aceite obtenido se trató con sulfato de sodio anhidro,

para e1iminar el exceso de humedad. Se registró el volumen final del aceite esencial en mililitros, el cual fue recibido en un colector volumétrico y es almacenado en un frasco ámbar y a tempe- ratura ambiente.

Determinación del porcentaje de rendimiento

Para determinar el porcentaje de rendimiento se tomó en cuenta el volumen de aceite esencial extraído hasta agotamiento de la muestra, y se correlacionó con la cantidad de muestra vegetal.

Propiedades fisicoquímicas

Determinación de la Densidad

Se determinó mediante el método del picnómetro (Fenner R: et al., 2005.).

Determinación del Índice de Refracción

Se determinó la lectura en un Refractómetro de ABBE a 20ºC (Inga BA., Guerra MB., 2000, Fuertes RC, Munguía SY., 2001 ).

Determinación de la Solubilidad

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1 bone Marízol Condorí / Luzmíla Benique Determinación in vitro de la actividad antifúngica de los aceites esenciales

Candida albicans (Agar en Difusión) (Rojas. R: et al., 2003)

Los aceites esenciales (20 µI) fueron disueltos en DMSO (200 µI) de la que se realizan diluciones en DMSO para tener concentraciones equivalentes a 250, 5000y 10000 ppm. Estas diluciones fueron inoculadas sobre los pozos ( 1 O mm) realizadas en placas petri que contiene 20 cm3 de Agar Sabouraud, con inoculos de Candida albicans (100 µl x 100 cm3 de medio de cultivo). Se incorpora a la prueba un control positivo de Fluconazol en una concentració� de 10000 ppm.

Se incubaron a 25ºC por 48 horas, al cabo de este periodo se realizó la lectura de los halos de inhibición (mm) de crecimiento fúngico provocado por los aceites esenciales.

Dermatofitos.- Pruebas biológica (20 µI) fueron directamente aplicados en los pozos (10 mm) realizadas en el Agar Sabouraud (20 cm3) contenidos en cajas petri (10 cm) y se añadió además en cada pozo una suspensión de esporas de los diversos dermatofitos

(Trichophyt11mrubrun y

Microsporumcanis). Se dejó incubar por 14 días a 25ºC controlando el desarrollo fúngico coti- dianamente, la última observación se realizó a los 14 días.

RESULTADOS

El estudio se ha realizado con 3 especies vegetales aromáticos Aloysiatrip/rylla (Cedrón), Ros­ marinusofficinalis (Romero)

y

Plnus radiata (Pino), cuyos resultados son presentados desde su proceso de recolección, extracción, rendimiento de extracción, propiedades fisicoquímicas y evaluación de la actividad antifúngica.

Tabla 1.- Porcentaje de rendimiento de los aceites esenciales

MUESTRA

Aloysiatripltyl/11( Cedrón)

Rosmarlnusofficinalls (Romero)

Pinusradiate (Pino)

Fuente: Cuaderno de registros

Se determinó utilizando la siguiente fórmula:

Peso del aceite obtenido (g)

% DE EXTRACCIÓN

0.80

0,49

0.67

Rendimiento%=--- X 100

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Tabla 2. Densidad en g/ml de los aceites esenciales

MUESTRA Atoyslatriphylla (Cedrón)

Rosmarinusofficinalis (Romero)

Plnusradiate (Pino)

Fuente: Cuaderno de registros

Se determinó utilizando la siguiente fórmula:

DENSIDAD 0,9101

0,892

0,908

Densidad (g/ml) = [(Peso del picnómetro + muestra) - (Peso del picnómetro)] (g)

Volumen del aceite (mi)

Tabla 3. Índice de refracción del aceite esencial

MUESTRA

Aloysiatriphyllu (Cedrón)

Rosmarlnusofficínulls (Romero)

Plnusradiate (Pino)

Fuente: Cuaderno de registros, nu: indicie de refracción

INDICE DE REFRACCION (n0)

1,470

1,480

1,468

Se determinó la lectura en un Refractómetro de ABBE a 20ºC (Inga BA., Guerra MB., 2000; Fuertes RC, Munguía SY., 2001 ).

Tabla 4.Solubilidad en etanol

MUESTRA

Atoysiatriphyllo (Cedrón)

Rosmari1111sffici11u/is (Romero)

Plnusradiute (Pino)

Fuente: Cuaderno de registros

SOLUBILIDAD EN ETANOL

90%

95%

95%

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lbone Marizo] Condori / Luzmila Beníque Tabla 5. Resumen de la concentración mínima fungicida de los aceites esenciales ante los microorganismos de prueba*

MICROORGANISMOS ESPECIE VEGETAL DE PRUEBA

(Concentración ppm)

Aloysiatrlphytta Rosmarlnusofficinalis Pinusradlata

(Cedrón) (Romero) (Pino)

Cundida a/bicans 250 250 250

Trichophytumrubrun 5000 5000 5000

Microsporumcanis 10000 10000 10000

Ppm: partes por millón

*Los resultados son la media aritmética de 2 experimentos, en los cuales cada dilución fue realizada por tri- plicado

Tabla 6. Resultados de la concentración mínima fungicida de los aceites y estándar, frente a los hongos en estudio*

MICROORGANISMOS ESPECIE VEGETAL DE PRUEBA

(Porcentaje de Inhibición)

Aloysiatriphylle Rosmarlnusofficinalls Pinus radiata

(Cedrón) (Romero (Pino)

Cándida a/bicans 45 40 80.60

Tric/1ophyt11111r11br1111 90 87 99.99

Microsporumcanis 99.99 99.99 99.99

*Los resultados son la media aritmética de 2 experimentos, en tos cuales cada dilución fue realizada por triplicado

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

Discusión

Debido a la incidencia de enfermedades causadas por la Candidaalbicans y derma- tofitos especialmente por: Triclwpliytumrubrun y Microsporumcanis y dado que se conoce según la teoría de los aceites esenciales tienen propiedades antifúngicas, se estudiaron los aceites esenciales extraídos de las especies vegetales aromáticos pro- cedentes del departamento de Puno.

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para proponer la explotación comercial de un aceite" (Joulain D., 1996). La variabili- dad del rendimiento puede asociarse en diferencias en el clima, épocas de recolección y métodos de obtención, entre otros factores.

La densidad de los aceites esenciales está por debajo de la densidad del agua, esto se debe a la presencia de hidrocarburos terpenicos, que en comparación al rango que oscila entre 0,8 y 1,2 de (Rojas. R: et al., 2003; Lock Oiga. 1994), demuestran que está en un rango adecuado para aceites esenciales.

En cuanto al índice de refracción de los aceites, los resultados indican la presencia de estructuras aromáticas bencénicas oxigenadas por el resultado encontrado, que son coherentes a los encontrados en similares estudios (Rojas. R: et al., 2003).

La solubilidad en etanol, va desde insolubles hasta solubles desde 85 a 95 % de con- centración etanólico, lo que quiere decir, "que existe la presencia desde hidrocarbu- ros terpenicos hasta compuestos oxigenados" (Rojas. R: et al., 2003).

En la tabla 5 y 6, según el concepto de Concentración Mínima Fungicida, es la con- centración que reduce el crecimiento del hongo en un 99.99%, en nuestra tabla de resultados y resumen, el pino inhibe el crecimiento a 5000 ppm, sobre el Trichophy­ tonrubrum y no así el cedrón y romero, pero en el caso de los aceites del Atoysiatri­ phylla (Cedrón), Rosmarinusofficinalis (Romero) y Pinus radiata (Pino), sobre la

Candidaalbicans, Trichophytonrubrum y Microsporumcanis.

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Evaluación de la actividad antimicótica de los aceites esenciales de plantas

1 bone Marizo] Condori / Luzmila Benique Conclusiones

1. La variabilidad del rendimiento puede asociarse a diferencias en el clima, suelo, méto- do de cultivo y época de recolección Se determinó el porcentaje de rendimiento.

2. Los resultados de las propiedades fisicoquímicas de los aceites, podría preverse a que su estructura está conformado por grupos aromáticos oxigenados y moléculas quími- cas que se encuentran en los aceites.

3. En base al análisis realizado se concluye que los aceites esencialesdelA/oysiatriphy­ /la (Cedrón),Rosma,.i,111soffici11alis (Romero) y Plnus radiata (Pino), tiene actividad Fungicida especialmente para Candidaalbicans, Microsporumcanisy Trichophyton­

r11hr11111similar al control positivo de Fluconazol para inhibir su crecimiento en un 99.99 %. Se comprobó la Actividad Fungicida.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Salaverry O. (2005). La complejidad de lo simple: plantas medicinales ysociedad mo- derna. Vol. 22(4):245-46. Rev Perú Med.Exp.SaludPública

2. Bajpai K. et.al. (2006). Antioxidant and antidennatophytic activities of essential oil and extracts of magnolia Iiliflora.Food and Chemical toxicology.

3. Cowan, M.M. (1999). Plant products as antimicrobial agents;Vol. 12:564-587. RevCli- nicMicrobiologi.

4. Mesa-Arango, A.C., Bueno Sanchez, J.G. (2004). Productos naturals con actividad antimicótica; vol. 17: 325-331. Revista Española de Quimioterapia.;

5. Harbone, J .B. ( 1998). Phytochemical methods a guide to modern techniques of plant analysis, essentia1 oils, 3 era edic.

6. Schelz, Z: et.al. (2006). Antimicrobial and antiplasmidactivities of essential oils, fitoterapia.;vol. 77:279-285.

7. López A: et al. (2001 ). Antiviral and antimicrobialactivities of Colombian medicinal plants. J. Ethnophannacol; vol. 77: 189-196.

8. Inga BA., Guerra MB. (2000). Efecto del aceite esencial de Minthostachysmollis (muña) contra algunas bacterias y hongos de interés en la Salud [Tesisde Licenciatura]. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos

9. Fenner R: et al. (2005). Antifungalactivity of sorne BrazilianHypericumspecies.;Vol. 12(3):236-40.Phytomedicine.

1 O. Fuertes RC, Munguía SY. (2001 ). Estudio Comparativo del aceite esencial de Minthos­

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VOLUMEN 14 - Nº 2 Julio-Diciembre 2014

11. Rojas. R: et al. (2003). Antimicrobial activity of selected peruvian medicinal plants; vol. 88(2-3): 199-204.J. Ethnopharmacol.

12. Joulain, D. ( 1996). Investigating New Essential Oils: Rationale, Results and Limitatio- nes; vol. 21: 1-1 O.Perfurner and Flavorist.

13. Lock Oiga. (1994). Investigación Fitoquímica, Métodos en el estudio de productos naturales. (23-34) 2ª ed. Lima. Fondo Editorial PUCP

Fecha de recepción: 15/08/14

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