Curva de Crecimiento de Bacterias Filamentosas Curva de Crecimiento de Bacterias Filamentosas
RESUMEN: RESUMEN: Objetivo:
Objetivo: Evaluar el crecimiento de Streptomyces sp. en función del tiempoEvaluar el crecimiento de Streptomyces sp. en función del tiempo Metodología:Metodología: para evaluar el crecimiento de Streptomyces sp se realizaron diluciones 10
para evaluar el crecimiento de Streptomyces sp se realizaron diluciones 10-1-1hasta 10hasta 10-10-10,, luego de esto fueron inoculadas cajas de petri con agar ISP
luego de esto fueron inoculadas cajas de petri con agar ISP22, con el propósito de emplear , con el propósito de emplear la técnica de recuento en placa para Streptomyces sp y de esta manera determinar la la técnica de recuento en placa para Streptomyces sp y de esta manera determinar la concentraciones a diferentes horas de la fermentación.
concentraciones a diferentes horas de la fermentación. Resultados:Resultados: Cuando se inició laCuando se inició la curva de crecimiento del microorganismo se observó que la bacteria tuvo una fase de curva de crecimiento del microorganismo se observó que la bacteria tuvo una fase de adaptación de 48 horas, en donde el microorganismo se pudo desarrollar con facilidad, adaptación de 48 horas, en donde el microorganismo se pudo desarrollar con facilidad, además de esto, se observa un decrecimiento en la gráfica lo cual representa la fase de además de esto, se observa un decrecimiento en la gráfica lo cual representa la fase de muerte en la hora 72.
muerte en la hora 72. Conclusión:Conclusión: Se logró evaluar el crecimiento de Streptomyces sp.Se logró evaluar el crecimiento de Streptomyces sp. en función del tiempo.
en función del tiempo.
Palabras Claves: Streptomyces sp, Recuento en placa, Biomasa. Palabras Claves: Streptomyces sp, Recuento en placa, Biomasa. INTRODUCCIÓN
INTRODUCCIÓN
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso continúa hasta que algún cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso continúa hasta que algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. También puede detenerse el crecimiento por acumulación de alguna substancia inhibidora También puede detenerse el crecimiento por acumulación de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero se supone por ahora que éste no es el formada por los mismos microorganismos, pero se supone por ahora que éste no es el caso y que la primera alternativa es la válida. Luego hay dos aspectos claramente caso y que la primera alternativa es la válida. Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiométrico, por el cual la diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiométrico, por el cual la concentración final de microorganismos obtenidos dependerá de la concentración y concentración final de microorganismos obtenidos dependerá de la concentración y composición del medio de cultivo, y el otro cinético, el que dirá con qué velocidad se lleva composición del medio de cultivo, y el otro cinético, el que dirá con qué velocidad se lleva a cabo el proceso.
a cabo el proceso.11
El crecimiento se puede considerar como el aumento ordenado de todos los El crecimiento se puede considerar como el aumento ordenado de todos los constituyentes químicos de un organismos, lo cual, para los organismos unicelulares, constituyentes químicos de un organismos, lo cual, para los organismos unicelulares, conduce a un aumento en el número de individuos en la población [2].
conduce a un aumento en el número de individuos en la población [2].
Para evaluar el crecimiento de bacterias filamentosas se debe disponer inicialmente de una cantidad de cultivo suficiente para inocular el medio del fermentador; además debe ser metabólicamente activo y estar libre de contaminantes [3].
La cinética de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones más utilizadas por la ingeniería alimentaria y la biotecnología, por lo tanto, es menester conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, así como, la forma de cuantificación de los mismos, sus formas de aplicación, las ventajas y desventajas de los diferentes métodos, y sobre todo el monto económico de cada uno de ellos. los métodos directos (recuento del numero de células, peso celular, determinación de dna) y métodos indirectos (consumo de oxigeno, técnicas colorimétricas, medida de turbidez).[6]
Actualmente se estudian los problemas más complejos y difíciles del crecimiento y de la división celular utilizando microorganismos, especialmente bacterias. las células de muchos de estos seres crecen individualizadas, separándose después de la división celular y por ello resulta difícil cultivar y aislar organismos unicelulares en condiciones bien definida. [4]
streptomyces se caracteriza por poseer una morfología particular en donde se diferencian
dos formas de crecimiento, una primaria o asimilatoria y una secundaria o reproductiva. el género es de gran importancia biotecnológica debido a que como metabolitos secundarios produce antibióticos que son de amplio uso en medicina humana y veterinaria, así como compuestos represores de tumores, enzimas y vitaminas (4).
a pesar de la importancia de streptomyces como uno de los elementos característicos de
las poblaciones microbianas edáficas, se conoce poco acerca de su comportamiento. siendo reconocida la necesidad actual del estudio de la distribución del género en diferentes regiones climáticas y ecológicas. (4)
El objetivo de este trabajo fue realizar una curva de crecimiento para bacterias filamentosas como lo es Streptomyces, determinando biomasa viable mediante la técnica de dilución decimal y recuento en placa y observar los cambios morfológicos en función del tiempo [7].
MATERIALES Y MÉTODOS
Recuento de Viales en Función del Tiempo.
A partir de una alícuota correspondiente a la hora de crecimiento se realizaron diluciones seriadas hasta 10-1-10-10. posteriormente se sembró en superficie en agar isp
2 0,1ml de cada una de las diluciones, se homogenizo e incubo por 24 horas a 30°c.
RESULTADOS
A partir de las suspensiones obtenidas se realizó la coloración de Gram para determinar la pureza de la muestra y se determinaron características microscópicas y macroscópicas las cuales están consignadas en la tabla 1.
Tabla1. Caracteristicas Macro y Microscopicas de las colonias de Streptomyces sp en agar ISP2. TIEMPO (H) CARACTER STICAS MACROSCÓPICAS CARACTER STICAS MICROSCÓPICAS
48
Color anverso: blanco
grisáceo
Color reverso: cafe
Textura: correosa y
pulverulenta
BACTERIA FILAMENTOSA GRAM POSITIVA. MICELIO
VEGETATIVO SIN SEPTOS. Fuente: [7]
El crecimiento de Streptomyces sp se evaluó en diferentes intervalos de tiempos, determinando en cada uno de los tiempos las unidades formadoras de colonias presentes, el resultado de esto se encuentra representado en la tabla 2.
Tabla2. Biomasa en función del Tiempo
HORA
RECUENTO
N.D.
0
3x10
2UFC/mL
11x10
4UFC/mL
24
31x10
4UFC/mL
10x10
4UFC/mL
48
12x10
4UFC/mL
72
30x10
4UFC/mL
96
79x10
4UFC/mL
Fuente: [6]
La Tabla 3 muestra las unidades formadoras de colonias en función del tiempo obtenidos en el control interno.
Tabla 3. Biomasa en Función del Tiempo (Datos Control Interno)
TIEMPO UFC/Ml 0 1,70E+04 24 9,10E+04 48 3,50E+04 72 5,60E+04 96 1,40E+04
Fuente: Blackboard Academic Suite.
Gráfico1. Curva de Crecimiento de Streptomyces sp a partir de los datos de Control
Interno 0.00E+00 1.00E+04 2.00E+04 3.00E+04 4.00E+04 5.00E+04 6.00E+04 7.00E+04 8.00E+04 9.00E+04 1.00E+05 0 20 40 60 80 100 120 U F C / m L Tiempo
Grafico2. Representación de las Unidades formadoras de Colonias en función del tiempo a partir de los datos obtenidos de los grupos de Laboratorio
DISCUSION
al observar el gráfico 1 y el gráfico 2 presentan ciertas similitudes, sin embargo, en los datos que se encuentran en el control interno hay un crecimiento mucho más marcado que los datos obtenido por el grupo, sin embargo, los dos tienen un decrecimiento que llega hasta las 48 horas. al comparar estos resultados con los que reporta garcia y colaboradores, se puede considerar que las condiciones de cultivo en ese estudio no fueron las apropiadas, ya que el microorganismo presento un crecimiento hasta las 30 horas de cultivo con una biomasa menor a la obtenida en esta práctica, utilizando en los dos estudios como fuente de carbono la glucosa. [8]
Al comparar los resultados presentados en la figura 2 con el estudio realizado por Sastoque et al, se observa que el crecimiento de Streptomyces en el estudio de Sastoque
presento más unidades formadoras de colonias llegando a una población de 1*10 7UFC/ml en menor tiempo. Se deduce que este resultado se debe a las condiciones de cultivo, utilizándose como agar el medio de quitina coloidal al 1% con concentraciones establecidas de materia orgánica presente en el suelo. [9]
Al analizar el efecto del pH sobre el crecimiento de Streptomyces sp, se comparó con el
estudio realizado por Corrales et al, donde se obtuvo una población mayor con un pH de 6, mientras en este estudio la biomasa fue de 3*105 UFC/ml, con un pH de 7. De esta manera se considera que el pH utilizada en el estudio de Corrales es el óptimo para el desarrollo deStreptomyces sp.[10]
Al relacionar los datos de control interno y datos de grupo con el estudio realizado por Arroyo (10), se observa que el Log UFC/ml durante la fase exponencial es de 6,48
mientras en esta práctica fue menor (tabla 2 y tabla 3). Al evaluar las condiciones de cultivo se afines, por esto se deduce que la cepa empleada en el estudio de Arroyo presento mayor rendimiento por la diferencia en su metabolismo.[11]
0.00E+00 2.00E+05 4.00E+05 6.00E+05 8.00E+05 1.00E+06 0 20 40 60 80 100 120 U F C / m L Tiempo
Curva de Crecimiento
Streptomyces
CONCLUSION
Se logró evaluar el crecimiento de Streptomyces sp en función del tiempo mediante la técnica de recuento en placa.
Se hace importante conocer la cinetica de crecimiento de un microorganismo de importancia biotecnológica, con el fin de conocer en cuánto tiempo va a producir un metabolito de importancia, y en cuanto tiempo posiblemente ya no sea viable.
REFERENCIAS
[1] Crecimiento Microbiano. Cap 5. Documento Disponible: http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_2.pdf . Visitado el 25 de Octubre a las 7:35P.M. de 2011
[2] SCRAGG A. Biotecnología para Ingenieros. Editorial Limusa. Balderas, México. 2002. [3] TREVAN M. BOFFEY S. STANBURY P. GOULDIN K. Biotecnología: Principios Biológicos. Editorial Acribia. Zaragoza, España. 1990.
[4] Arias E. Lastra J. Cinética de crecimiento.
http://www.monografias.com/trabajos10/cincrec/cincrec.shtml Consultado el 25 de Octubre a las 8:10 PM de 2011.
[5] Corredor P. Andrade E. Tohme J. Duque M. Flórez C. Abundancia y diversidad de las comunidades de Streptomyces en seis coberturas vegetales de la franja cafetera del
Quindío 2000, 5(2): 11p.
[6] Guzmán A. Hernández M. Mendosa S. Determinación y curva de crecimiento de
microorganismos (E. coli y levadura Cándida).
http://www.scribd.com/doc/23099813/Curva-de-Crecimiento-de-E-Coli-y-Levadura-Candida Consultado el 25 de octubre de 2011.
[7] Pedroza A. Matiz A. Quevedo B. Aguirre A. Manual de introducción a la biotecnología. Primera edición. Pontificia universidad javeriana. Bogotá, D.C. Colombia.2007, 116p. [8] García Y. Ruiz B. Chávez A. Sánchez S. Expresión de la región SCO 2127 de
Streptomyces coelicolor en presencia de diferentes fuentes de carbono. Instituto de
investigaciones Biomédicas UNAM. Departamento de Biologia Molecular y Biotecnología. [9] Sastoque E. Aislamiento y selección de microorganismos productores de quitinasas a partir de residuos de concha de camarón con potencial biocontrolador. Tesis doctoral. Facultad de ciencias. Pontificia Universidad Javeriana 2005, 123p.
[10] Corrales L. Ciro G. Péptidos con actividad antimicrobiana producidos por microorganismos nativos. Revista de la Facultad de Química farmacéutica. Universidad de Antioquia, Medellín 2010, 17(2): 181-190.
[11] Arroyo A. Producción de enzimas pectinasas por Actinomycetos en cultivo sumergido utilizando pectina y cascara de naranja. Tesis doctoral. Facultad de biotecnología. Perú 2002.
