Electroforesis en gel de agarosa al 1,2% de los productos obtenidos de la PCR utilizando los cebadores 8 F y U1492R para la amplificación de genes. Electroforesis en gel de acrilamida al 6% de los productos obtenidos de la PCR utilizando los cebadores SK7 y SK8 para la amplificación.
INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
Diagnóstico cultural y molecular de Salmonella y Escherichia coli, presentes en animales domésticos y silvestres con impacto en las unidades de producción y envasado de fresas y hortalizas en los estados de Michoacán, Guanajuato y Colima. Diagnóstico cultural y molecular de Salmonella y Escherichia coli presentes en aguas para aplicación de productos fitosanitarios, riego y lavado de manos en las unidades de producción y envasado de fresas y hortalizas en los estados de Michoacán, Guanajuato y Colima.
HIPÓTESIS
REVISIÓN DE LITERATURA
Origen y principios de la inocuidad alimentaria
Se detectaron los puntos críticos y riesgos en cultivos en campo, envasado y distribución de alimentos. Esta guía es uno de los primeros pasos de la iniciativa para mejorar la seguridad de las frutas y hortalizas desde el campo hasta la mesa.
Definiciones de inocuidad alimentaria
Por tanto, los principios fundamentales de esta filosofía son prevenir y minimizar los riesgos para la salud de los consumidores de frutas y verduras frescas. Por lo tanto, se considera de alta prioridad hacer cumplir todas las normas oficiales que garanticen la seguridad alimentaria; actuar responsablemente en todos los niveles del contexto agrícola (en el campo, embalaje, centros de distribución y transporte); contar con personal capacitado y controles efectivos; además de un sistema que pueda monitorear adecuadamente toda la cadena de producción (FDA, 1998).
La inocuidad alimentaria en México
Se reconoce que los alimentos pueden contaminarse con patógenos en su viaje desde el campo hasta la mesa. Las enfermedades transmitidas por los alimentos se consideraban responsabilidad exclusiva de las personas que preparaban los alimentos.
Las barreras técnicas al comercio y la inocuidad alimentaria
Estudios de caso y cierre de fronteras por hortalizas producidas en México
Principios esenciales para la reducción de riesgos microbianos en frutas y
Cuando el agua entra en contacto con frutas y verduras frescas, la posibilidad de contaminación por esta fuente dependerá de su calidad y origen. Se deben monitorear las prácticas de uso de estiércol o biosólidos municipales para minimizar la posibilidad de contaminación.
Importancia y calidad del agua dentro del proceso agrícola
Importantica de la producción y exportación de los cultivos de jitomate,
- Cultivo de jitomate
- Cultivo de papaya
- Cultivo de frutillas
La cifra de consumo final en el país en 2014/15 dependerá de las exportaciones de tomate a EE.UU. porque el consumo interno es lo que queda después de las exportaciones (FDA, 2014). Según estimaciones de la FAO, la producción mundial de frutas tropicales alcanzará los 82 millones de toneladas en 2014.
Principales características de los organismos de importancia en los
- Técnicas para la clasificación de las bacterias
- Enfermedades de origen microbiano transmitidas por los alimentos
Estas técnicas son: comparación de los porcentajes de bases del ADN, es decir, el porcentaje de guanina y citosina con relación al total de bases, hibridación de ácidos nucleicos, para determinar el grado de similitud entre el ácido nucleico de dos microorganismos y comparación directa de la secuencia de nucleótidos de los ácidos nucleicos (Mossel et al., 2006). La combinación de la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), junto con el uso de colorantes fluorescentes no radiactivos específicos, ha permitido la automatización y el abaratamiento de estas técnicas, lo que ha contribuido a su aumento. El primero incluye enfermedades que son consecuencia de la presencia de microorganismos infecciosos en los alimentos a través del consumo.
La segunda clase de enfermedades transmitidas por alimentos es la consecuencia de la absorción intestinal de toxinas que ya estaban presentes en los alimentos antes de su ingestión, como resultado del crecimiento y metabolismo sobre dichos sustratos de ciertos microorganismos, originando las "toxinas".
Salmonella
- Características de Salmonella
- Serovariedades
- Ciclo biológico de Salmonella
- Transmisión, síntomas y cuadros clínicos de Salmonella
Un aspecto sorprendente de la epidemiología de la salmonelosis es que existen aprox. Hay 2.500 serotipos o serovares conocidos, los más importantes de los cuales se enumeran en la Tabla 3, como las principales causas de "infección tóxica" de los alimentos por salmonelas. Los síntomas clínicos generalmente aparecen entre 18 y 36 horas (rango entre 12 y 48 horas) después de consumir el alimento contaminado. Sin embargo, gracias a los considerables esfuerzos de los expertos en vigilancia y epidemiología, se ha evaluado razonablemente la importancia de la salmonelosis en el conjunto de enfermedades transmitidas por los alimentos.
En muchos países privilegiados, es una de las causas más frecuentes de infecciones transmitidas por alimentos.
Escherichia coli
- Características de E. coli
- Ciclo biológico
- Grupos de E. coli
Para la adhesión y colonización dispone de fibras, a menudo específicas, que impiden la transmisión interespecífica de las cepas de ETEC. El origen de las cepas de ETEC son las heces humanas que contaminan el agua y los alimentos. 34 contraste del 95% de las cepas de E. coli que producen fluorescencia en presencia de este compuesto.
Las cepas se caracterizan por mostrar un patrón de adhesión "agregativo" característico en cultivos celulares de la línea HEp-2.
Impacto de las enfermedades transmitidas por alimentos contaminados
Las complicaciones por infecciones alimentarias son poco comunes, pero a veces pueden llegar a ser muy graves. La prevalencia de estas enfermedades es alta, pues se estima en 104 pacientes por 106 habitantes, considerando que son las enfermedades que han sido tratadas clínicamente (Mossel, 2006).
Enfermedades trasmitidas por bacterias presentes en animales
Se sabe que se habla de zoonosis transmitidas por perros y gatos, pero hay mucho desconocimiento cuando se trata de animales salvajes, especialmente reptiles y anfibios. Entre las principales se encuentra la salmonelosis, que es la zoonosis de reptiles más conocida. 40 (E. coli) y Salmonella (FDA, 2002), estos brotes amenazaron la salud de los consumidores en los mercados nacionales e internacionales y afectaron vínculos comerciales y cierres de fronteras, como es el caso del melón Cantaloupe, donde se exportaron 95 paquetes. en 2002 y sólo 5 en 2010, lo que resultó en pérdidas por 67,3 millones de dólares (Carranza, 2010).
Con base en lo anterior, sería de gran valor analizar e identificar cultural y molecularmente los riesgos biológicos que provienen de las heces de animales domésticos y silvestres, así como algunos riesgos biológicos presentes en el agua utilizada en el proceso productivo, debido a que diferentes especies o serotipos de Salmonella y E.
MATERIALES Y MÉTODOS
- Ubicación de las unidades de producción
- Selección y muestreo de las unidades de producción
- Áreas seleccionadas para muestrear
- Primer muestreo
- Segundo muestreo
- Procesamiento de las muestras obtenidas en el primer muestreo
- Toma de muestras de aguas en campos y empaques
- Procesamiento de las muestras obtenidas en el segundo muestreo
- Toma de muestras de aguas en campos y empaques
- Análisis de las bacterias
- Conservación de las bacterias
- Extracción de ADN
- Cuantificación y calidad del DNA
- Amplificación de fragmentos (PCR)
- FRLP (Corte con enzimas de restricción)
- Gel de acrilamida
- Análisis estadístico de fragmentos RFLPs y construcción de dendogramas
Agua de almacenamiento IPC: Con programa de seguridad EPCI: En proceso de certificación de seguridad SPI: Sin programa de seguridad. Para las muestras tomadas de: agua para lavado de manos, agua para lavado de manos del baño, agua para lavado de manos del comedor, agua del lavabo ubicado en la parcela, agua del área de mezcla, agua de filtro, agua de almacén antes del filtro , agua de riego por goteo, agua potable y agua potable del pozo profundo, se utilizó la metodología descrita anteriormente (primer muestreo). Tomar muestras de: agua del baño 1 para lavado de papaya, agua del baño 2 con cloro a 200 ppm, agua del baño 3 con fungicida, agua después del filtro, agua de almacenamiento, agua para aplicación de fungicidas, agua de membrana y agua de canal, lavado llevado a cabo utilizando la metodología referida en la primera muestra.
Las muestras de agua de pozo para riego y el agua de pozo se tomaron según el método descrito en el primer muestreo.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Detección de Salmonella y E. coli en medio de cultivo MCA
61 la aplicación de Cloro no sirvió de nada, ya que el fruto había sido infectado previamente en el vaso 1 y había sido reinfectado en el vaso 3. Los lugares de muestreo donde no se detectó riesgo biológico se enumeran a continuación, estos lugares fueron: pozo de riego en la finca el Retoño y en el agua para lavado de manos en la finca el Salvador en Tecomán, Colima. Así como en agua de riego por goteo en La Aldea en Silao, Guanajuato.
CPI: Con programa de seguridad EPCI: En proceso de certificación de seguridad SPI: Sin programa de seguridad.
Detección molecular de Salmonella y E. coli
- Calidad y cantidad de DNA
- PCR
- Identificación de las bacterias mediante el gen 16S
- Identificación de Salmonella mediante el gen Inva
- Identificación del serotipo E. coli O157:H7 mediante el gen de la
44.-Agua para lavado de manos REY Isla 67.-Agua para aplicación de fungicidas REY Isla. 42.-Agua para lavado de manos REY Isla 64.-Agua para aplicación de fungicidas REY Isla. 43.-Agua para lavado de manos REY Isla 65.-Agua para aplicación de fungicidas REY Isla.
1.-Marcador 24.-Agua para lavado de manos REY Bal 48.-Agua para la aplicación de fungicidas REY Isla.
Corroboración molecular de Salmonella y E. coli con RFLPs
2.-Sal TEC de Heces de Ratón 26.-Bal de Heces de Pollo Rey 49.-Almacenar agua antes del filtro REY Joya. 3.-Excrementos de gallina TEC Sal 27.-Excrementos de gallina REY Bal 50.-Agua para lavarse las manos REY Isla 52.-Agua para beber de pozo profundo REY Bal 6.-Excrementos de lagartija TEC Sal 30.-Regar el sitio de mezcla.
55.-Agua del Almacén REY Bal 9.-Heces de gato REY Joya 33.-Beber agua de un pozo profundo.
CONCLUSIONES
Rancho la Joya, Los Reyes Michoacán), 35 (opslagwater voor het filter; Rancho la Joya, Los Reyes Michoacán), 39 (drinkwater uit de diepe put; Rancho Baltazar, Los Reyes Michoacán), 48 (opslagwater voor het filter ; Rancho la Joya, Los Reyes Michoacán), 3 (kippenuitwerpselen; Rancho Señor Salvador, Tecomán, Colima), 1 (muizenuitwerpselen; Rancho Señor Salvador, Tecomán, Colima), 4 (kippenuitwerpselen; Rancho Señor Salvador, Tecomán, Colima ), 5 (uitwerpselen van hagedissen; Rancho Señor Salvador, Tecomán, Colima), 10 (uitwerpselen van katten; Rancho la Joya, Los Reyes Michoacán), 20 (druppelirrigatiewater; Rancho del Ing. Tamez, Tecomán Colima), 26 (uitwerpselen van kippen ; Rancho Baltazar, Los Reyes Michoacán), 27 (kippenuitwerpselen; Rancho Baltazar, Los Reyes Michoacán), 32 (drinkwater uit een diepe put; Rancho el Retoño, Tecomán, Colima), 38 (drinkwater uit de diepe put; Rancho Baltazar, Los Reyes Michoacán), 42 (water uit het magazijn; 84 Baltazar, Los Reyes Michoacán), 57 (water uit het membraan; Rancho la Joya, Los Reyes Michoacán) en 59 (water uit de winkel;. De RFLP-techniek door middel van de restrictie-enzymen Hhal, SmaI en EcoRI en het dendrogram identificeerde en toonde moleculair de aanwezigheid van Salmonella aan in monsters 45 (water voor de toepassing van fungiciden; Rancho la Isla, Los Reyes Michoacán), 44 (water voor de toepassing van fungiciden; Rancho la Isla, Los Reyes Michoacán), 44 (water voor de toepassing van fungiciden; Rancho la Isla, Los Reyes Michoacán), 21 (druppelirrigatiewater; Rancho del Ing. Tamez, Tecomán Colima), 2 (uitwerpselen van muizen;.
Rancho del Señor Salvador, Tecomán, Colima), 25 (water uit bad 3 met swamdoders om te was; Rancho del Ing. Tamez, Tecomán, Colima), 28 (water uit die besproeiingsput;.
LITERATURA CITADA
La seguridad alimentaria en el comercio (nacional e internacional) y su importancia en la Salud Pública. Detección de Salmonella spp y recuento de coliformes fecales en agua agrícola en la producción de melón cantalupo. DETECCIÓN Y RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS DE Escherichia coli Y Salmonella EN AGUAS Y SUELOS AGRÍCOLAS Revista Fitotecnia Mexicana, vol.
Salmonella y Escherichia coli enteropatógena en el entorno vegetal: fuentes potenciales, supervivencia y manejo.