Se aislaron tres hongos entomopatógenos (HE) y dos hongos fitopatógenos (HF) de muestras de suelo de un huerto de aguacate, el HE obtenido mediante la técnica de trampa con cebo para insectos y el HF mediante la técnica de planta trampa (Rhododendron indicum). Beauveria bassiana (Bals) Vuillemin, Metarhizium robertsii JF Bisch, Rehner, Purpureocillium lilacinum (Thom), Phytophthora cinnamomi Rands y Alternaria alternata (Fr.:Fr.). El efecto antagónico (DCA/Tukey) mostró que los hongos entomopatógenos sobre los hongos fitopatógenos fueron significativos (p<0,05).
Estos y otros estudios sobre diferentes géneros de hongos entomopatógenos han informado sobre las diversas funciones que pueden desempeñar y abren un nuevo paradigma para el uso exitoso de estos microorganismos en programas de control biológico (Vega et al., 2009). Una forma de conocer las relaciones que se dan entre diferentes organismos presentes en una misma localización son las pruebas de doble confrontación o pruebas antagónicas (in vitro), que determinan con precisión el tipo de relación que se presenta entre hongos entomopatógenos y hongos fitopatógenos. El objetivo del estudio fue obtener aislados de hongos entomopatógenos nativos a partir de muestras de suelo recolectadas en un huerto de aguacate y determinar su capacidad antagónica contra P.
Importancia del cultivo del aguacate
Tristeza del aguacate
- Importancia económica
- Hospedantes
- Distribución
- Ciclo biológico y Epidemiología
- Síntomas y Daños
- Manejo
- Importancia
- Clasificación taxonómica Reino: Fungi
- Ciclo biológico y Epidemiología
- Síntomas y daños
- Manejo
La oospora resultante de la unión de los gametangios ocupa todo el oogonio, que se denomina plerótica. Phytophthora cinnamomi Rands es el hongo que causa la principal enfermedad de las plantaciones de aguacate en el mundo. El síntoma más evidente es la muerte de la planta desde la parte superior de la copa y desde las puntas de las ramas.
Los síntomas foliares son causados por una absorción reducida de nutrientes y agua y su transporte ascendente.
Hongos entomopatógenos para el control de enfermedades en plantas
- Clasificación sistemática
- Características Generales de Hongos entomopatógenos 1. Ciclo de vida
- Ecología
- Principales géneros y especies de hongos entomopatógenos 1. Características de Beauveria bassiana (Bals) Vuillemin
- Características de Metarhizium robertsii Bisch, Rehner y Humber Metarhizium robertsii JF Bisch, Rehner y Humber (Clavicipitaceae) es un hongo que
- Mecanismos de acción de los microorganismos
- Microorganismos en el control de enfermedades en plantas
Son uno de los primeros organismos utilizados para el control biológico de plagas, debido a que se encuentran en todo el universo y tienen una gran diversidad, representan una solución sostenible para el MIP (Sinha et al., 2016). Estos hongos están presentes de forma natural en el suelo, en el filoplano de las plantas e incluso en el aire (Meyling y Eilenberg, 2006; Quesada-Moraga et al., 2007; Quesada-Moraga y Santiago Álvarez, 2008) y están inseparablemente asociados a su huéspedes, en el proceso de coevolución constante, por lo que se adaptan a la vida a expensas de aquellos de quienes obtienen la energía necesaria para su desarrollo (Roy et al., 2010). El ciclo de vida de un hongo entomopatógeno comienza con la germinación de una espora en la epidermis del huésped.
Asimismo, es hábitat de muchos insectos hospedantes potenciales, algunos de los cuales se presentan en altas densidades (Humber, 2008). 14 Beauveria bassiana es un hongo entomopatógeno perteneciente al orden Hypocreales. Forma una capa blanca y densa sobre el exoesqueleto de sus huéspedes y ocasionalmente forma sinemas; las células conidiógenas suelen estar agrupadas (verticiladas o solitarias), incoloras, con base esférica o botella y la extensión apical dentada (raquis) sobre la que se desarrollan los conidios; Los conidios son inseptados, incoloros o amarillentos, esféricos o elípticos (Humber, 2012). La utilidad de los hongos entomopatógenos para el control de plagas supone una alternativa viable a los insecticidas químicos.
Metarhizium robertsii no se puede distinguir de Metarhizium anisopliae por la forma y tamaño de los conidios, que son similares: M anisopliae (5,0–7,0 x 2,0–3,5 µm) y M. El conidióforo presenta grupos de ramas laterales, cada una de las cuales tiene 2 4 divisiones ovaladas antes de los conidios. En la naturaleza existe una interacción continua entre potenciales patógenos y sus antagonistas (bacterias, levaduras y hongos), de modo que estos últimos contribuyen a que la enfermedad no se desarrolle en la mayoría de los casos.
Se han descrito varios mecanismos de acción de antagonistas para controlar el desarrollo de patógenos. Otro mecanismo importante de los microorganismos de biocontrol es la capacidad de inducir cambios metabólicos en las plantas que aumentan su resistencia a una amplia gama de microorganismos patógenos (hongos y bacterias).
HIPOTESIS
También se ha reportado el uso de levaduras y recientemente el uso de entomopatógenos para el manejo de enfermedades de las plantas (Vega et al., 2009). Desde hace varias décadas se ha documentado el uso de microorganismos antagonistas para el manejo de enfermedades.
OBJETIVOS
- OBJETIVO GENERAL
- OBJETIVOS ESPECIFICOS
- OBTENCIÓN DEL MATERIAL BIOLÓGICO
- Zona de colecta
- Colecta de muestras de suelo
- Obtención de aislamientos de Hongos Entomopatógenos 1. Aislamiento directo
- Aislamiento por dilución de suelo
- Obtención de cultivos monospóricos
- Obtención de aislamientos de Hongos fitopatógenos
- Identificación morfológica
- Extracción del ADN genómico
- Amplificación del ADN
- Análisis filogenético
- Pruebas de confrontación dual
- Diseño Experimental y análisis estadístico
Luego tomamos una pequeña cantidad de conidias con una aguja y las sembramos en cajas de petri con medio de cultivo ADS (Sabouraud Dextrose Agar), incubadas a 28 °C durante 10 días. Se tomaron 100 µl de esta suspensión usando una micropipeta y se vertieron en una placa de Petri que contenía medio de cultivo ADS. Transcurrido este tiempo, las conidias germinadas se observaron al microscopio y se transfirieron individualmente a una nueva caja de petri con medio ADS.
Para la extracción de ADN genómico se utilizaron aislados cultivados durante 7 días en medio de cultivo ADS. Para evaluar la viabilidad de los conidios de los aislados monospóricos, se colocaron 50 µl de dilución 1X10-3 en 5 pocillos de una caja de Petri con medio de cultivo ADS y se incubaron a 28°C por un período de 48 horas. Para determinar la concentración del inóculo, se cultivaron hongos entomopatógenos y Alternaria alternata en cajas de Petri con medio de cultivo ADS y se incubaron a 28 °C durante 15 días; Una vez crecidos y suficientemente esporulados, se rasparon con una espátula estéril y luego se transfirieron a un tubo Falcon que contenía 30 ml de Tween 80 al 0,03%, se agitaron mecánicamente durante 5 min, se filtraron a través de una gasa estéril para separar los conidios del micelio y el medio de cultivo; La concentración de esporas se midió mediante diluciones seriadas; El recuento se realizó en cámara de Neubauer y microscopio compuesto.
La concentración utilizada para inocular placas de petri con medio ADS para ensayos de doble desafío fue 1x107, se tomaron 100 µl de cada suspensión y se dispersaron usando un triángulo de vidrio estéril. La evaluación se realizó mediante el método de bioensayo dual, una metodología modificada utilizada por Bell et al., 1982, que implicó colocar un disco de cultivo fúngico de 7 mm de diámetro. Las placas de Petri se incubaron a 28 °C durante 15 días (Figura 5), tiempo durante el cual se escanearon cada tres días con un escáner HP Scanjet 5590 para observar el crecimiento radial y con la ayuda de imágenes GIMP 2.8.2. fueron procesados..
Para calcular el área de crecimiento de cada hongo se utilizó el programa ImageJ versión 1.51c. Con el objetivo de seleccionar el mejor tratamiento de inhibición del crecimiento de Phytophthora cinnamomi y Alternaria alternata, se utilizó un Diseño Completamente Aleatorio, se utilizaron las superficies totales en cm2 de los hongos entomopatógenos; los datos se evaluaron con una prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov y se transformaron mediante LOG (y).
RESULTADOS
- Aislamientos obtenidos
- Identificación morfológica
- Identificación molecular
- Análisis filogenético
- Pruebas de Germinación
- Evaluación antagónica in vitro
La identificación de los hongos aislados se realizó mediante las claves de Humber (2012) en base a sus estructuras reproductivas, que en este caso fueron conidios para la identificación de Beauveria bassiana (Figura 7), Metarhizium robertsii (Figura 8) y Purpureocillium lilacinum (Figura 9). Del género Beauveria bassiana (Figura 7) se observó que presenta conidios de forma globosa a subulada y de color blanco crema con un tamaño promedio de 1.9 x 1.4 µm, lo que coincide con Humber (2012), donde reporta que la El tamaño de los conidios varía entre 1,5 - 3,5 μm, estas estructuras están dispuestas en un raquis en forma de zigzag. Con base en los resultados obtenidos se confirmó la identidad de los hongos entomopatógenos, la cual coincidió con la identificación morfológica.
Al realizar enfrentamientos para evaluar la inhibición de aislados de hongos entomopatógenos contra hongos fitopatógenos, se observó competencia por el espacio. Los resultados del análisis de varianza (Cuadro 1) Pr>F (<.0001) mostraron que el efecto de los hongos entomopatógenos sobre el crecimiento de Phytophthora y Alternaria provoca diferencias significativas (P<0.01, α=.0001), es decir. Esto significa que existe competencia entre hongos entomopatógenos y hongos fitopatógenos. 32 Los aislados de hongos entomopatógenos mostraron porcentajes de inhibición entre 16.24% y 38.10% (Figura 13) contra P. robertsii, se destacaron por la presentación de zonas de inhibición que impedían el normal desarrollo de P. Porcentaje de inhibición del crecimiento radial de los hongos entomopatógenos. hongos Beauveria bassiana, Metarhizium robertsii y Purpureocillium lilacinum frente a P. cinnamomi.
Porcentaje de inhibición del crecimiento radial de hongos entomopatógenos Beauveria bassiana, Metarhizium robertsii y Purpureocillium lilacinum en presencia de A. alternata. 33 Las Figuras 15 y 16 muestran el crecimiento de los hongos confrontados, se observó que los aislados de Metarhizium, Beauveria y Purpureocillium tienen la capacidad de inhibir el crecimiento de hongos fitopatógenos. Los resultados obtenidos muestran que los aislados domésticos de hongos entomopatógenos pueden ser utilizados en el control biológico de P.
La identificación morfológica de Beauveria bassiana y Purpureocillium lilacinum, teniendo en cuenta el tamaño de los conidios, coincidió con Humber (2012). Se comparó Metarhizium robertsii y coincidió con los resultados obtenidos por Bischoff (2009) quien evaluó las relaciones filogenéticas del complejo M. para la identificación molecular de los aislados obtenidos se utilizaron los cebadores ITS5 e ITS4, obteniéndose fragmentos de 585, 561 y 590 pares de bases en B. Otros investigadores han estudiado las enzimas asociadas con la germinación de los conidios y encontraron que las proteasas aumentan la virulencia de los hongos debido a la aceleración de la germinación (Bidochka y Khachatourians, 1990; Zhanga, 2008).
Según Franco-Chávez et al (2011), los mecanismos de antagonismo observados se deben a que los hongos entomopatógenos producen metabolitos que se utilizan para inhibir y degradar el crecimiento y la pared celular de los hongos fitopatógenos.
CONCLUSIONES
Trampeo of Phytophthora cinnamon in a grove with special ornamental plants and induction of their esporulación. Development of a population-based threshold model of conidial germination for analyzing the effects of physiological manipulation on the stress tolerance and infectivity of insect pathogenic fungi. Occurrence of the entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana in soils of temperate and near northern habitats.
Identification of extracellular protease from Beauveria bassiana as a virulence factor in the pathogenicity for the migratory locust Melanoplus sanguinipes. Evaluation of the in vitro microbiology of certain types of hungry entomopathogenic ingredients of Cuban bio-bacteria. Effects of agricultural system, field margins and carrion insects on the occurrence of insect pathogenic fungi in the soil.
Assessment of entomopathogenic fungi and their extracts against a soil-dwelling pest and soil-borne pathogens of olives. Potential applications of random DNA probes and restriction fragment length polymorphisms in fusarian taxonomy. Specific diversity of the entomopathogenic fungi Beauveria and Metarhizium in Mexican agricultural soils, Journal of Invertebrate Pathology, volume 119.
Crecimiento, esporulación y germinación in vitro de cinco cepas de Metarhizium y su virulencia en huevos y ninfas de Bemisia tabaci. El hongo patógeno de insectos Metarhizium robertsii (Clavicipitaceae) también es un endófito que estimula el desarrollo de las raíces de las plantas.