Le virus de l'immunodéficience humaine de sous-type 1 (VIH-1) a été isolé pour la première fois à l'Institut Pasteur en 1983 par F. Fin 2010, le nombre de personnes séropositives a augmenté, estimé à 34 millions, et 2,7 millions de personnes ont été réinfectées. avec le VIH (OMS, UNICEF et ONUSIDA, 2011). Ils sont impliqués dans la transmission sexuelle du VIH-1 et représentent les seules souches présentes au début de l'infection.
La transmission du VIH-1 d'un homme à une femme lors d'une pénétration vaginale est plus efficace que d'une femme à un homme (Ray et Quinn, 2000). Au niveau de l'épithélium multistratifié, l'infection peut se produire par des cellules de Langerhans insérées dans l'épithélium muqueux, qui capturent le virus dans la lumière via Langerin et le transmettent aux LT sous-muqueuses (Shattock & Moore, 2003). La muqueuse du vagin et du col de l'utérus est constituée d'une membrane muqueuse et de muscles lisses.
Les spermatozoïdes comprennent les spermatozoïdes, les lymphocytes T, les macrophages, les cellules germinales immatures et les cellules détachées de l'épithélium des canaux excréteurs et de l'urètre (Fung et al., 2004 ; Pilch et al., 2006). Des études ultérieures démontrent la présence dans le sperme d'un facteur stimulant l'infection virale (SEVI), constitué de fragments de phosphatase acide prostatique (PAP) (PAP248-286) associés à des fibrilles amyloïdes, qui améliorent l'attachement des virus aux cellules cibles (Münch et al.., 2007). La séménogéline, issue des vésicules séminales, peut également s'agréger en fibrilles amyloïdes et favoriser l'infection des cellules par le VIH (Roan et al., 2010).
Un des projets de l'équipe « Environnement Viral et Chimique et Reproduction » de l'unité Inserm U1085 consiste à identifier dans le LS de patients infectés par le VIH-1 des protéines ou des peptides qui affecteront l'infectiosité du virus.
Liquide séminal
Le virus
Infection et traitement des explants avec le virus et le LS
Les tissus fixés au paraformaldéhyde obtenus sont déshydratés par une série de bains d'alcool de titre croissant d'alcool à 70° (12 heures), 90° (5 heures) et 100° (2 heures), puis de Butanol (11 heures), suivis de avec de la paraffine. (plus de 2 heures).
Immunohistochimie et comptage des cellules
Les coupes ont été observées au microscope et les images ont été prises numériquement avec un objectif x20 ou x40.
Immunofluorescence
Suivi de la morphologie des tissus au cours de la culture
Caractérisation et quantification des cellules cibles du VIH-1
Au jour 7 des tissus, le marquage immunohistochimique des cellules CD4+ et par immunofluorescence des cellules CD3+ et CD163+ (Figure 8) montrent que les cellules cibles sont toujours présentes dans le tissu. Le nombre de cellules a été réduit à la surface de la coupe (3 coupes/explant avec une moyenne de 8,4 mm2/section pour les explants cervicaux ou une moyenne de 4,14 mm2/section pour les explants colorectaux). Ces résultats suggèrent qu'il existe une grande variabilité inter-patients concernant le nombre de cellules immunitaires présentes dans les tissus, mais également concernant la proportion relative des différents types cellulaires (lymphocytes, monocytes/macrophages).
Au niveau de la muqueuse (Figure 9b), des cellules CD3+ ont été observées chez un seul des 4 patients, mais en quantités significatives (colo C = 4,68c/mm2). Des cellules CD4+ ont également pu être observées dans la muqueuse de ce patient (couleur C = 0,95c/mm2) et en quantités comparables, compte tenu des écarts par rapport à la moyenne, dans le. Les cellules CD163+ sont présentes dans la muqueuse de 3 explants (couleur B, couleur C, couleur D) en quantités comparables à la quantité de CD4+ précédemment observée (0,36c/mm2, 0,34c/mm2 et 1,22c/mm2, respectivement). mm2).
Au niveau de la sous-muqueuse (Figure 8c), nous constatons à nouveau une grande différence dans le nombre de cellules immunitaires présentes dans les tissus entre les patients. Tout d’abord, nous notons que le nombre de cellules CD4+ dans les tissus de l’exocol au jour 7 (n=2 ; C, D) est inférieur au nombre moyen de cellules CD4+ dans les tissus au jour 0 (n=3). La présence de cellules cibles ayant été démontrée dans les tissus colorectaux et cervicaux, nous avons souhaité confirmer l'infection des tissus par immunofluorescence (précédemment démontrée par le dosage de la protéine virale p24 dans les surnageants de culture).
Le marquage de la protéine virale p24 dans les explants cervicaux a révélé la présence de cellules infectées (Figure 10). L'explant exocervical C représente à la fois les cellules CD3+ infectées et les cellules CD163+ infectées, tandis que l'explant exocervical D représente uniquement les cellules CD163 infectées. Les cellules infectées sont assez rares ou absentes dans certains explants exocervicaux, alors que des cellules cibles CD3+ et CD163+ sont présentes.
Quant aux explants colorectaux, aucune cellule infectée n’a pu être détectée, même si, comme précédemment, des cellules CD3+ ou CD163+ ont été trouvées par immunohistochimie. Comment expliquez-vous que le nombre de cellules CD4+ soit supérieur au nombre de cellules CD3+ ? Les expériences réalisées ne permettent pas de conclure sur un effet du LS conjugué au virus sur le maintien des cellules cibles CD4+ en raison du faible nombre d'explants analysés.
En conclusion, ce rapport confirme la présence de cellules cibles du VIH-1 (lymphocytes T et macrophages) dans les explants du côlon et de l'exocervix. Il est également prévu d'étudier les marqueurs d'activation (HLA-DR et CD69) des cellules cibles et d'analyser l'effet de différentes concentrations de liquide séminal sur les cellules cibles des tissus colorectaux et cervicaux. 2005). A gauche, épithélium monostratifié a) infection directe des cellules épithéliales ; b) transcytose à travers des cellules épithéliales et/ou des cellules M spécialisées ; c) transmigration de cellules infectées du donneur.
Les résultats représentent la moyenne +/-SEM des comptages effectués sur 3 coupes par tissu, soit. 8,4 mm2/section pour les explants cervicaux ou en moyenne 4,14 mm2/section pour les explants colorectaux (a : nombre de cellules dans l'exocol à J0 ; b : nombre de cellules dans la muqueuse colorectale à J0 ; c : nombre de cellules dans l'explantation colorectale sous-muqueuse à J0 ; d : nombre de cellules de l'exocol à J7).
