OAXACA
30,31 AGOSTO 1° SEPTIEMBRE 2023
SOBRE CONSERVACIÓN Y UTILIZACIÓN DE RECURSOS ZOOGENÉTICOS
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a Ecole Nationale Vétérinaire de Tolouse Léa Marin. Email:[email protected] bUniversidad Autónoma de Yucatán José Manuel Mukul- Yerves. https://orcid.org/https://orcid.org/0009-0005-6808-4217, Email: [email protected]; Jesús Ricardo Aké-Villanueva.
https://orcid.org/https://orcid.org/0000-0002-4125-3413, Email: [email protected].
* Autor de Correspondencia: Email: [email protected]
Resultados preliminares sobre la viabilidad y evaluación del semen de Pecarí de collar (Pecari tajacu) conservado en frio a diferentes tiempos de respuesta.
Preliminary results on the viability and evaluation of collared peccary (Pecari tajacu) semen cold preserved at different response times.
Lea Marin
a, José Manuel Mukul-Yerves
b,Jesus Ricardo Aké-Villanueva*, José Alberto Rosado-Aguilar
b.
Abstract:
The viability of sperm cells kept refrigerated at 4°C was evaluated using skim milk and Saline solution as diluents. 7 semen samples were obtained by electroejaculation by P. tajacu, each fresh sample was evaluated were the volume obtained was of 0.88 ± 0.52 ml. volume, sperm concentration of 493 x 106 and 82% motility. The samples were divided and diluted 1:10 with physiological saline solution and skimmed milk, where they were evaluated an hour and a half after their dilution, and every 24 hours for three days.
The best results were obtained with skim milk, where a gradual decrease from 82% to 15.83% was observed up to 72 hours, while with the saline solution the decrease in the percentage of motility was abrupt, going from 82% to 60.71% at an hour and a half of its dilution and at 24 hours 0.29% of motility, after this sampling no motile cells were found.
Keywords:
Reproduction, diluents, spermatozoids, testicles.
Resumen:
Se evaluó la viabilidad de las células espermáticas mantenidas en refrigeración a 4°C utilizando leche descremada y sol. Salina como diluyentes. Se obtuvieron 7 muestras de semen por electro eyaculación en la especie P. tajacu, se evaluó en fresco cada muestra y se reportan valores de 0.88 ± 0.52 ml. de volumen, concentración espermática de 493 x 106 y 82% de motilidad. Las muestras fueron fraccionadas y diluidas 1:10 con solución salina fisiológica y leche descremada, en donde se evaluaron a la hora y media después de su dilución, y cada 24 horas por tres días. Los mejores resultados se obtuvieron con la leche, donde se observó una disminución gradual del 82% al 15.83% hasta las 72 horas, mientras que con la solución salina la disminucion del porcentaje de motilidad fue abrupta, pasando de 82% a 60.71% a la hora y media de su dilución y a las 24 horas 0.29% de motilidad, después de este muestreo no se encontraron células motiles.
Palabras Clave:
Reproducción, diluyentes, espermatozoides, testículos.
1. Introducción
En la actualidad, en los animales domésticos productivos (bovinos, ovinos, cerdos y otros) la
obtención y conservación de semen es una práctica recurrida dentro de los programas reproductivos y de mejoramiento genetico, sin que se ponga en riesgo la salud de los animales principalmente por
transporte del ejemplar o su incorporación al nuevo lote de reproductores, por otra parte, en el caso de los animales silvestres es una opción para establecer programas de conservación de las especies y mejorar el flujo de genes entre las poblaciones [1].
El pecarí de collar (Pecari tajacu) es una de las múltiples especies que en la actualidad está considerada como parte de los sistemas de ganadería alternativa [2], sin embargo, al contar con pocas unidades de producción de esta especie, es necesario crear programas de intercambio de sementales o semen previamente evaluado para mantener poblaciones genéticamente sanas [3].
De manera exitosa se han realizado varios estudios para la obtención y evaluación de material seminal en esta especie [3,4,5], el siguiente paso lógico antes de implementar programas de inseminación artificial es la conservación de este material en medios comerciales o alternativos que aseguren su viabilidad durante tiempos establecidos, así como la evaluación de la viabilidad de las células espermáticas a diferentes tiempos de conservación.
El uso de semen congelado para la inseminación artificial es una práctica recurrida en sistemas productivos, sin embargo requiere material especializado como lo es el nitrógeno líquido, una alternativa es el uso de semen fresco o refrigerado a 5°C, el cual a través del uso de diluyentes y aditivos específicos, puede aplicarse pocos días después de su recolección [3,5,6].
Los diluyentes, además de aumentar el volumen del eyaculado (semen), aportan nutrientes que permiten el equilibrio del metabolismo en las células espermáticas, brindan energía, protección de cambios de temperatura, control del pH y la presión osmótica de las células espermáticas [6]. El presente estudio tiene como objetivo mostrar los resultados preliminares sobre métodos de obtención, evaluación y conservación de semen con diluyentes alternativos y la viabilidad de las células espermáticas a diferentes tiempos de evaluación.
2. Materiales y métodos
El trabajo se realizó en la UMA Xmatkuil (N 20.8633 – O 89.6142) con la clave de registro DFYFS-CR- IN- 0067-YUC/98, en Yucatán, México. El clima de la región es cálido subhúmedo, con lluvias en verano [8].
Se utilizaron 6 machos adultos de la especie P.
tajacu, entre los 5 y 8 años de edad con 20 kg de peso vivo en promedio, fueron inmovilizados con Zoletil [9] 100 a dosis de 4.5 mg/kg de peso vivo, vía intramuscular de acuerdo al protocolo descrito para la especie, fueron valorados clínicamente y se les tomaron las medidas testiculares [10], la electroestimulación se realizó de acuerdo al protocolo descrito para la especie, se utilizó una sonda para pequeños rumiantes con una fuente de poder de estímulos de control manual de la marca SPE (Standar Precision Electronics; Ejaculator System; Inc. Denver Colorado) [1,9,10,11]. Se realizaron varias series de 5 pulsos eléctricos, empezando con 25 mv (milivoltios) y aumentando hasta 250 mv. El semen fue recolectado en una bolsa para eyaculado limpia y estéril, donde se mantuvo a una temperatura aproximada de 36°C y protegido de la luz del sol [1,9,11,12].
Se analizó visualmente el color, consistencia y pureza del semen. La motilidad individual se evaluó colocando una gota de semen entre un porta y cubreobjetos y observando al microscopio con el lente de 40 X y se calificó en escala de 0-100 %. Se realizaron dos diluciones del eyaculado, usando como diluyente leche deslactosada light y solución salina fisiológica a relación de 1:1. Las muestras fueron almacenadas a 4ºC y evaluadas cada 24 horas después de su colecta hasta las 72 horas. se evaluó la motilidad individual espermática, con una micropipeta (30 µl) se tomó una muestra de cada dilución colocando cada una en un portaobjetos sobre una placa de calentamiento por 30 segundos a 37°C, a cada portaobjetos se le colocó un cubreobjetos para evitar la evaporación de la muestra [9,11,12].
Las muestras fueron observadas al microscopio con el lente de 40 X cada 24 horas para evaluar el % de motilidad individual. Los resultados se evaluaron mediante estadística descriptiva para obtener los valores promedio y su desviación estandar, asi
como los valores descriptivos de las muestras seminales en fresco.
3. Resultados
Se obtuvieron 7 muestras de semen de seis pecaríes, de las cuales al examinarlas en fresco los valores promedio obtenidos fueron de 0.88 ± 0.52 ml de volumen total del eyaculado, una concentración espermática de 493 x 106 y 82% de motilidad en promedio. Entre las características del aspecto de la muestra la más frecuente fue la cremosa, seguida de la gel-acuosa y la lechosa opalescente.
De las medidas testiculares el valor promedio para el testículo derecho fue de 7.83 ± 1.57 cm de largo y 4.42 ± 2.17cm de ancho, mientras que para el testículo derecho el largo promedio fue de 7.83 ± 1.37 y 4.50 ± 1.18cm de ancho.
El porcentaje de motilidad individual promedio evaluado una hora y media después de su dilución con solución salina fue de 60.71%, y de 0.29 % a las 24 horas de su dilución, posteriormente no se encontraron células vivas con este diluyente.
Para el caso de la dilución con leche descremada el valor promedio una hora y media después fue de 79.29%, y de 37.86%, 21.67% y 15.83% a las 24, 48 y 72 horas posterior a su dilución y almacenamiento en frio.
4. Discusión
En estudios previos se reportan valores de la evaluación en fresco de las principales características seminales para la especie P. tajacu, para el caso de volumen total del eyaculado en Brasil se han obtenido eyaculados de 1.9 + 0.2 ml [13], mientras que en México 0.96 + 0.98 ml [9] y aunque aparentemente está por debajo de ambos reportes, si consideramos los rangos de las desviaciones estándar, el valor encontrado es muy próximo a los reportes en México. En cuanto a la concentración esta es menor a lo reportado, 537.04 x 106 en México [9] y 439 x 106 en Brasil [13]. Algunos reportes mencionan que la variación en los volúmenes y concentración espermatica del eyaculado
responden a factores ambientales, del individuo y su actividad reproductiva, por lo que es necesario considerar el hecho de que los machos de este estudio estaban en contacto directo con hembras adultas en etapa reproductiva por lo que su actividad sexual puede ser determinante en los valores presentados. Por último la concentración de los espermatozoides por ml evaluado se encuentran dentro de los rangos reportados para esta especie que van desde 62.08 al 97.5 % [9,11,13,14].
Las tallas testiculares de los ejemplares muestreados estan dentro de los márgenes reportados de las tallas testiculares de pecaríes en Brasil donde el testículo derecho midio en promedio 4.36 ± 0.38 cm de largo y 2.74 ± 0.27 de ancho y el testículo izquierdo 4.19 ± 0.36 cm y 2.68 ± 0.31 cm de largo y ancho respectivamente, mientras que en México los valores reportados para esta especie son de 4.458 ± 1.25 cm de largo y 3.052 ± 0.97 cm de ancho para el testículo derecho y el testículo izquierdo 4.358 ± 0.80 cm de largo y 3.03 ± 0.28 cm de ancho [9,15], si bien las tallas de los ejemplares en este estudio son altas se debe considerar la edad del ejemplar, su actividad reproductiva y sobre todo la cantidad de ejemplares medidos ya que en este caso únicamente se muestrearon 6 ejemplares mientras que en los reporte mencionados son poblaciones tres veces mayor al de este estudio.
Las diluciones del semen obtenido tuvieron comportamientos muy diferentes de acuerdo al diluyente utilizado, la forma de evaluar este comportamiento fue mediante la evaluación del porcentaje de motilidad de las células a diferentes tiempos, en el caso de la solución salina la motilidad promedio obtenida declino de un 82% promedio a 60.71% a una hora con treinta minutos, a las primeras 24 horas declino el porcentaje de células motiles a 0.29% en promedio y posterior a esta lectura no hubo células vivas para determinar este indicador. Para el caso de las muestras con diluyente leche, el comportamiento de las células vivas fue completamente diferente, en donde los porcentajes promedio, a pesar de ir decreciento, la muerte de las células no fue tan abrupta como en el caso del diluyentente en solución Salina, a la hora y media después de la dilución el porcentaje
disminuyó de 82 % a 79.29 %, a las 24 horas 37.86%, y consecutivamente 21.67% y 15.83% a las 48 y 72 horas después, en un estudio donde se evalúa la leche como diluyente de semen para la conservación de semen refrigerado se menciona que uno de los efectos benéficos de la leche como medio diluyente es la capacidad de contener nutrientes, estabiliza el pH óptimo de las celas células provocando menos muerte por ruptura de la membrana del acrosoma, entre otros factores, de tal forma que provee un medio rico y estable para la sobrevivencia de los espermatozoides en este medio [16] la reducción gradual de la temperatura hasta los 4ºC reduce el metabolismo de las celulas, manteniendo las reservas energéticas dentro del espermatozoide, por lo que el uso de la leche actuar no solo como un medio que provee nutrientes sino también actua como un amortizado durante la reducción del metabolismo de la celula espermática [14,16], lo cual se corrobora con células vivas incluso hasta las 72 horas después de su dilución.
5. Conclusiones
El uso de diluyentes alternativos para la conservación en frio de material seminal de pecaríes de collar es viable. El mejor diluyente de esta prueba fue la lecha descremada permitiendo encontrar porcentajes de motilidad del 15.83 % hasta las 72 horas mantenido en refrigeración a 4ºC.
6. Referencias
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