Extractos de plantas con actividad inmunoestimulante administrados por vía oral a tilapia, porcentaje de inclusión en la dieta, tiempo de exposición e incremento de indicadores de respuesta inmune. 20 bioactivos (Hernández-Garibay et al, 2011) que pueden tener un efecto modulador sobre la respuesta del sistema inmunológico de los organismos.
HIPÓTESIS
OBJETIVOS
Experimento de Inmunoestimulación
Las instalaciones y equipos de la sala de bioensayo fueron lavados y desinfectados como se describe en el Apéndice 2. 540 peces, 36 peces por tanque, se dividió en 5 tratamientos por triplicado, los cuales se distribuyeron al azar. El sistema de tanques utilizado fue de circulación cerrada con reposiciones del 20% del volumen total de cada tanque cada tres días.
El agua se obtenía de la red municipal y se decloraba durante 24 horas mediante aireación en un depósito y luego se bombeaba a los tanques. La aireación del sistema se mantuvo continuamente y el 20% del volumen total de agua se reemplazó cada 48 horas en todos los tanques. Y el amonio se determinó después de 72 horas sin cambio de agua para asegurar que bajo este manejo del sistema, los niveles se mantuvieran por debajo de los límites máximos para la especie.
Química del Extracto
Experimento de Inmunoestimulación
Química del Extracto
Hematología y Sistema Inmune
El hematocrito se midió con tubos capilares heparinizados, los cuales se colocaron durante 10 minutos en una centrífuga de microhematocrito (SOL-BAT P600, México, DF, México). se reportó como porcentaje. La hemoglobina de los glóbulos rojos se analizó mediante el método colorimétrico de cianometahemoglobina (con reactivo Mex Lab) según las instrucciones del fabricante y para medir la concentración se utilizó un espectrofotómetro (UV-1800, Shimadzu) a una longitud de onda de 540 nm, el resultado se reportó en g. .dL-1. La proteína sérica total y la albúmina se determinaron mediante colorimetría basada en Biuret y se utilizó el kit de prueba marca Mex Lab, siguiendo las instrucciones del fabricante.
Para medir la concentración se utilizó un espectrofotómetro (UV-1800, Shimadzu) a una longitud de onda de 545 y 620 nm respectivamente, la globulina se obtuvo restando la albúmina a la proteína sérica total, los resultados están en g. dL- informó. 1. La actividad fagocítica se determinó mediante la técnica de fagocitosis utilizando microesferas de látex y los resultados se expresaron como porcentaje.
Crecimiento
En caso de rechazar H0 que las k muestras fueran extraídas de la misma población, se utilizó una prueba de comparación múltiple para determinar específicamente diferencias significativas entre cada una de las medias. Los porcentajes en masa calculados de cada elemento de la molécula representan valores teóricos derivados de la composición química de la harina U. Si bien el contenido de proteína de la harina es del 20% del peso seco, esto explica la proporción de intervención de nitrógeno en la muestra analizada. .
Los porcentajes calculados de peso en la molécula representan el peso de cada elemento en la sustancia, estos valores se obtienen de la estructura de los disacáridos más importantes que se encuentran en el ulvan, este grupo de disacáridos contiene ácidos urónicos (ácido glucurónico y ácido idúrico) los cuales se forman con sulfato ulvanobiurónico tipo A (A3s) y tipo B (B3s), ambos fueron descritos por Lahaye (2001). Ulvan se aisló de otras especies de Ulva (U. Los porcentajes en peso observados de cada elemento en la molécula) se obtuvieron del análisis elemental de la muestra de extracto de U. El contenido de carbono, hidrógeno y nitrógeno de la muestra de extracto coincide con el contenido calculado. del ulvan, indicando que las especies de polisacáridos reportadas por Lahaye (2001) se obtuvieron con un alto grado de pureza.
Si bien el porcentaje observado de intervención de azufre en EE.UU.
Espectroscopia de infrarrojo por Transformada de Fourier (FTIR)
Generalmente se observa que el contenido de carbono es mucho menor en la muestra de extracto (Tabla 9) en comparación con la harina U. Además, hay una banda en 1.634 cm-1 que es específica de los grupos carboxilo presentes, y también se encuentra la banda ancha característica de los grupos sulfato en 1.084 cm-1. Estas bandas son las más importantes y representativas para la identificación de los polisacáridos en la muestra.
Además, se observa que la banda de carboxilo se divide y se desplaza a una frecuencia vibratoria de 1729 y 1623 cm-1, debido a la eliminación de celulosa y polisacáridos estructurales que contienen otros tipos de carboxilo que también participaron en las vibraciones ocurridas. el espectro FTIR de la harina. Esto es consistente con la banda observada a 847 cm-1 en el FTIR realizado en el extracto de U. clathrata en este estudio (b). A 598 cm-1 se observa una banda de intensidad media perteneciente a una vibración δ del enlace S-O-Na (Nakamoto, 1986). Este grupo funcional está presente en la fórmula química de los principales disacáridos que forman los ácidos ulvano, ulvanobiurónico. y ulvanobiosis (Lahaye, 2001).
33 Con base en los hallazgos de FTIR del extracto de U.clathrata, se puede concluir que de la harina se aislaron polisacáridos similares al ulvan, que se ha informado en otras especies de ulva.
Modelos Tridimensionales de los Disacáridos Obtenidos en el Extracto
Estos modelos muestran que la estructura del monosacárido 1 de todos los polisacáridos es la misma. Las diferencias observadas en la estructura de cada uno de los disacáridos son importantes porque al tener diferentes naturalezas magnéticas es posible identificarlos mediante técnicas como la resonancia magnética nuclear (RMN). Los patrones de estructuras presentes en el extracto obtenido son un gran apoyo para la asignación y comprensión de señales de RMN.
Resonancia Magnética Nuclear del Extracto (RMN)
La tabla muestra que casi todos los protones se encuentran en la misma región y que experimentalmente solo se observa un multiplete en el espectro (Figura 6). Esto se debe a que los protones que aparecen en esa región tienen fuertes acoplamientos entre ellos, además de que la rigidez y la naturaleza de los sustituyentes hacen que la relajación de la red de espín sea más lenta por lo que las señales se vuelven más amplias. Los protones de los grupos alcohol en los disacáridos no se observan porque son reemplazados por deuterio en el agua deuterada utilizada como diluyente en la técnica.
El protón ácido no se observa debido a la mala solubilidad del extracto en agua deuterada, lo que imposibilitó su detección en el dispositivo (5 mg en 0,6 mL D2O). Las diferencias pueden deberse a diferencias en los equipos, sin embargo aparecen en regiones que corresponden a la naturaleza magnética del protón estudiado. Como se mencionó anteriormente, el fragmento de ramnosa se encuentra sin cambios en los cuatro disacáridos diferentes, por lo que las señales del protón metilo y del protón unido al carbono sustituido con sulfato se encuentran con relativa mayor intensidad, ya que la intensidad también está relacionada con la concentración.
Parámetros de Calidad de Agua
Hematología y Sistema Inmune
Algunos estudios sugieren que la disminución en el porcentaje de HTC puede estar relacionada con el estrés por falta o cambio de alimentos (Yue y Zhou 2008; Affonso et al., 2002). La concentración de hemoglobina en sangre se mantuvo por encima de los 7g.dL-1, lo cual es un indicador de buena salud de los organismos y coincide con los valores reportados por Tran-Duy (2008); Sahan y Duman (2008); Bittencourt et al. 2003) y Hahn-von-hessberg y Grajales-Quintero (2011) para las mismas especies de peces y condiciones de cultivo comparables. El recuento de leucocitos del tratamiento control no mostró diferencias significativas durante el período experimental (P<0,05) y se mantuvo entre 17.000 y 22.000 células.mm³, lo que concuerda con lo reportado para O.niloticus sano mantenido en condiciones de cultivo similares. del presente estudio (Ghiraldelli et al., 2006; Guo et al., 2010; Hahn-von-hessberg y Grajales-Quintero 2011).
El número de glóbulos blancos en el tratamiento con L 2% el día 30 fue significativamente mayor en comparación con el control (P<0,05), lo que fue observado por El-Boshy et al en la misma cepa a partir del día 21 de alimentación con 1% S. cerevisiae. . El aumento de leucocitos con el tratamiento con UE se atribuye a los compuestos de sulfato presentes en el extracto, que son reconocidos por el receptor de la membrana leucocitaria (Castro et al., 2006). De manera similar, se demostró que la administración dietética de alginato de sodio al 0,1 y 0,2% aumenta la fagocitosis en Epinephelus fuscoguttatus (Chiu et al., 2008).
Sin embargo, el contenido de proteína sérica total, globulina (Figura 14) y albúmina (Figura 15) en el presente estudio no mostró diferencias significativas entre tratamientos ni entre días experimentales (P<0.05), resultados observados por Bagni et. Anguila. 2005) que administraron Macrogard (que contiene 0,1% de β-glucano derivado de la pared).
Crecimiento
En la Figura 11 se observa una tendencia a la reducción de leucocitos a partir del día 45, la cual se enfatiza con la suspensión de la administración del extracto. Sin embargo, en el día 75, todavía es posible observar el efecto de EU y L en los valores altos de WBC, ya que todavía es significativamente diferente del control. Los resultados de TCA y TCE se muestran en la Figura 16, mientras que los de TEA se muestran en la Figura 17.
El aumento de peso diario de los alevines de tilapia aumentó después de 90 días de suplementación con clatrato de U al 0,1% de la ración diaria de alimento. Los resultados aclaran el potencial del extracto de U.clathrata para activar algunos indicadores de la respuesta inmune innata en la tilapia y especialmente en las condiciones inmunosupresoras esperadas en las piscifactorías, como el transporte, el intercambio, la biometría, los cambios de temperatura y el manejo de poblaciones reproductoras. Parámetros hematológicos de tilapia del Nilo (Oreochromis niloticus, Linnaeus 1757) con un peso entre 250 g y 350 g, en el Centro Experimental de Peces de la Universidad de Caldas Parámetros hematológicos de tilapia del Nilo (Oreochromis niloticus, Linnae. 2011). La influencia de los productos vegetales en el sistema inmunológico innato y adaptativo de peces y mariscos de cultivo.
Extracción de polisacáridos sulfatados solubles en agua de la pared celular de Ulva clathrata utilizando un medio ácido. Tomar la muestra con la micropipeta y desechar las primeras gotas de la solución para posteriormente llenar la cámara de Neu-bahuer. Procedimiento para preparar 1 L de Solución de Natt-Herrick (1952) Mezclar las sales en el orden indicado anteriormente en un matraz.
