Ramirez-Armendariz K S_MC_2008.pdf - Repositorio CIAD

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CENTRO DE INVESTIGACIÓN EN ALIMENTACIÓN Y DESARROLL0

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A . C.

Evaluación del efecto causado por modificaciones químicas y sustitución de aminoácidos en la actividad del péptido de

señalización SKPDT de Bacillus thuringiensis Por

Karla Susana Ramírez Armendáriz

'. .

Como requisito parcial para obtener el grado de Maestria en Ciencias

Hermosillo, Sonora Diciembre de 2008

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RESUMEN

Bacillus thuringiensis (Bt) es una bacteria gram-positiva (Gram+) que durante su proceso de esporulación produce δ-endotoxinas, las cuales son de naturaleza proteica y resultan tóxicas para las larvas de varios insectos. Estas proteínas forman un cristal paraesporal y también se denominan proteínas Cry. En B. subtilis (Bs) la regulación de los genes de inicio de esporulación es mediado por un sistema multicomponente de transducción de señales, el phosphorelay; en el cual participan péptidos de señalización. Mientras que en Bt se han identificado varios péptidos de señalización relacionados con la regulación de genes que codifican para factores extracelulares de virulencia. Sin embargo, a la fecha sólo se ha identificado uno relacionado con la regulación del proceso de esporulación, el pentapéptido SKPDT.

En varios estudios se ha demostrado que la actividad y especificidad de los péptidos de señalización es afectada por modificaciones en sus secuencias. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto ocasionado por sustituciones con α y β-Alaninas en la secuencia de SKPDT, así como el de modificaciones químicas en su extremo amino terminal, sobre la expresión de una fusión de los promotores del gen cry1Aa de Bt con el gen reportero LacZ. Se determinó que la segunda y quinta posición son indispensables para que SKPDT sea funcional en la célula. Por otra parte, una versión de SKPDT modificada con Biotina y una secuencia espaciadora de 3 glicinas entre la Biotina y el péptido, se comportó igual que SKPDT sin

modificar. Modificaciones con Metionina como aminoácido inicial tanto en un

pentapéptido como en un hexapéptido, redujeron significativamente la capacidad de estimular la expresión de la fusión cry1Aa-LacZ. Por lo tanto, modificaciones

químicas en la secuencia del péptido de señalización SKPDT afectan su capacidad de estimular la expresión del gen cry1Aa en Bacillus thuringiensis, debido

probablemente a que interfieren en la afinidad de las interacciones que tiene el péptido con su proteína receptora.

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