Realizó sus estudios de pregrado en la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Autónoma de Nuevo León. Trabajó durante dos años como instructor de laboratorio en el laboratorio de biología de la misma facultad. Actualmente cursa el Doctorado en horticultura en el Departamento de Fitomejoramiento de la Universidad Autónoma de Chapingo.
88 3 Respuesta a la expresión de GUS en hojas de plantas de frijol. obtenido a partir de semillas de plantas bombardeadas con ADN plasmídico y regeneradas a partir de las variedades 'Flor de frijol'. El tipo y concentración de reguladores del crecimiento son elementos clave para determinar la vía morfológica de la regeneración in vitro de P. Sin embargo, la inducción de callo en el sitio de la herida (hipocotilo) debido a la presencia de citoquininas bloquea la formación de raíces y aumenta la producción. de compuestos fenólicos, que provocan la muerte del tejido por oxidación (Arnaldos et al., 2001).
REVISIÓN DE LITERATURA
El cultivo de tejidos en frijol
Regeneración in vitro
- El cultivo de meristemos y la regeneración a través de
- Factores que afectan la regeneración a través de Organogénesis
Desde entonces, las referencias sobre la regeneración de plantas a partir de callos en especies de Phaseolus han sido limitadas. Kueneman (1976), Herselman y Mienie (1995) y Grum et al. (1995) informaron resultados preliminares sobre la regeneración de cultivos de meristemas en frijol. 1998), quienes desarrollaron procedimientos para la producción de semillas libres de patógenos. La regeneración del frijol vía organogénesis a partir de meristemas apicales transformados por el método biobalístico fue obtenida por Aragão y Rech (1997).
La capacidad regenerativa depende tanto del genotipo como del estado fisiológico del explante, la especialización tisular y celular del cultivo y las condiciones del cultivo (Jacobsen, 1991; Mohamed y Coyne, 1996; Zhang et al., 1997). En la mayoría de los casos, la regeneración fue baja incluso con el uso de algunos aditivos como el extracto de semilla (Crocomo et al., 1976). En este sentido Kartha et al. 1981) promovieron el desarrollo de yemas a partir de explantes de meristemas con 10 μM de BAP (2,25 mg litro-1), mientras que la regeneración de las plantas ocurrió con una frecuencia del 73 % cuando los meristemas se cultivaron en 1 μM NAA (0,2 mg litro-1).
Transformación genética
- Bombardeo de micropartículas
Los efectos del genotipo sobre la capacidad regenerativa, así como sobre la reproducibilidad, han sido factores limitantes (Delgado-Sánchez et al., 2006; mediante bombardeo de partículas se logró una transformación estable por hasta cinco generaciones para el gen bar, GUS y el gen de la proteína de la piel del geminivirus del mosaico del grano de oro (Russell et al., 1993) La eficiencia de la transformación mediante bombardeo de micropartículas se ha incrementado mediante el uso del recubrimiento de las partículas con espermidina cálcica, una cantidad baja de partículas de oro, la concentración de ADN, la distancia entre la cámara de descarga y la pantalla de contención y el vacío (Aragão et al., 1993).
Las pruebas de campo de la progenie de una sola planta transgénica mostraron resistencia a este virus (Aragão y Faria, 2009; Pinheiro et al. desarrollaron un enfoque para transferir un conjunto de transgenes como fragmentos de ADN, en lugar del plásmido completo en P. Esto Es sin duda un paso importante en la adopción de la bioseguridad de los transgénicos P. Transgenes incluyó un marcador GUS que confirmó visualmente el evento transgénico, una línea marcadora seleccionable (resistencia a herbicidas) utilizada para la selección in vitro de cultivos transgénicos y confirmó la resistencia de las plantas a los herbicidas Liberty. y una proteína abundante en la embriogénesis tardía de la cebada (HVA1) (Hordeum vulgare), que confiere resistencia a la sequía con un aumento correspondiente en la longitud de las raíces de las plantas transgénicas (Kwapata et al., 2012).
ORGANOGÉNESIS in vitro EN EJES EMBRIONALES DE
Por tanto, es necesario ajustar las condiciones de inducción del brote para cada variedad, o elegir la mejor según determinadas características y obtener su protocolo especial. La inducción de múltiples brotes mediante organogénesis directa está influenciada por la concentración del regulador. La evaluación del material se realizó tomando en cuenta los siguientes parámetros: el número de brotes por explante, la longitud del explante y la apariencia de la raíz o callo en la zona de corte del hipocótilo, debiendo tomarse únicamente los promedios de los rangos dentro del se obtuvieron los tratamientos.
La variedad BAY también se incluyó en este estudio porque produjo el mayor número de brotes por planta. explante. Los resultados en la inducción de múltiples brotes para BAY con diferentes concentraciones indicaron que entre mg·litro-1 el mayor número de brotes por explante obtenido, mientras que el resto de las zonas de tratamiento fueron rebrotados o menos. Inducción de múltiples brotes vía organogénesis directa, longitud de epicótilo y desarrollo radicular (morfogénesis) o callo (desdiferenciación) en el hipocótilo de ejes embrionarios de frijol común, P.
Los explantes con mayor número de brotes mostraron una reducción en la longitud de entrenudos, mientras que en los explantes con menor número de brotes la longitud fue mayor, por lo que fue necesario buscar reducir la longitud. Los resultados obtenidos en medios con alta concentración de BAP (17.942 mg·litro-1) mostraron que fue necesario reducir la concentración a 1,8 mg·litro-1, lo que promovió un aumento de 3 a 4 brotes por día. explantar este segundo. escenario, sin. Sin embargo, el cultivo en medios con concentraciones de BAP (0.618 mg·litro-1) transferidos a medios con bajas concentraciones de BAP (0.0901 mg·litro-1) aumentó hasta 5 brotes más y se mantuvo el desarrollo de los explantes. Además, fue importante incluir TDZ en los medios de la primera etapa ya que tiene un efecto similar a la citoquinina en la inducción de procesos morfogenéticos y se ha recomendado ya que forma 2 o 3 veces más brotes que BAP (Mohamed et al., 1992). , lo que permitiría incrementar el número de focos promovidos por BAP en la Fase I.
Además, fue factible manejar el estadio II con una reducción en la concentración de citoquininas (BAP), aumentando así el número de brotes y la frecuencia de regeneración. Los resultados obtenidos mostraron que la inducción de raíces en los brotes fue independiente del genotipo y de la concentración inicial de BAP en el medio inductor de brotes (MIB). Resultados obtenidos en la prueba de raíz de brotes inducidos en medio MSB5 suplementado con diferentes concentraciones de BAP o ANA en tres variedades de frijol.
Se encontró una relación directa entre la concentración de BAP y el número de brotes por explante; aumentar la concentración de citoquininas disminuye la longitud de los explantes.
OBTENCIÓN DE PLANTAS in vitro DE FRIJOL POR
Para promover el desarrollo de brotes a partir de las yemas o primordios del tallo obtenidos en la fase I (Figura 1 c, d, eyf), se eliminó el callo o la raíz de los explantes antes del subcultivo. En el Cuadro 1 se muestran los números de brotes por explante, por ápice y por óvulo de los tratamientos investigados. Al comparar ambos reguladores, la respuesta a la inducción de yemas fue menor a bajas concentraciones.
La formación de raíces previene la formación de callos y favorece el desarrollo de brotes, posiblemente por la producción de metabolitos en dicho órgano. La respuesta del resto de los tratamientos mostró una tendencia de disminución en la formación de raíces a medida que aumentó la concentración de TDZ, hasta 47.5% con 2.72 µM. De manera similar, la inducción de raíces en la variedad BAY fue solo del 54,5%, para el control.
El control en ausencia del regulador presentó un mínimo en la frecuencia de inducción de callo. Esto debe tenerse en cuenta ya que cuanto mayor es la concentración de TDZ, la inducción de brotes es directamente proporcional a la inducción de callos, lo que puede limitar o reducir el desarrollo de brotes en etapas posteriores. La longitud de la parte apical de los ejes embrionarios para la variedad FM sembrada en el medio sin regulador (MS0, como control) fue de 3.71 cm, se presentaron diferencias significativas en las respuestas a los tratamientos BAP y TDZ.
Efecto de diferentes tratamientos BAP y TDZ sobre el alargamiento medio de los ejes embrionarios de dos variedades de frijol. La longitud de la parte apical de los ejes embrionarios para la variedad BAY, sembrada en el medio sin reguladores (MS0, como control), fue de 2.14 cm, pero con BAP 0.40 µM fue de 2.52 cm, aunque no hubo diferencia significativa con la variedad BAY. testigo (MS0). La tendencia encontrada en el efecto de los reguladores sobre la longitud de la parte apical de los ejes embrionarios en la variante ʹFlor de Mayoʹ es consistente con lo reportado por Mohamed et al. 1992), esta respuesta fue similar para ambos supervisores.
En este trabajo no fue necesaria la inclusión de auxinas o giberelinas para el alargamiento de los entrenudos en los brotes. En la fase I, la inducción de raíces en la zona del hipocótilo de los ejes embrionarios cuando ocurrió se asoció con la ausencia de callo, lo que marca un límite para el desarrollo posterior de brotes que fueron inducidos en medios con alta concentración de citoquininas. En la etapa II o desarrollo de brotes, la mejor respuesta se obtuvo cuando los brotes se transfirieron a MSB5 suplementado con BAP en lugar de TDZ.
ENSAYOS DE TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE
Dagiti panagsubok iti tay-ak kadagiti kaputotan a naala manipud iti transgenic a mula ket nangipakita ti panagandur iti daytoy a virus ( Aragão ken Faria, 2009 ; Pinheiro et al., 2009 ). Dagiti banag a mangapektar iti apagbiit a panagiyebkas ti gene iti bean (Phaseolus vulgaris L.) babaen ti panagusar ti elektrikal a partikulo a mangpapardas. Dagiti transgenic a beans (Phaseolus vulgaris L.) a nainheniero a mangiyebkas kadagiti viral antisense RNA ket mangipakita kadagiti nataktak ken napaksuyan a sintoma ti bean golden mosaic geminivirus.
Expression of a methionine-rich storage albumin from Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K, lecythidaceae) in transgenic bean plants (Phaseolus vulgaris L., Fabaceae). Phytohormone interactions in the control of root growth and morphogenesis in cultivated Phaseolus vulgaris leaf explants. Efficient whole plant regeneration of common bean (Phaseolus vulgaris L.) using thin cell layer culture and silver nitrate.
2012 Genetic transformation of common bean (Phaseolus vulgaris L.) with the GUS color marker, grass herbicide resistance and barley (Hordeum vulgare) HVA1 drought tolerance genes. Early stages of somatic embryo differentiation from callus cells in liquid medium grown in bean (Phaseolus vulgaris L.). Susceptibility of dry bean (Phaseolus vulgaris L.) to Agrobacterium infection, cotyledon and hypocotyl tissue transformation.
Visualization of resistance responses in Phaseolus vulgaris using reporter-tagged clones of Common Bean mosaic virus. A comparative study of callus formation and plant regeneration from different explants of Phaseolus vulgaris and P. Effect of plant growth substances on axillary bud growth in cultivated stem segments of Phaseolus vulgaris L.
Regeneration possibilities of Bulgarian bean cultivars Plovdiv 11M and Dobrudjanski 7. Plant regeneration from embryo-derived callus in Phaseolus vulgaris L. common bean”) and Phaseolus acutifolius A.
