universidad de monterrey

UNIVERSIDAD DE MONTERREY

DIVISION DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

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UOIV&RSIDAD UE m•TEBIIEI

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e. 1

IJM

APLICACJON DE LA CROMA TOGRAFIA FLASH AL ESTUDIO QUIMICO DE LA Schaefferia cun~ifolia

RtPORTE Da.. PR~AMA DE EV ALUAOON ANAL QUE PRESENTA

a

^JJ..,ut(

^{-r .}

^{· CRISTINA GUADALUPE SIERRA BENA VIDES}

EN ^OPCION Al TITULO DE

LIC. EN QUIMICA CON ESPECIALIDAD EN QUIMICA INDUSTRIAL

MONTERREY. N. l., DICIEMBRE DE 1981

str13 5 9

BIBLIOTECA UNIVERSIDAD DE MOtHERRET

A la memoria de mi PADRE

SR. ALFONSO SIERRA CHAPA (Q.E.P.D.) quien dedicó toda su vida por nosotros y cuyo ejemplo de amor, rectitud, superación me han

servido para llegar a este día.

A mi MADRE

SRA. URSULA BENAVIDES DE SIERRA incansable guía y ejemplo por todas sus .virtudes.

A mis TIAS

Francisca, Josefina y Aída Sierra Ch.

y a mis HERMANOS

que siempre se preocuparon por mí.

De una manera especial a mi NOVIO LIC. ROGELIO GARCIA CASTILLO por su ayuda moral a lo largo de mi carrera.

Agradezco

al L.C.Q. Jesús A. Garza Gutiérrez por su interés durante la carrera y sus valiosas enseñanzas durante el desarrollo de mi Programa de - Evaluación Final.

A mis SINODALES:

L.C.Q. Jesús A. Garza Gutiérrez

L~Q.I. Miriam Montante Leal

Q.F.B. Maricela Ramírez Benavides

Al Ing. Aureliano García Fernández y a todos mis maestros por sus enseñanzas y consejos que fueron de gran ayuda.

Al Dr. Xorge A. Domínguez por su interés en la realización de este proyecto.

Agradezco a 1 a

FUNDACION MARTINEZ-SADA por su ayuda económica en toda mi carrera.

CAP. I

CAP. II

CAP. III

CAP. IV

I N D I C E

INTRODUCCION

MATERIALES Y METODOS

RESULTADOS

DISCUSION Y CONCLUSION ... .

RESUMEN

PAGINA No.

1

14

27

45

49

BIBLIOGRAFIA .. .. . .. .. . . . .. .. 50

INDICE DE TABLAS

TABLAS No.

1 Grupo de sesquiterpenalcoholes

2 Grupo de sesquiterpenalcaloides

3 Selección de columna

4 Cromatografía en capa delgada del

PAG~ No.

8

10

19

extracto hexánico soluble en MeOH 29

5 Secuencia de C. Flash del extrac-

to hexánico soluble en MeOH . ... • . 30

6 Secuencia de columna lfquida pequ!

~a del extracto hexánico insoluble

en MeOH . . . 35

7 Cromatografía en capa delgada del extracto hexánico insoluble en

MeOH . . . • . . . . . . 35

•

TABLAS No. PAG. No.

8 Secuencia de la columna flash del

. extracto metanólico de la raíz .. . 41

9 Cromatografía en capa delgada de los residuos del extracto metanó--

1 i co de 1 a raíz ... , . . . 42

INDICE DE FIGURAS

FIGURAS No. PAG. No.

1 Columna cromatográfica Flash .... 18

2 Esquema de la Cromatografía

Flash . . . ²¹

3 Espectro IR del compuesto

SCAEEH-4 (215-219) . . . • 33

4 Espectro IR del compuesto

SCAEEM-1 (186-187) • . . . • • • • • . 37

5 Espectro U. V. del compuesto

6

SCAEEM-1 ( 186-187) , . . • . . • . . • . • • 38

Espectro ^IR del compuesto

SCRAEM-1 (210) _ ...• •..••• 44

S. e.

AE RA EH EM e. e. d.

c.c.d.p.

V/V pf l. R.

u.v.

nm cm mm 1 t g ó gr ml

mg pulg min hr B A

INDICE DE CLAVES Y ABREVIATURAS

Shaefferia cuneifolia Aéreo

Raíz

Extracto hexánico Extracto metanólico

Cromatografía en capa delgada

Cromatografía en capa delgada preparativa Volumen sobre volumen

Punto de fusión Infrarrojo

Ultra violeta Nanómetros Centímetros Milímetros Litros Gramos Mililitros Miligramos Pulgadas Minutos Horas Benceno Acetona

e

A P I T U L O I I N T R O D U

e

C I O N

El interés por las plantas y los productos químicos que se pueden obtener de ellas existe desde épocas primiti- vas, siendo clasificadas empíricamente s~gan su utilidad:

ya sea como .material para construcción~ alimentación, decoración, vestido o también por sus propiedades medi- cinales y toxicológicas, que hoy en día son factores de suma importancia.

A través de los años se han ido mejorando las técnicas de obtención de los productos químicos naturales, debido

- 1 -

al gran auge que han tenido en el estudio de la quimotaxo nomía vegetal.

La Fitoquímica se define como el estudio químico de las plantas y tiene por objeto el aislamiento e identifica- ción de los principios activos de los vegetales. (1)

Tales principios activos son fácilmente separados por - técnicas cromatográficas y una de Jas más empleadas es la c~omatografía en columna líquida. Este método prese~

ta buenos resultados pero tiene por desventaja el tiempo de elución y el gasto de solventes.

La cromatografía ¹¹ Flash¹¹ (2), se presenta como una alte_!:.

nativa al uso de la cromatografía en columna líquida, ya que además de brindar buenos resultados, permite disminuir el tiempo de elución (a 1 o 3 horas) y la cantidad de - solventes a usar.

Este tipo de cromatografía permite la resolución de com- ponentes con un Rf 0.05 en c.c.d. Establecer y operar el sistema es muy económico y se pueden separar muestras de 0.01 - 10.0 g de peso en 10 a 15 min trabajando a una velocidad de 2 pulg/min. Para lograr esta velocidad se requiere aplicar una presión mediante wn fluído gaseoso como es el nitrógeno.

- 2 -

El objetivo del presente trabajo es montar la técnica de cromatografía "Flash" y apli_carla en la separación de los principios activos de la Schaefferia cuneifolia, qu~ per- tenece a la familia Celastraceae, la cual comprende alre- dedor de 53 géneros con 500 especfes. (LEMEE) (3).

E 1 -i n te r é-s -p o r 1 a fa m i 1 i a-

e

^{e 1 a-s t} r a e e a e , s e d e be- -q u p--..,.--·

.

----

contiene alcaloides y triterpenquinonas con acción cito- tóxica. (4), (5), (6).

Así, se ha encont_r.a.do que _la .Pristime..rj_na.,.-(antibiótic-o aislado de la Pristimera indica y P. grahamí) presenta a e ti v i dad e o n t r a 1 os o r g a n i s m os g r.a m- pos i t i vos , p a r ti e u - 1 armen te el Streptococcus vi ri di ans.

(7)

A su -vez =-se ·ha reportad·o el uso de -la raíz -de Mortonia greggii y M. palmeri en el tratamiento de enfermedades venéreas (8), como también la actividad inhibidora de tumores (in vitro, sobre células derivadas de un carci- noma humano de la nasofaringe) y antileucémica de los extractos alcohólicos de Maytenus ovatus y Gymnosporia wallichiana. {9),

(10).

Algunos de los compuestos químicos que se han encontrado en los distintos géneros son los siguientes:

(10)

- 3 -

Terpenos y Terpenoides:

r/

Terpenos pentacíclicos en los que podemos encontrar los siguientes grupos:

1.- Grupo lupano

Me

2.- Grupo oleanano

- 4 -

3.- Grupo fli'iedelano

4.- Grupo taraxerano

Celastroides

Me.

.. · coof!.

R = H R = M e

Celastrol pf ⁼ 205° C

Pristimerina pf = 219-220°C

- 5 -

Di s pe r m o q u i non a pf ⁼ 225-257°(

Maytenoquinona pf = 158-160°(

O Me oH

' / \ H

Me Afe

Di spermol pf= 164-166°( Di spermon pf ⁼ 263-265°(

- 6 -

Sesguiterpenos

1.- Grupo de sesquiterpenalcoholes. TABLA I

Me

- 7 -

AIBUOTEC U ~IVEr.SIOAD DE MONTERREY

.J

TABLA I.- Grupo de sesquiterpenalcoholes

C-1 C-2 C-3 C...,4 C..,6 C-8 C-9 C-15 C-15

Celorbicol

pf = 222-223°C -OH 2H 2H H -OH H -OH H H

Maytol

pf = 229-237°C -OH --OH -OH -OH -OH 2H -OH H -OH

Euonyminol

pf = 250°C --OH --OH -OH -OH -OH --OH ---OH -OH -OH

t~aytina

Amorfo ---OAc ---OAc 2H -OH -O A e 2H -ONic -O A e

Maytolina

Amorfo ---OAc ---OAc -OH -OH -O A e 2H -ONic -OAc

Maytolidina

pf = 128-132°C ---OAc ---OAc -O A e -OH -OBz 2H -ONic -OAc

Alcaloides

1.- Grupo de sesquiterpenalcaloides. TABLA II

.,

!.

JJ-

-o /-

' _•

.

: n-_•

^.

_r't

•

- 9 -

.o-. 1

,, ^~

TABLA II.- . Grupo de sesquiterpenalcaloides

0-1 0-1 0-6 0-9 0-8 0-15

A e A e H H A e Euozin pf = 288-289°C

A e H H A e A e 2,6 Bisdesacetileuonin pf =141°C

A e H A e A e A e 2-Desacetileuonin pf=135°C

A e A e H A e A e Neo-Euonin pf = 264-265°C

A e A e A e A e A e Euonilin pf = 1S0-158°C

A e A e A e A e A e Euonin pf = 184-190°C

A e A e H A e A e A e Neo-Euonymin pf = 259-262°C

A e A e A e A e A e A e Euonymin pf = 140-146°C

2.- Tetrahidro-isoquinolina y Tetrahidro-isoquinolin- alcaloides.

R

=

CH(Me)ET

R

=

_{CH 2CHMe2}

R = CH₂ph

3.- Spermidin alcaloides

-Me IJ 1¡

o

N

~II(Aie) 1

Frangulamin pf

=

267-279°C Franganin

Frangufolin

pf

=

240-245°C pf

=

235-245°C

R

=

H Maytenin

- 11 -

4.- Alcaloides macrocíclicos: Maytansinoide y Maytanside.

Estructura general de Maytansinoide

R1 R2

H H Maytans i no 1 pf = 173-174.5°C

Ac H Maytanacin pf = 234-23JOC

COOCHNe H Maytansin

MeN Ac

COCH Me H Maytanprin pf = 169-179°C

MeNCOEt

COCH Me H Maytanbutin pf = 170-171°C MeNCOCHMe

Et

COCH Me H Maytanualin pf =·175-176°C

MeNCOCH 2CH2Me2

- 12 -

'

y 1

Rl COCHMe MeNCOCHMe2 COCHMe

MeN-COCHMe2 COCHMe2

R

=

Me R = H

R2 OH

OCOMe

O COMe

Maysina· Nor-Maysina

- 13 -

Colubrifwl pf = 194-196°C .

Acetato de

Colubrinol pf =· 179-182°C

Maytanbutancina pf = 253-255°C

pf = 137-141°C pf = 187-188°C

C A P I ^{T U L} O II MATERIALES Y METODOS

2.1.) CLASIFICACION BOTANICA DE LA SCHAEFFERIA CUNEIFOLIA.

La clasificación botánica de la Schaefferia cuneifolia es la siguiente: (11), (12)

Reino - Vegetal

Familia - Celastraceae Género - Schaefferia

Especie - cuneifolia

2.2.) DESCRIPCION DE LA SCHAEFFERIA CUNEIFOLIA.

El género Schaefferia se encuentra comprendido por arbusto o árboles glabros, con najas alternas y --

- 14 -

faculadas, enteras, coriáceas sin estipulas, las flores son sésiles o pediceladas, dioicas; el cá- liz es tetralobulado, los pétalos son cuatro~ de color blanco; el fruto es una drupa seca o casi seca con dos cavidades. (11), (12), (13), (14).

La Schaefferia cuneifolia Gray,(13),(15), es un arbusto densamente ramificado, rígido y siempre verde que alcanza una altura de hasta 150 cm., las flores de esta especie son dioicas, sésiles o subsésiles, pequeñas y verdosas con cuatro péta- los oblongos y obtusos, de cáliz con 16bulos casi orbiculares, los estambres son cuatro y el ovario posee dos cavidades.

El fruto es una drupa roja subglobulosa aplanada y surcada de casi 12 mm de largo. Las hojas son simples cuneiformes y de ápice redondeado con una longitud de 6 a 12 mm.

La corteza del arbusto es gris, dura y lisa. Esta especie se distribuye desde el oeste al suroeste de Texas y el Norte de México, particularmente en el estado de Coahuila.

- 15 -

2.3.) RECOLECCION DE LA SCHAEFFERIA CUNEIFOLIA.

La recolección de la planta se llevó a cabo en el mes de septiembre de 1981, sobre el camino a·las Grutas de García en el municipio de Garza García, Estado de Nuevo León.

2.4.) PREPARACION DEL MATERIAL.

El material se dejó secar al sol y se molió en un molino tipo ¹¹Wiley^{11 •}

2.5.) SEPARACION DE LOS PRINCIPIOS ACTIVOS.

La separación de los principios activos de la ^pla~

ta se llevó a cabo mediante una extracción conti- nua del material seco y molido con disolventes de polaridad creciente (hexano, metanol). Se usaron extractores tipo ¹¹Soxhlet^{11 •} Las soluciones obte- nidas se evaporaron a sequedad en un rotavapor tipo ¹¹Flash¹¹ (Buchler Instruments) a baja tempe- ratura y presión reducida.

Los principios activos fueron s.epa radas por metó- dos cromatográficos: ( 2 ) ' ( 1 6 ) ' ( 1 7 ) ; ( 18).

A) Cromatografía ¹¹Flash¹¹

B) Cromatografía en capa delgada.

e) Cromatografía en columna líquida.

- 16 -

D) Cromatografía en capa delgada preparativa.

E) Métodos de recristalización.

A) Cromatografía "Flash".

La cromatografía flash es un método que per- mite la separación de componentes con un

Rf 0.05 en c.c.d. analítica obteniéndose una buena resolución en un tiempo máximo de 1 a 3 horas.

El aparato requerido para ésta técnica es una columna cromatográfica de vidrio de 18 pulg . de largo y 1 pulg de diámetro, provista de una válvula controladora de flujo (extremo inferior) acoplado en la parte superior con una conexión 24/40. (Fig. l)

El procedimiento detallado de la técnica de cromatografía flash es el siguiente: (Fig. 2) 1) El solvente se escoge de acuerdo a la me-

jor separación del componente deseado. Un Rf óptimo es de 0.35 se usa en esta técnica.

2) Se selecciona la columna de un diámetro apropiado. (TABLA III)

- 17 -

18"

Fig. 1 Columna Cromatográfica Flash.

TABLA II I , .. Selección de columna

DIAMETRO VOLUMEN MUESTRAS: VOLUMEN

DE COLUMNA DEL ELUENTE PESO TI PICO (mg) DE· LA FRACCION (mm) (m 1 ) Rf _> 0.2 Rf >

o.

1 TI PICA (m 1 )

-

^-

10 100 100 40 5

20 200 400 160 10

30 400 900 360 20

40 600 1600 600 30

50 1000 2500 1000 50

3) Se introduce en la parte baja de la columna un trozo pequeño de fibra de vidio, que cubra el fondo de la misma por las paredes

y el centro.

4) Enseguida se coloca una pequeña porción de algodón y posteriormente una capa de 3 mm de arena.

5) Se empaca la columna de 15 a 20 cm con Síli- ca gel tipo 60 de 70 a 200 mallas (Merk).

Para evitar los espacios vacíos la columna . se golpea ligeramente.

6) Una vez preparada la columna se agrega el solvente y la presión de N2 se utiliza para desalojar rápidamente todo el aire atrapado en la sílica gel.

7) Se agrega el extracto previamente mezclado con una cantidad suficiente de sílica gel hasta la formación de un sólido homogéneo.

8) Se eluye la columna con el solvente selec- cionado anteriormente aumentando la polari- dad en orden creciente hasta terminar la separación.

9) ·Las eluciones se llevan a cabo mediante una presión de N2 a una velocidad de flujo

- 20 -

vidrio

Fig. 2 Esquema de la Cromatografía Flash .

de ^~ pulg/min.

10) Las fracciones se recogen en tubos de vi- drio de 18 x 150 mm y son monitoreados por e. e. d.

B) Cromatografía en capa delgada.

La cromatografía en capa delgada es un método muy usado ·en la detecci6n de los principios ac- tivos. Para llevarla a cabo se prepar6 lo sig:

a) Placas: Se usaron placas de vidrio de las siguientes medidas: 2 x 10 cm; 5 x 10 cm;

y 20 ^x 10 cm.

b) Soporte: El soporte se prepara mezclando 50 g de sílica gel (Kieselgel G, Merck), en 100 ml. de agua destilada. Después de agitar la mezcla por unos segundos se apli- ca sobre la placa de vidrio con un aparato

·

11Desa9.a-Heidelberg^{11 •}

Las placas se activaron por calentamiento a 50-55°C en una estufa por espacio de 1

a 2 hrs.

e) Eluentes: Los eluentes que se usaron son:

benceno-acetona (9~1), (8:2), (7:3), V/V cloroformo-metanol (8:2), V/V

- 22 -

hexano-acetona (9:1), (8:2), V/V

d) Cubas: Se usaron frascos de 6 cm de diá- metro y 12 cm de altura, cubas de 21 . cm de ancho x 12 cm de altura y de 30 cm de ancho ^X 20 cm de altura según se necesita ron.

e) Agentes cromogénicos: Luz ultravioleta, solución de cloruro de Cobalto. (Reactivo 4)

C) Cromatografía en columna líquida.

La cromatografía en columna líquida es usada en operaciones de separación y purificación de los principios activos. Se utilizan de un diá metro y altura apropiados para el material a percolar. La relación de material percolado a fase estacionaria varía de 1/15 a 1/20.

La secuencia de eluentes utilizados fue:

hexano, hexano-acetona (9:1), (8:2), (7:3), V/V y acetona.

D) Cromatografía en capa delgada preparativa.

La cromatografía en capa delgada preparativa se usa para la separación de una mezcla de 2 o 3 compuestos en donde estos tengan entre sí

- 2 3 -

una separación de aproximadamente 1.5 cm en c.c.d.

Esta técnica es similar a la anterior, excepto que las placas usadas son de 20 cm de ancho x 20 cm de altura y el grosor de la capa de sí- lica de aproximadamente 5 mm.

E) Método de Recristalización.

Los métodos de recristalización tienen por ^obj~

to -la purificación de los compuestos después de percolarse en. la columna flash y se mencio- nan en los resultados dependiendo de las pro- piedades físicas y químicas de los principios activos .

2.6.) METODOS DE IDENTIFICACION.

En la identificación de los principios activos se utilizaron métodos físicos y químicos, entre los que se encuentran: punto de fusión, cromatografía comparativa en capa delgada; métodos espectroscó- picos tales como infrarrojo, ^y ultravioleta; ade- más de la preparación de derivados y pruebas quí- micas de clasificación.

- 24 -

2.7.) APARATOS EMPLEADOS EN LA TECNICA DE ANALISIS.

a) Punto de fusión.

Se utilizó un aparato Melt-Temp., para determi naciones en capilar cerrado y un aparato

Fisher,

b) Espectros de absorción en el Infrarojo. (19).

( 20)' ( 21), ( 22).

Se usó un Espestrofotómetro Bechman IR-33 y un Espectrofotómetro Beckman IR-4230.

e) Espectros de abso.rción en el U.V.-visible (21).

Se utilizó un aparato espectrofotómetro Beckman DB-GT.

2.8.) REACCIONES DE IDENTIFICACION.

a) Grupos oxidantes. (1), (23).

Prueba de permanganato de potasio.- Se disuel- ven 0.2 mg de la muestra en agua, acetona o metanol y se agrega gota a gota el reactivo 1 con agitacion hasta que la coloración púrpura persista. Si el color no cambia en un inter- valo de 30 a 60 seg. se deja reposar 5 min con agitación ocasional .

..

La prueba es positiva si se decoloran más de tres gotas del reactivo.

- 25 -

Prueba de Tollen•s.- En un tubo de ensayo se disuelven 5-10 mg de muestra en 5-8 gotas de piridina y se le añaden 4-6 gotas del reactivo 2 •

La prueba es positiva si se forma un espejo de plata.

b) Carbohidratos . (1), (24).

Prueba de Antrona.- A una o dos gotas de la muestra disuelta en agua, se le agrega 1 ml del

reactivo 3. La aparición de un anillo azul- verdoso en la interfase indica que la prueba

· es positiva.

e) Quinonas. (1).

Prueba de H2

so

_{4 .-} A 2 mg de la muestra se le agrega 1 gota de H2

so

₄. La prueba es positiva si aparece un precipitado rojo o púrpura.

- 26 -

R E A C T I V O S

R-1 Solución de Permanganato de potasio.

KMn04

Agua destilada

R-2 Reactivo de Tollen•s.

AgN0 3 al 10% Na OH al 10%

después se añade gota a gota

2 g 100 ml

5 ml 5 ml NH y OH redisolución del precipitado.

R-3 Reactivo de Antrona .

Antrona 2 g

100 ml

R-4 Solución de Cloruro de cobalto.

CoC1 2

Agua destilada

ZO g 400-500 ml

hasta 1 a

se le añaden poco a poco 100 ml de H2

so

₄ concen- trado, agitando continuamente; se termina aforando a 1 1-t con agua des ti 1 a da.

- 26a -

C A P I T U L O III R E S U L T A O O S

Los extractos que se trataron fueron los siguientes:

1.- Extracto hexánico de la parte aérea . 2.- Extracto metanólico de la parte aérea.

3.- Extracto metanólico de la raíz.

- 27 -

3.1.) EXTRACTO HEXANICO DE LA PARTE AEREA.

El extracto hexánico se reflujó en MeOH por espa- cio de 1 hr se dejó enfriar, apareciendo un preci- pitado de color verde oscuro que fué separado por filtración y lavado con metanol. El filtrado y las aguas de lavado fueron mezcl adas a sequedad obteniéndose 4 g de extracto hexánico.

El tratamiento con MeOH tiene por objeto, separar algunos hidrocarburos existentes en la planta y obtenerlos con mayor facilidad.

Se corrió una c.c.d. del extracto hexánico soluble en MeOH. TABLA IV

La secuencia de la columna flash del extracto

hexánico soluble en MeOH de Schaefferia Cuneifolia, se muestra en la TABLA V.

- 28 -

TABLA IV.- Cromatografía en capa delgada del extracto hexánico soluble en MeOH.

VISIBLE U. V. CoC1 2 Rf .

Amarilla Celeste Café 0.92

Amarilla Celeste Café 0.75

Verde Rosa Café 0.66

Ama ri 11 a Celeste Café-amarillento 0.48

Anaranjada Verde Café-amari 11 ento 0.40

Anaranjada Verde Café-amarillento 0.29

Anaranjada Verde Ocre 0.30

RESIDUO 1 2 3 4 5 6 7 8

TABLA V.- Secuencia de C. Flash del extracto hexántco soluble en MeOH.

FRACCION EL U ENTE OBSERVACION

1

-

^{8 Benceno} Residuo naranja

9

-

¹⁵ B.B-A (9:1)V/V Residuo amarillo

16

-

^{18 B-A (9:1)V/V} Residuo amarillo-verdoso 19

-

²⁴ B-A (9:1)V/V Residuo verdoso

25

-

⁴³ B-A (9:1),(8:2)V/V Residuo café-verdoso 44

-

⁴⁷ B-A (8:2) V/V Residuo café-verdoso 48

-

⁶⁷ B-A (8:2) ,(7:3)V/V Residuo café

67

-

^{77 Acetona} Residuo verde

3.1.1.) Purificación de los residuos.

Residuo 1

Al evaporarse dió un precipitado en forma de ·cris- tales de color amarillo que se filtraron y se lav~

ron con acetona. En el filtrado se iba formando más cantidad de precipitado el cual se volvió a filtrar.

El sólido reportó un pf

=

66°C y se le denominó SCAEEH-1 (66).

Residuo 2

Cuando se evaporó a temperatura ambiente dió un precipitado en pequeños cristales de color ama- rillo canario, que se filtraron y se lavaron con

·acetona. El filtrado y las aguas de lavado se ju~

taron y en el los apareció más precipitado, que a su vez se volvió a filtrar.

El precipitado reportó un pf ⁼ 66°C y se le deno- minó

SCAEEH-2 (66).

- 31 -

Residuo 3

Se dejó evaporar a la mitad de su volumen y apare- cieron unos pequeños cristales. La solución era de color verde oscuro. El preci pitado se lavó con acetona dando un color blanco. Presentó un

pf

=

66°C y se le denominó SCAEE -3 (66).

Residuo 4

Se evaporó a sequedad y aparecieron unos cristales los cuales se lavaron y se filtraron con acetona.

El filtrado y la solución de lavados se evaporaron casi a sequedad y al enfriarse aparecieron más - - cristales.

Los cristales se purificaron con hexano y el pre- cipitado presentó un pf

=

215-219°C y se le deno- minó SCAEEH-4 (215-219).

Una c.c.d. no mostró mancha en U.V. ni visible, pero con CoCl2 ^y calentamiento apareció una mancha color ocre, casi anaranjada de Rf

=

0.59

(H-A 7:3 V/V).

Espectro IR Fig. 3 (2mg/300mg KBr) Mostró las siguientes bandas en cm -1 : 3340, 2940, 1450, 1380, 1050.

- 32 -

r ... ""

. . ^{··. ~.}

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11 12 13

10.,43 3 3.5 ~ , .5 WAVELENGTHJJM 6 7 8 9 10

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WAVENUM SER CM'"¹

Fi g. 3 Espectro IR del compuesto SCAEEH-4 ^(215-219)

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3.1.2.) Extracto hexánico insoluble en MeOH.

El precipitado que resultó al reflujar el E. Hexá- nico con metanol, pesó 0.2907 g, los cuales para su purificación fue necesario montar una columna pequeña a presión atmosférica.

La secuencia de la columna líquida pequeña del Extracto hexánico insoluble en MeOH de la Schaef- feria cuneifolia se muestra en la TABLA VI.

La c.c.d. del Extracto hexánico insoluble en MeOH se muestra en la TABLA VII.

Purificación del Residuo 1

La fracción 1 se evaporó casi a sequedad y apare- ció al enfriarse un precipitado blanco que se fil- tró y se lavó con hexano.

El precipitado dió un pf

=

^72°C

La c.c.d. mostró una mancha de color café con Rf = 0.93 (8-Ac 8:2 V/V)

A este compuesto se le designó como: SCAEEH-5 (72)

- 34 -

TABLA VI.- Secuencia de 1 a columna líquida de 1 extracto hexánico insoluble en MeOI:I .

RESIDUO FRACCION EL U ENTE OBSERVACION

1 1 Hexano Precipitado blanco

2 2

-

⁴ H-A (9:1)V/V Residuo verde claro

3 5 - ⁹ H-A (9:1),(8:2)V/V Residuo verde e 1 a ro

4 10

-

¹³ H-A (8:2),(7:3)V/V Residuo verde

5 14 - 16 Acetona, Me OH Residuo blanco

TABLA VII.- Cromatografía en capa del gada de extracto hexánico insoluble en MeOH

VISIBLE U. V. CoC1 2 Rf

No aparece Azul Café claro 0.55

No aparece Azul Café claro 0.42

3.2.) EXTRACTO METANOLICO DE LA PARTE AEREA.

El extracto metanólico se calentó a ebullición en metanol con lo que permitió separar un precipita- do insoluble en el mismo .

Dicho precipitado se purificó con metanol, acetona carbón activado y se recristalizó en H2

o.

^Los

cristales formados tuvieron un pf = 186-187°C y la c.c.d. mostró una mancha con CoC1 2 con un RF = 0.98 (CHC1 3-A 8:2 V/V).

A este extracto se le designó como SCAEEM-1 (186-187)

Pruebas químicas de clasificación:

Antro na ( ^- ) KMn04 ⁽⁺⁾ decoloración Tollen's (+) espejo de plata

Espectro IR Fig. 4 (2mg/300mg KBr)

~ -1

Mostr~ las siguientes bandas en cm

3300, 2930, 1450, 1370, 1200, 1100, 1070, 1040, 1020, 920, 860, 700.

Espectro U.V. Fig. 5

Mostró una p'eq~eñé . or.dulación . a 280 nm.

- 36 -