qPCR revealed that of the sera from the analyzed heifers were positive for vDVB and the subtype identified was BVDV-1a. The determination of the frequency of the means that cause abortions suggests in this study.
INTRODUCCIÓN Y ANTECEDENTES ESPECÍFICOS
El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) pertenece al género Pestivirus, familia Flaviviridae, y está ampliamente distribuido a nivel mundial (Ridpath et al., 2010; Yesilbağ et al., 2017). Cantón et al. (2006) informaron episodios de pérdidas reproductivas asociadas con títulos elevados de anticuerpos contra los serovares L.
PLANTEAMENTO DEL PROBLEMA
HIPÓTESIS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
ESTRATEGIA DE LA INVESTIGACIÓN
CAPÍTULO 1: NEOSPOROSIS, LEPTOSPIROSIS, CAMPILOBACTERIOSIS,
Según Côteaux et al., (2010) el uso de ultrasonido puede mejorar la fertilidad en los rebaños, debido a la detección temprana de fallas y posibles problemas. La neosporosis bovina es un problema reproductivo y consecuentemente productivo importante en el mundo (Dubey & Schares, 2011), incluido Uruguay (Kashiwazaki et al., 2004).
CAPÍTULO 2: DIAGNÓSTICO DE LA CAMPILOBACTERIOSIS GENITAL
El diagnóstico es sumamente importante porque afecta directamente la precisión de los resultados obtenidos (Figueiredo et al., 2002). Sin embargo, el uso de medios de transporte adecuados amplía este plazo a aproximadamente 24 horas (Chaban et al., 2013). Se ha demostrado que Thomann TEM es eficaz tanto para cultivos como para ensayos de PCR (Harwood et al., 2009).
La filtración pasiva de la muestra en el medio de cultivo puede aumentar el rendimiento de Cfv y reducir la contaminación por hongos (Chaban et al., 2013). Contrariamente a esta afirmación, algunos autores creen que el efecto de los observadores sobre el desempeño de la prueba es mínimo (Figueiredo et al., 2002). Utilizando muestras de moco vaginal, Marcellino et al. (2015) compararon el rendimiento diagnóstico de la técnica IFD con el cultivo bacteriológico, logrando una concordancia moderada (coeficiente kappa = 0,52) entre estas técnicas.
La sensibilidad y especificidad fueron del 100 y 99,5%, respectivamente, en comparación con el cultivo convencional (Devenish et al., 2005). Se secuenció el genoma completo de una cepa argentina de Cfv biovar intermedius (Iraola et al., 2013). Además, Filho et al. (2018) confirmaron los resultados mediante la secuenciación del genoma completo de las cepas.
CAPÍTULO 3: ESTUDIO COMPARATIVO DE ELISAs COMERCIALES
A nivel mundial, las pérdidas económicas anuales promedio debido a la neosporosis bovina se estiman en mil millones de dólares estadounidenses (Reichel et al., 2013). 59 pruebas de diagnóstico microbiológico para la detección de patógenos abortigénicos (Campero et al., 2003), algunas de las cuales no están ampliamente disponibles en los laboratorios de diagnóstico veterinario de América del Sur. En Uruguay, se documentó previamente una asociación entre seropositividad y aborto en una sola lechería mediante inmunofluorescencia indirecta (Kashiwazaki et al., 2004).
Alvarez-García et al., (2013), en un estudio realizado en Europa, evaluaron el desempeño de kits ELISA comerciales para el diagnóstico serológico de exposición a N. 67 de bovinos comprados de otros orígenes, los resultados mostraron alta eficiencia de ambos. . kits (Roelandt et al., 2015). En nuestro trabajo, los resultados no difieren de los reportados en la literatura para kits comerciales de ELISA (Wapenaar et al., 2007; Alvarez-García et al., 2013; Roelandt et al., 2015), observándose un acuerdo de moderado a fuerte. entre las series 1-2 y 2-3, y de débil a moderado entre las series 1 y 3.
Alvarez-García et al., (2013), informaron que los valores de corte sugeridos por los kits ELISA no siempre son adaptables al área de investigación. 68 grado de subjetividad y puede haber variaciones importantes entre laboratorios y entre operadores (Guido et al., 2016; Campero et al., 2018;). Por el contrario, el ELISA permite procesar un gran número de muestras en un corto periodo de tiempo, y prácticamente no hay interferencias técnicas (Sartor et al., 2003), variabilidad entre operadores o problemas con la interpretación de los resultados.
CAPÍTULO 4: ENFERMEDADES ASOCIADAS AL VIRUS DE LA DIARREA
Un estudio serológico reveló que la exposición al BVDV está generalizada en el ganado vacuno de carne en todo Uruguay (Guarino et al., 2018). Las secuencias de nucleótidos se alinearon utilizando Clustal W implementado en el software MEGA 6.06 (Tamura et al., 2013). 83 Los signos clínicos y los hallazgos patológicos en la novilla del brote 1 fueron los comúnmente descritos en la literatura para los casos de EM (Brodersen, 2014; Uzal et al., 2016).
En el ganado PI, la IHC debería mostrar una fuerte inmunotinción en todos o la mayoría de los tejidos y órganos, ya que la infección en estos animales está muy extendida y los tejidos generalmente contienen altas cargas virales (Bielefeldt-Ohmann et al., 2008). 85 La inmunotinción antigénica en tejidos fetales fue más intensa para BVDV-2 que para BVDV-1b (Bielefeldt-Ohmann et al., 2008). Aunque los terneros expuestos al BVDV in utero representan una proporción significativa de las presentaciones clínicas, los casos de infección postnatal aguda pueden ser una fuente importante de pérdidas directas (Ridpath et al., 2010).
La arteriolitis observada en el caso 3 es una lesión que se encuentra frecuentemente en los casos de BVDV (Uzal et al., 2016), mientras que no es un hallazgo típico en la salmonelosis (Pecoraro et al., 2017), medio con el que se encontraba este ternero. infectado Incluso con una alta circulación viral en la población ganadera del país, sólo el 3% de los ganaderos implementan vacunas preventivas (Guarino et al., 2008). El único estudio publicado para explorar la diversidad genética del BVDV en Uruguay encontró que la principal especie y subtipo era BVDV-1a (Maya et al., 2016).
CAPÍTULO 5: DETECCIÓN DE Tritrichomonas foetus POR PCR EN
Tritrichomonas fetus también puede detectarse mediante la amplificación de secuencias de ADN ribosómico mediante PCR convencional con cebadores específicos que permiten la amplificación del gen 5.8S y las secuencias ITS1 e ITS2 del parásito (Felleisen et al., 1998). Este programa ha demostrado ser eficaz, reduciendo la prevalencia de estas enfermedades en las granjas de aproximadamente un 10% a un 3% durante un período de 7 años (Molina et al., 2018b). El esmegma de estos toros se obtuvo mediante el método de raspado del prepucio (Tedesco et al., 1977) utilizando raspadores desechables estériles.
Para obtener muestras de esmegma prepucial, se recuperó post mortem la parte externa del pene y el prepucio y se raspó la mucosa prepucial con una espátula desechable (Terzolo et al., 1992). Herrera et al., (1986) evaluaron muestras de esmegma prepucial, moco vaginal y fetos y placentas de bovinos abortados en la cuenca mamaria del país y determinaron la frecuencia de T. Rae et al., (2004) indican que las fincas que tienen más de 10 toros por grupo reproductor tienen 3,9 veces más probabilidades de tener T.
Es una herramienta de diagnóstico rápida, independiente del cultivo, que permite obtener resultados en unas pocas horas (Cobo et al., 2007; Mutto et al., 2006), mientras que el cultivo tarda una semana en dar resultados negativos (Cobo et al. , 2007). ., 2006). otros, 2007). Pérez et al., (2006) reportaron una sensibilidad y especificidad de 72% y 95,4%, respectivamente, al muestrear 2838 toros utilizados para la producción de carne. Con este objetivo y para lograr una comparación entre las dos pruebas más utilizadas, utilizamos cultivo y PCR simultáneamente en las mismas muestras (Cobo et al., 2007), aumentando así la probabilidad de detectar animales positivos, incluso animales que pueden han sido infectados recientemente.
CONSIDERACIONES FINALES
Pese a esto, la epidemiología de la leptospirosis en Uruguay merece ser mejor estudiada en futuros proyectos para investigar el papel de estas Leptospira spp. Sin embargo, dado que fue una enfermedad diagnosticada desde la década de 1970 en hatos bovinos de Uruguay, sin que se haya realizado una campaña de control adecuada durante este período, y que existen reportes recientes de abortos de ganado por este agente (Macías -Rioseco, 2019) , está claro que la enfermedad continúa presentándose en la cuenca lechera. Esto es importante considerando que el 50% de las granjas lecheras continúan utilizando toros solo para el manejo reproductivo y el 20% o más utilizan la cría de toros después de la inseminación artificial (INALE, 2014).
Continuar desarrollando métodos de diagnóstico accesibles a los laboratorios veterinarios de diferentes regiones del país y estudiar la eficiencia de las vacunas utilizadas en Uruguay es importante para mejorar la prevalencia, importancia económica y formas de control de esta enfermedad a establecer. Una situación similar a la campilobacteriosis ocurre en la tricomoniasis, que después de muchos años sin diagnosticarse, fue descubierta recientemente por nuestro grupo en ganado lechero y de carne. En este caso, la PCR desarrollada por este proyecto es una herramienta que pueden utilizar los laboratorios para el diagnóstico, para estudios epidemiológicos y de control adicionales.
Durante este estudio se identificaron casos de infección por el virus de la diarrea viral bovina que causaron diferentes síntomas clínicos. Considerando que esta enfermedad, que provoca diferentes manifestaciones clínicas, es responsable de numerosas pérdidas económicas en varios países, surge la necesidad de continuar trabajando para determinar la epidemiología, importancia económica y formas de control de esta enfermedad en Uruguay. Un avance importante registrado durante el desarrollo de este proyecto es el desarrollo y estandarización de técnicas de diagnóstico que permitirán no sólo el diagnóstico, sino también la continuidad de los trabajos de investigación para resolver problemas relacionados con la epidemiología, la importancia económica y las formas de control de las enfermedades reproductivas. de ganado vacuno en Uruguay.
Prevalence study and genetic typing of bovine viral diarrhea virus (BVDV) in four bovine species in China. Validation of a monoclonal antibody-based capture enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of Campylobacter fetus. Prevalence of serum antibodies to bovine herpesvirus-1 and bovine viral diarrhea virus in beef cattle in Uruguay.
A novel real-time PCR assay for the quantitative detection of Campylobacter fetus based on ribosomal sequences. Factors associated with Campylobacter fetus infection in beef herds in Buenos Aires Province, Argentina. Comparison of culture and a new 5' Taq nuclease assay for direct detection of Campylobacter fetus subsp.
Effect of transport enrichment medium, transport time and growth medium on the detection of Campylobacter fetus subsp. Contribution of Leptospira, Neospora caninum and bovine viral diarrhea virus to fetal loss in beef cattle in New Zealand. Development and evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies against Campylobacter fetus in cattle.
ANEXOS
Hay animales de hasta 2 años con retraso en el crecimiento, menor ganancia de peso, signos clínicos respiratorios y/o dermatitis. Cultivo bacteriano microaeróbico en medio Skirrow (placenta, pulmones, hígado y líquido de abomaso del feto)†: no hubo aislamientos. Cultivo bacteriano microaeróbico en medio Skirrow (pulmón fetal, hígado y líquido de abomaso)†: no se produjo aislamiento de patógenos.
Pruebas realizadas en el “California Animal Health and Food Safety Laboratory”, Universidad de California, Davis, CA, USA. Pruebas realizadas en el Instituto de Higiene de la Facultad de Medicina de la Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
