DNA mitocondrial

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Determinación de la variación de las secuencias de las regiones HVI y HVII de la región control del DNA mitocondrial en una muestra de la población Caribe Colombiana

Determinación de la variación de las secuencias de las regiones HVI y HVII de la región control del DNA mitocondrial en una muestra de la población Caribe Colombiana

Sin embargo, si se compara el genoma mitocondrial de hoy en día con los genomas bacterianos, se puede observar que el genoma mitocondrial es mucho más pequeño que el bacteriano. Mientras que el mitocondrial humano consta de 16Kb y 37 genes, el genoma de eubacterias contiene de una a unas pocas Mb de DNA con cientos a miles de genes, las teorías del origen del genoma mitocondrial explican que hubo transferencia de genes que originalmente hacían parte de la célula procariotica endocitada hacia el núcleo de la célula hospedera. Actualmente se han propuesto dos hipótesis para explicar el origen de la mitocondria como organelo de las células eucarióticas: la hipótesis de la endosimbiosis serial que supone que las células eucarióticas evolucionaron a partir de una serie de endocitosis, lo cual está soportado en la presencia de regiones del genoma eucariótico similares a las de arqueobacterias y otras similares a las de

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Análisis de las frecuencias del DNA mitocondrial, un acercamiento a la historia biológica de los lacandones

Análisis de las frecuencias del DNA mitocondrial, un acercamiento a la historia biológica de los lacandones

La historia de este “extraño tema de tesis para biólogos” es larga y surge de una búsqueda personal, como bióloga y antropóloga pensé en estudiar biológicamente a “un pueblo aislado” aquel que tuviera una incógnita de origen y llegó a mí mente el pueblo Lacandón, del cuál, yo conocía solo los mitos en torno a su aislamiento y no conocía a ningún contacto que facilitara la obtención de muestras o el acercamiento al grupo. Esta investigación comprendía el análisis genético del mtDNA de individuos de todas las comunidades que conforman la etnia, así como de individuos de etnias que hipotéticamente tienen relaciones de parentesco con los lacandones. Con este objetivo realicé colectas en las comunidades lacandonas de México y comunidades Itzaes de Guatemala, conforme a lo establecido por la UNESCO en la Declaración Internacional sobre los Datos Genéticos Humanos y en el marco del respeto a las etnias y su soberanía genética se obtuvo el consentimiento previo, libre e informado de las mismas comunidades para participar en el proyecto de análisis del mtDNA. De estas muestras se obtuvo DNA de 121 individuos y se conservan al resguardo de la UNAM en el laboratorio de Bioquímica de la Facultad de Ciencias.

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Ecología de levaduras de la uva al vino  Métodos moleculares de tipado de levaduras

Ecología de levaduras de la uva al vino Métodos moleculares de tipado de levaduras

En nuestro trabajo desarrollaremos las dos técnicas anteriormente mencionadas, reacción en cadena de la polimerasa y polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción (PCR-RFLP) del DNA ribosómico y polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) del DNA mitocondrial, con el objetivo de identificar y caracterizar las levaduras autóctonas de una bodega en la Denominación de Origen Rueda. El estudio se ha llevado a cabo en colaboración con una bodega perteneciente a dicha denominación de origen donde se trabaja con fermentaciones espontáneas. Es decir, no se inoculan levaduras comerciales, por tanto estamos seguros de realizar un estudio sobre las cepas indígenas autóctonas presentes en la uva y en la bodega. Como se ha comentado en los antecedentes, la microbiota levaduriana de la uva varía en función de la situación geográfica del viñedo, de las condiciones climáticas, del grado de maduración, del estado sanitario de viñedo, de las técnicas de cultivo, de los tratamientos fitosanitarios y de la variedad de la uva. Por este motivo el aislamiento de cepas se realizó durante tres campañas diferentes 2010, 2011 y 2012, ya que el estudio de una sola campaña no sería suficientemente representativo.

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Eficiencia y metabolismo mitocondrial: ¿un eje etiológico de la obesidad?

Eficiencia y metabolismo mitocondrial: ¿un eje etiológico de la obesidad?

La resistencia insulínica de origen genético puede llevar a una disfunción mitocondrial, que aumenta los niveles de lípidos intracelulares amplifi cando la resistencia insulínica. Se podría especular, que es como un círculo vicioso, que en el caso de no ser de origen genético sino alimentario, se iniciaría con una dieta rica en grasa que aumentará los niveles de lípidos en los miocitos. Además, una mutación en el DNA mitocondrial puede alterar la producción de ATP afectando con ello la síntesis y liberación insulínica.

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Papel de la funcin mitocondrial en las enfermedades neurodegenerativas

Papel de la funcin mitocondrial en las enfermedades neurodegenerativas

Es un organelo celular cuya función primordial es la de obtener energía tras el proceso oxidativo que ocurre sobre distintos metabolitos (fosforilación oxidativa). Estruc- turalmente posee dos membranas: una externa y otra interna. La membrana externa esta conformada por una bicapa lipídica y está en contacto con el citoplasma cons- tituyendo un saco cerrado; la membrana interna se caracteriza por invaginaciones denominadas crestas, mis- mas que penetran en la matriz mitocondrial y cuenta con un espacio intermembranas o espacio intercrestal el cual contiene un líquido denominado hialoplasma. En esta mem- brana interna se encuentran mecanismos de la cadena transportadora de electrones y de la ATP-sintasa, que permi- ten la transformación de la energía de oxidación en ATP. Por último, la matríz mitocondrial contiene DNA mitocondrial, mitoribosomas y RNA mitocondrial. En su interior se llevan a cabo reacciones de vital importancia como el ciclo de Krebs y beta-oxidación de ácidos grasos.

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Retos del empleo de la secuenciación masiva de nueva generación (NGS) de la macrofauna bentónica para la evaluación de la calidad ambiental marina.

Retos del empleo de la secuenciación masiva de nueva generación (NGS) de la macrofauna bentónica para la evaluación de la calidad ambiental marina.

Los marcadores genéticos más empleados hasta la fecha para la distinción de especies incluyen el DNA mitocondrial correspondiente a la subunidad I del enzima citocromo oxidasa (COI) [17] para caracterización de animales [5, 13], o la identificación de plantas mediante el empleo de genes de los cloroplastos matK y rbcl [11] y el gen de la subunidad ribosomal 18S [19]. En algunos estudios se mide la capacidad de resolución taxonómica que tienen estos genes, y en algunos casos éstos no proporcionan suficiente información para una correcta discriminación, como es el caso del 18S en eucariotas marinos [11]. Por ello se ha promovido el análisis de otras regiones génicas como el RNA ribosómico mito- condrial 12S (mt12S) en investigación en nemátodos [15, 20] o el RNA ribosómico mitocondrial 16S (mt16S) [20]. A la hora de determinar qué genes se van a estudiar es importante conocer el grado de conservación de las secuencias entre las distintas especies que se pretenden estudiar.

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Funció diferencial de les isoformes de l'adenina nucleòtid translocasa en el metabolisme energètic i la proliferació cel.lular. Regulació de l'expressió per PGC-1alfa

Funció diferencial de les isoformes de l'adenina nucleòtid translocasa en el metabolisme energètic i la proliferació cel.lular. Regulació de l'expressió per PGC-1alfa

La transcripció del mtDNA es caracteritza per la producció d’un únic transcrit corresponent a la còpia sencera de tota la cadena, H o L, de manera que el processament posttranscripcional d’aquest transcrits policistrònics és imprescindible per a la correcta traducció de les proteïnes a partir dels seus mRNA madurs. Breument, el model transcripcional del mtDNA consisteix en l’acoblament dels complexos d’iniciació de la transcripció als promotors, tant al LSP com al HSP, situats al D-loop. Aquests complexos estan integrats per l’RNA polimerasa mitocondrial (POLRMT), Tfam, el qual actua tant com a factor d’iniciació de la transcripció, per la seva capacitat topoisomerasa, com a molècula encobridora, i una de les dues isoformes TFB, TFB1M o TFB2M, les quals estan relacionades amb rRNA dimetiltransferases i podrien col·laborar amb el processament dels mRNA. Un cop format el complex, la transcripció transcorre fins a arribar al final de la cadena o a un punt de terminació determinat, el Term, el qual és reconegut pel factor mTERF, que s’acomplexa amb la maquinària transcripcional, desencadenant la finalització del procés. També s’ha vist que mTERF, a part d’unir-se al lloc de finalització, també ho fa al HSP, indicant un possible mecanisme de reciclatge de l’aparell transcripcional, acoblant la fi amb l’inici d’un altre cicle de transcripció (Scarpulla, 2008).

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Periimplantitis: Checkerboard DNA-DNA Hybridization Método para la Identificación de Bacterias Patógenas

Periimplantitis: Checkerboard DNA-DNA Hybridization Método para la Identificación de Bacterias Patógenas

may be markedly decreased but the species not eliminated. Another advantage of the technique is that membranes may be stripped and re-probed with a new set of 40 different DNA probes. The DNA checkerboard technique does have limitations. The technique can detect only species for which DNA probes have been prepared. Thus, novel pathogens or environmentally important species which might be detected in culture or by other molecular techniques would not be detected by this method. The technique must be optimized for a given biological or environmental site. The use of probes developed for subgingival plaque samples is unlikely to be optimum for samples for other body sites or other sites in nature. The probes must be used to detect organisms in samples of the appropriate size. Probes optimized to detect species in the 10 4 and 10 7

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Disfunción mitocondrial en la enfermedad de Niemann Pick tipo C : contribución del aumento de colesterol mitocondrial mediado por MLN64

Disfunción mitocondrial en la enfermedad de Niemann Pick tipo C : contribución del aumento de colesterol mitocondrial mediado por MLN64

En conjunto los resultados obtenidos hasta ahora en este objetivo permiten proponer que MLN64 media el transporte de colesterol hacia la mitocondria cuando se sobreexpresa, que el aumento del colesterol mitocondrial tiene un efecto negativo sobre la función mitocondrial y que además MLN64 produciría alteraciones en proteínas reguladoras de la dinámica y función mitocondrial como MFN2. Nosotros proponemos que cuando se sobreexpresa MLN64 en células WT produciría un aumento del contenido de colesterol en endosomas tardíos y lisosomas imitando el fenotipo NPC y además facilitaría el transporte de colesterol hacia la membrana plasmática y de aquí a la mitocondria. Esto lo apoyan los antecedentes en los que se ha visto que la sobreexpresión de MLN64 en células HeLa produce la formación de organelos endocíticos más grandes y menos abundantes en comparación a células control [45] y en células COS-1 aumenta la fusión de endosomas tardíos de manera dependiente de actina y estimula la deposición de colesterol en estos organelos [89]. En adición se ha propuesto que MLN64 podría producir el aumento del colesterol mitocondrial mediando el transporte de colesterol entre endosomas tardíos y la membrana plasmática [42]. Entonces la sobreexpresión de MLN64 favorecería el transporte de colesterol hacia la membrana plasmática y de aquí el colesterol llegaría a la mitocondria. Esta suposición se apoya por el hecho que se ha visto que la mayor fuente de colesterol que llega a la mitocondria proviene de la membrana plasmática [90, 91], principalmente proveniente de HDL. Además como MLN64 ejerce una acción inhibitoria sobre StAR el colesterol que llegaría a la membrana mitocondrial no se utilizaría y se alojaría en la membrana produciendo daño. Finalmente las alteraciones mitocondriales que encontramos en células que sobreexpresan MLN64 se explicarían por un aumento de los niveles de colesterol mitocondrial mediados por MLN64, ya que son las mismas alteraciones que encontramos en células NPC que también presentan niveles de colesterol aumentados. Además por un mecanismo que no se ha dilucidado aún la sobreexpresión de MLN64 produce fragmentación mitocondrial y una disminución en la expresión de MFN2, lo que también podría estar relacionado al incremento en los niveles de colesterol mitocondrial. Como se mencionó previamente altos niveles de colesterol en la membrana mitocondrial son perjudiciales para la función mitocondrial y podrían explicar la bajada en el potencial de membrana, el aumento en la producción de ROS mitocondrial, la disminución en la ATPasa y la fragmentación mitocondrial encontrados en nuestros modelos.

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Diversidad genética, recombinación y filogeografía de bogomovirus que infectan tomate en Argentina

Diversidad genética, recombinación y filogeografía de bogomovirus que infectan tomate en Argentina

Hasta este momento, no se ha caracterizado el DNA-B del SbBMV. El DNA-A se caracterizó por primera vez a partir de una muestra de soja (Rodriguez Pardina et al., 2011). Aquí, se presentan dos secuencias de DNA-B [AR:Sa:Pichanal:Tom399:08:40-1] y [AR:Sa:Orán:Tom608:13:54-1] que no presentan altos porcentajes de identidad de secuencia con ningún otro DNA-B reportado. De la comparación de las secuencias de las regiones comunes se observó que comparten un 83 y 89% de identidad de secuencia respectivamente con las CRs del DNA-A de SbBMV. A pesar de que estos porcentajes no soy muy altos para la CR, dentro de esa región están exactamente los mismos iterones (AGGGG) por lo que estas secuencias son propuestas como el DNA-B probable de la especie SbBMV. Sumado a esto el agrupamiento por métodos de distancia genética realizado indica que las dos secuencias de CR del DNA-B agrupan con la CR de DNA-A del SbBMV. Desde un punto de vista biológico solo resta clonar el DNA-A del SbBMV de la misma muestra de la cual se obtuvo el DNA-B y realizar ensayos de infectividad para determinar los síntomas en tomate en una verdadera infección simple. Todas estas evidencias sugieren que existe una especie putativa muy relacionada al SbBMV de la cual no se ha caracterizado el DNA-A o estas dos secuencias constituyen el primer reporte del DNA-B del SbBMV.

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Estudio de la biogénesis mitocondrial en melanoma

Estudio de la biogénesis mitocondrial en melanoma

Se analizaron los niveles de expresión de PGC1α, TFAM, NRF1 y NRF2 con los cebadores que se especifican en la tabla 1, mediante una PCR a tiempo real basada en la tecnología SYBR Green en un termociclador LightCycler 480 System II (Roche Diagnostics, Basel, Suiza). Se añadieron 2,5 μL de cDNA y 7,5 μL de Lightcycler® 580 SYBR Green 1 Master (conteniendo 0,5 μM de los cebadores) y se procedió a la amplificación del cDNA de la siguiente manera: ciclo de desnaturalización de 10 s a 95 ºC, un ciclo de hibridación de 10 s y a la temperatura específica de cada cebador, y un ciclo de elongación de 12 s a 72 ºC. Los valores Ct y las eficiencias de la reacción fueron analizados y referidos al total de DNA mediante el programa GenEx Standard (Multi-DAnalises, Suecia).

28 Lee mas

Función y biogénesis mitocondrial. Diferencias entre géneros

Función y biogénesis mitocondrial. Diferencias entre géneros

Aunque la finalidad de la diferenciación mitocondrial en el hígado y en el TAM es muy distinta (en el hígado la diferenciación tiene como objetivo adquirir una mayor maquinaria respiratoria para una síntesis más eficiente de ATP, mientras que en el TAM consistiría en aumentar la capacidad de generación de calor en detrimento de la síntesis de ATP), el estudio llevado a cabo en esta tesis ha puesto de manifiesto que las diferencias entre géneros en las características morfofuncionales de las subpoblaciones mitocondriales son similares en ambos tejidos: una subpoblación mitocondrial poco diferenciada con propiedades comunes en ambos géneros, y otra subpoblación con mitocondrias mucho más diferenciadas en las hembras. El modelo de subpoblaciones ha puesto de manifiesto una clara divergencia en el proceso de diferenciación mitocondrial entre géneros, tanto en el TAM como en el hígado, lo que sugeriría, en primer lugar, una distinta evolución de dicho proceso entre machos y hembras y, en segundo lugar, un factor común a ambos tejidos que influiría en la regulación del proceso de biogénesis mitocondrial. En este sentido, las hormonas sexuales podrían ser los candidatos idóneos para cumplir las dos premisas indicadas, ya que existen evidencias que señalan el efecto de las hormonas sexuales y, en particular los estrógenos, sobre la regulación del metabolismo energético mitocondrial en el TAM y en el hígado, tanto en experimentos in vivo (Abelenda et al., 1992; Borràs et al., 2003; Pedersen et al., 2001) como in vitro (Chen and Yager, 2004; Monjo et al., 2003; Rodríguez et al., 2002).

81 Lee mas

Unidad didáctica: tecnología del DNA recombinante para la enseñanza de algunos conceptos en biología molecular

Unidad didáctica: tecnología del DNA recombinante para la enseñanza de algunos conceptos en biología molecular

La Unidad Didáctica es una alternativa que puede utilizar el profesor para tener buenos criterios a la hora de seleccionar los contenidos y actividades que permitan mejorar el proceso de enseñanza y aprendizaje del alumno; siendo una base para la programación, por lo cual este proceso requiere el diseño de estrategias tanto metodológicas como conceptuales enriqueciendo los procesos de enseñanza contextualizados ya que responde, a una comunidad especifica con necesidades concretas de aprendizaje. Con base en ello se plantea la temática Unidad didáctica: tecnología del DNA recombinante para la enseñanza de algunos conceptos en Biología Molecular como DNA, enzimas de restricción, DNA recombinante, PCR, transformación bacteriana, dirigida a estudiantes del ciclo de profundización de la licenciatura en biología de la Universidad Pedagógica Nacional (UPN).

143 Lee mas

ADN Mitocondrial Taino en la República Dominicana

ADN Mitocondrial Taino en la República Dominicana

A diferencia del ADN nuclear, que forma cadena de largas fibras, algunas de una doble hélice revestida de proteínas, el ADN mitocondrial se presenta en pequeños anillos agrupados en filamentos. Mientras que el ADN nuclear está encerrado y contiene unos 100 mil genes con toda la información necesaria para producir un ser humano, el ADN mitocondrial solo contiene 37. En América, muchos estudios de ADN mitocondrial del amerindio corresponde a cuatro linajes, nombrados A, B, C y D y un residuo adicional nombrado X recientemente por Bandelt en 1995. Este linaje ancestral se encuentra en algunas poblaciones europeas.

7 Lee mas

Estudio de proteínas recombinantes usando como modelo de expresión ovocitos de xenopus laevis

Estudio de proteínas recombinantes usando como modelo de expresión ovocitos de xenopus laevis

La introducción de material genético externo en una célula se conoce como transfección cuando nos referimos a células de mamíferos y transformación cuando nos referimos a bacterias, hongos, plantas y algas. Existen diferentes estrategias para la introducción de DNA foráneo en células de cultivo, el empleo de uno u otro método depende en gran medida de tipo celular que se emplee, del objetivo del estudio, el tamaño y naturaleza del gen a introducir, la economía del laboratorio y la disponibilidad de equipamiento adecuado. Considerando estos factores, se utilizó como estrategia el método físico microinyección, para la expresión del material genético en ovocitos de Xenopus laevis, este método consiste en la inserción directa del RNA en la célula mediante microagujas, el cual es un proceso usado frecuentemente en ingeniería genética y transgénesis debido a ser muy eficaz a pesar de ser un procedimiento muy laborioso que requiere un equipamiento altamente específico.

88 Lee mas

Paper mitocondrial en malalties neurodegeneratives

Paper mitocondrial en malalties neurodegeneratives

Per altra banda, existeixen evidències que demostren que l’estrès oxidatiu altera l’expressió d’enzims antioxidants així com també augmenta l’expressió i la unió de DNA de nombrosos factors de transcripció. De fet, es sap que les cèl·lules del nostre cervell estan en constant canvi degut a condicions que poden provocar estrès. Per fer front a aquests canvis o possibles danys, el cos humà ha desenvolupat diferents estratègies i respostes capaces de controlar diverses formes d’estrès cel·lular (Calabrese, et al., 2005).

28 Lee mas

Papel de nuevas proteínas mitocondriales en el balance energético

Papel de nuevas proteínas mitocondriales en el balance energético

libre deriva de la oxidación de los azúcares, la grasa y la proteí- na procedentes de la dieta. Esta oxidación se acopla con la reducción de NAD a NADH, de manera que la oxidación del NADH por la cadena de transporte de electrones se acopla, a su vez, a la generación de un gradiente de protones a través de la membrana mitocondrial interna (teoría quimiosmótica de Mitchell). La síntesis de ATP por la mitocondria se acopla al retorno de esos protones a la matriz mitocondrial por la ATP sintetasa mitocondrial. La teoría de Mitchell predice que la pérdida del gradiente de protones no acoplado a la fosforilación de ADP (denominado de manera general como goteo de protones) aumenta la disipación de energía en forma de calor. Además, procesos tales como son la síntesis de proteínas, el manteni- miento de los gradientes de sodio y de potasio a través de las membranas celulares, o la contracción muscular son procesos acoplados a la hidrólisis de ATP, y en consecuencia, termogé- nicos. En su momento se pensó que el metabolismo energéti- co estaba completamente acoplado a la producción de ATP. Sin embargo, hoy sabemos que no todo el consumo de oxígeno tiene lugar en la mitocondria, y que una proporción significati- va de la respiración mitocondrial no está acoplada a la síntesis de ATP (Figura 1).

6 Lee mas

Mutacion del dna y traduccion del dna

Mutacion del dna y traduccion del dna

AZT: lo que pasa con esta droga, es que se parece a una T, lo que la diferencia es que en el carbono 3 en vez de tener OH tiene un triple nitrógeno, entonces la DNA polimerasa viral cuando empieza a sintetizar la cadena, la confunde con una T, eso permite que cuando se le quiera agregar otra base mas, no podrá ya que no tiene con que unirse el enlace fosfodiester (falta OH). La clave del AZT, es que solo la polimerasa viral la confunde, la de nuestro organismo no la confunde. Igual han aparecido organismos resistentes a esta droga.

7 Lee mas

Estructura tridimensional del factor de terminación mitocondrial humano, mTERF en complejo con DNA

Estructura tridimensional del factor de terminación mitocondrial humano, mTERF en complejo con DNA

La estructura cristalográfica del triple mutante R162A/F243A/Y288A (Yakubovskaya et al.), en el que se eliminan las interacciones por stacking con los tres nucleótidos que se exponen hacia el exterior, dio lugar a una estructura prácticamente idéntica a la del complejo con la proteína WT, demostrando que la distorsión de la doble hélice del DNA se produce en la unión y es independiente de la exposición de los tres nucleótidos. En nuestro caso, mTERF une por cada extremo, N y C-terminal, una molécula distinta de DNA, dejando el centro de la proteína libre. En esta estructura no se produce ninguna distorsión del DNA y por tanto, con respecto a ese punto, la proteína no soporta tensión alguna. Aun así, la disposición en ambas estructuras de las argininas que intervienen en el contacto con las bases del DNA y que confieren la especificidad, es muy similar (Fig 2.36b y c). Así pues, parece que el conjunto de las interacciones (todas o algunas) de las argininas de la proteína con el DNA provocarían la tensión que da lugar a la distorsión del DNA. Es decir, dada la interacción inicial, el DNA no podría disipar la tensión porque se encuentra fijado por los extremos y por eso la libera en el centro a través del untwisting o desenrollamiento de la doble hélice. La estructura de mTERF-DNA22pb indica que la unión proteína-DNA se estabilizaría mediante las interacciones de stacking que los residuos R162, F243 y Y288 establecen con las bases que se exponen hacia el exterior.

243 Lee mas

Aislamiento de fragmentos específicos de DNA

Aislamiento de fragmentos específicos de DNA

estos plásmidos recombinantes, que llevan un gen extraño, se incuban en ciertas condiciones con bacterias en medio líquido, son captados por algunas de las células bacterianas. Cuando estas células se multiplican, los plásmidos también se replican; el resultado es un número creciente de células, todas sintetizando copias del mismo plásmido. Los plásmidos pueden separarse luego de los otros contenidos celulares y tratarse con EcoRI para liberar copias múltiples del gen clonado Hasta la década de 1980, el único método para obtener grandes cantidades de un fragmento de DNA era clonándolo en vectores adecuados e introduciéndolo y multiplicándolo en bacterias. En el año 1986, un investigador norteamericano, K. Mullis, desarrolló un método que permite, a partir de una muestra muy pequeña de DNA, obtener millones de copias de DNA in vitro, en unas pocas horas y sin necesidad de usar células vivas. Esta técnica, llamada reacción en cadena de la

13 Lee mas

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