PDF superior Aislamiento y caracterización de bacterias ácido lácticas de intestino de cerdos con potencial probiótico

Aislamiento y caracterización de bacterias ácido lácticas de intestino de cerdos con potencial probiótico

Aislamiento y caracterización de bacterias ácido lácticas de intestino de cerdos con potencial probiótico

6 nutricionales y de crecimiento complejo como la utilización de aminoácidos, péptidos, derivados de ácidos nucléicos, vitaminas, sales, ácidos grasos y carbohidratos fermentables. Generalmente estos requerimientos están presentes en un medio de cultivo como el MRS (Garcia Ibarra, 2007). En este medio se observan colonias blancas mucosas características. Además se ha comprobado que son beneficiosas para la salud tanto humana como animal. Sin embargo, para utilizarlos como probióticos es necesario realizar una adecuada evaluación de cepas de acuerdo con diferentes criterios de selección, de forma tal que los microorganismos colonizadores lleguen en estado viable y en cantidades suficientes una vez que han superado las barreras ácida y biliar en el tracto digestivo. De ahí que, el éxito de un probiótico depende en gran medida de realizar una buena selección de cepas que posean la capacidad de sobrevivir y adherirse a la mucosa intestinal. Por ello es importante investigar dentro de las prácticas de alimentación de los animales, la incorporación de diferentes productos biológicos que contrarresten los efectos negativos anteriormente citados.
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Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas con actividad inhibitoria de bacterias implicadas en enfermedades transmitidas por alimentos

Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas con actividad inhibitoria de bacterias implicadas en enfermedades transmitidas por alimentos

representan una fuente de BAL. Rajoka et al. (2018) aislaron y evaluaron el potencial probiótico de BAL del intestino de las aves de corral. El estudio permitió afirmar que estas bacterias presentan notables propiedades funcionales y tecnológicas para su uso potencial en el desarrollo de productos probióticos. Asimismo, de las aves silvestres se han obtenido aislamientos de BAL. Las BAL aisladas a partir de alimentos fermentados se usan ampliamente para el consumo animal, pero las BAL de origen animal presentan una mejor colonización del hospedador y la activación inmune. En el estudio realizado por Jeong (2014) se evaluó el potencial probiótico de BAL aisladas de patos silvestres y se seleccionaron aquellas candidatas a probióticas como suplemento en animales, especialmente para aves de corral. Un estudio similar fue realizado recientemente por Grant et al. (2018) utilizando también BAL con actividad probiótica, alternativa a la administración de antibióticos en aves de corral. Los alimentos son también una importante fuente de BAL, especialmente los productos lácteos, las verduras y la carne. Ispirli (2017) han aislado BAL a partir de muestras de koumis y kurut tradicionales y su identificación reveló la presencia de Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecalis, Enterococcus durans y especies de Lactobacillus helveticus y se observaron niveles importantes de actividad antibacteriana y antifúngica de estas cepas. Mirzaei et al. (2018) demostraron las propiedades antibacterianas de BAL aisladas de yogurt tradicional y leche ante cepas de Shigella. Rathore (2018) caracterizó el perfil probiótico de BAL aisladas de alimentos fermentados y productos lácteos y sugirió que L. helveticus aislado de pepino, L. plantarum aislado de leche de camello no fermentada y P. pentosacceos aislado de manteca mostraron un buen potencial probiótico. Muruzović et al.
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Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico en bovinos Holstein.

Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico en bovinos Holstein.

De manera normal, la mucosa del intestino actúa como barrera que separa el medio interno del ambiente luminal, mediante una capa de moco que está formada por la interacción de varias secreciones mucosas, como glicoproteínas, musina, péptidos y fosfolípidos surfactantes (Guarner y Malagelada, 2003). Además también, absorbe los nutrientes por medio de sus vellosidades y microvellosidades. Al mismo tiempo, la presencia de bacterias benéficas es vital para el adecuado funcionamiento del intestino ya que intervienen en la motilidad, secreción, absorción y en la estructura celular. Por su parte, el intestino grueso desempeña funciones de deshidratación del quimo intestinal y la evacuación de los residuos no utilizados por el organismo. En el intestino delgado las reacciones microbianas se caracterizan por ser hidrolíticas por la presencia de oxígeno. Caso contrario es el intestino grueso donde las condiciones son anaerobias y las reacciones bioquímicas son normalmente reductoras (Macfarlane et al., 1992).
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Aislamiento, caracterización y determinación del potencial probiótico de bacterias lácticas de pollos

Aislamiento, caracterización y determinación del potencial probiótico de bacterias lácticas de pollos

Las enfermedades entéricas son muy importantes en este tipo de producción ya que producen pérdida de productividad, aumento de mortandad, aumento del costo de los tratamientos y contaminación asociada a los productos de consumo humano. Una alternativa para generar producción “limpia” es el empleo de probióticos que se podrían utilizar en forma alternativa sobre los antibióticos promotores del crecimiento, ya que tienen la ventaja de no dejar residuos en los animales destinados a consumo. En la avicultura los microorganismos que más se han empleado con fines probióticos han sido las bacterias ácido lácticas (BAL), especialmente las del género Lactobacillus, las cuales se encuentran entre los componentes bióticos más destacados de la microflora benéfica (Rondón et al., 2008)
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Elaboración de jugos de fruta con adición de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico

Elaboración de jugos de fruta con adición de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico

Otro de los puntos importantes en el momento de la selección y evaluación de la actividad probiótica de cepas, es la dosis efectiva, para que puedan darse de manera adecuada los procesos de colonización en el organismo. Aureli et al., (2011) reportaron que según la AFSSA (Agencie Française de Sécurité Sanitaire des Aliments), la dosis del probiótico a ingerir es un factor importante para obtener altas concentraciones microbianas en varios compartimientos del tracto gastrointestinal. En ese mismo estudio se planteó también, que en el intestino delgado debe haber al menos 10 6 UFC/mL de las bacterias ingeridas y en el colon aproximadamente10 8 UFC/mL. Por esta razón es fundamental grantizar la viabilidad de las cepas durante todos los ensayos y el hecho de que la cepa No.7 se haya mantenido en altas poblaciones celulares en las matrices alimentarias evaluadas, sugiere que esta cepa podría ser aplicada para el desarrollo de bebidas de fruta funcionales, por su nivel de viabilidad y por su resistencia a condiciones adversas como ya se reportó en los numerales anteriores.
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Caracterización de bacterias ácido lácticas aisladas del intestino de Litopenaeus vannamei cultivados en sistema intensivo en Tumbes – Perú y su potencial uso como probióticos

Caracterización de bacterias ácido lácticas aisladas del intestino de Litopenaeus vannamei cultivados en sistema intensivo en Tumbes – Perú y su potencial uso como probióticos

Por otro lado, cada especie animal posee una microbiota autóctona, en animales terrestres está compuesta en su mayoría por organismos anaeróbicos (McCartney, 1994). En langostinos silvestres y de cultivo la microbiota se encuentra constituida principalmente por bacterias Gram negativas y en menor proporción por Gram positivas (McCartney, 1994; Morales, 2000; García, 2003). En la mayoría de los casos los mecanismos internos de defensa les permiten controlar a los agentes patógenos (Morales, 2000). Sin embargo, cuando éstos mecanismos están suprimidos se vuelven susceptibles a ataques de patógenos (Brock & Lightner, 1990; Morales, 2000), donde el estrés generado por las condiciones del cultivo provoca el desequilibrio de la flora intestinal lo cual es aprovechado por diversos agentes patógenos oportunistas que se instalan y se multiplican desplazando rápidamente a las bacterias benéficas (Zazueta, 2003).
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Evaluación bioquímica y molecular de la capacidad hipocolesterolémica de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico

Evaluación bioquímica y molecular de la capacidad hipocolesterolémica de bacterias ácido lácticas con potencial probiótico

En el 2000, Taranto y colaboradores, suministran en ratones con hipercolesterolemia inducida, dosis de L. routui (productor de BSH), donde se observó que mientras hubo permanencia de la cepa en el intestino habían disminuido en un 17% las lipoproteínas de alta y baja densidad (Taranto, Sesma, & Valdez, 1999). En 2004 Jones, microencapsula con 10% de alginato la cepa de L. plantarum 80 (productora de BSH), con el objetivo de ser dosificada en un futuro como tratamiento preventivo para enfermedades de origen cardiovascular (M. L. Jones, et al., 2004). Martoni en 2008, retoma el trabajo de Jones, y a las esferas de alginato las somete a las distintas condiciones del tracto digestivo, simulando éste por medio del diseño de una serie de biorreactores en serie, mostrando que la microcápsula de alginato disminuye su diámetro cuando atraviesa el pH ácido del estómago. Jones B, y colaboradores en el 2008, realizan un estudio metagenómico en donde postulan que la BSH hace parte de la evolución de los microorganismos de la flora intestinal como parte de su proceso de adaptación a las condiciones hostiles del tracto gastrointestinal (Jones, Begley, Hill, Gahan, & Marchesi, 2008); Martoni, et al., 2008).
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Caracterización molecular y determinación del carácter probiótico de lactobacillus SPP , aislado de la  microbiota gastrointestinal del lechón destetado

Caracterización molecular y determinación del carácter probiótico de lactobacillus SPP , aislado de la microbiota gastrointestinal del lechón destetado

El objetivo de la investigación fue caracterizar molecularmente y determinar el carácter probiótico de Lactobacillus spp., aislado de la microbiota gastrointestinal del lechón destetado. Nuestra metodología fue el aislamiento bacteriano en medio líquido MRS y para la purificación de cepas bacterianas se realizó en medio sólido MRS y por tinción diferencial Gram, luego se realizó la extracción de ADN genómico bacteriano, posteriormente la amplificación gen 16S ARNr mediante la técnica de PCR, los productos de la PCR fueron enviados a secuenciar a un servidor Macrogen, luego las secuencias fueron analizadas comparativamente con las bases de secuencias de Gene Bank (National Center for Biotechnology Information) usando el algoritmo BLAST. Nuestros resultados, mostraron varias cepas bacterianas ácido lácticas aisladas e identificadas molecularmente, proveniente del estómago (4), intestino delgado (4), intestino grueso (11), conduciendo a un cepario de siete cepas. Ensayos in vitro mostraron que
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Aislamiento de bacterias ácido lácticas a partir de residuos agroindustriales y su uso potencial como probiótico .

Aislamiento de bacterias ácido lácticas a partir de residuos agroindustriales y su uso potencial como probiótico .

Se aplicó la metodología de Ortiz, (2006), se extendió la colonia en el centro de un portaobjeto de vidrio y se fijó con calor, se tiñe con la solución cristal-violeta (por un minuto), se cubre con Lugol (se dejó reaccionar 30 segundos) y se enjuagó con agua. Posteriormente se realizó una decoloración con alcohol/acetona (durante 15 segundos), se enjuagó nuevamente con agua y se dejó secar a temperatura ambiente. La tinción de Gram dependerá del espesor, la estructura física y la permeabilidad de la pared bacteriana. Las bacterias Gram (+) se tiñen de color púrpura en cambio las bacterias Gram se tiñen de rosado. La morfología y coloración se observaron en un microscopio óptico con un objetivo de inmersión 100X.
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Influencia de la concentración de miel de furcraea andina "cabuya" en el comportamiento microbiológico y fisicoquímico de un yogurt probiótico natural

Influencia de la concentración de miel de furcraea andina "cabuya" en el comportamiento microbiológico y fisicoquímico de un yogurt probiótico natural

A partir de los resultados presentados, es válido mencionar la relación existente entre prebiótico (miel de cabuya, con mejores comportamientos y crecimiento microbiano a 55 y 65ºBx) y probiótico (Lactobacillus acidophilus), fundamentando dicha relación en que es responsabilidad de las bifidobacterias y los lactobacilos la producción de ácidos grasos de cadena corta y ácido láctico, como consecuencia de la fermentación de carbohidratos no digeribles, constituyendo los prebióticos el sustrato fundamental (alimento) de las bacterias probióticas (De las Cagigas y Blanco, 2002), lo cual se evidenció en los resultados de la presente investigación, logrando obtener una óptima simbiosis entre la miel a 55 y 65ºBx junto al Lactobacillus acidophilus, con mayor crecimiento microbiano en la última concentración (65ºBx), definiendo a los yogurts probióticos con miel a 55 y 65ºBx como productos simbióticos, considerándolos a ellos como combinaciones apropiadas de pre y probióticos (Guarner et al., 2008), la cual beneficia al huésped mediante el aumento de la sobrevivencia e implantación de los microorganismos vivos en el sistema gastrointestinal, describiéndose un efecto sinérgico entre ambos, es decir, los prebióticos pueden estimular el crecimiento de cepas específicas y por tanto contribuir a la instalación de una microflora bacteriana específica con efectos beneficiosos para la salud (De las Cagigas y Blanco, 2002), lo que según el sinergismo mostrado en el presente estudio, denota un gran potencial de brindar al consumidor efectos beneficios para la salud propio de un alimento multifuncional de este tipo, como indica Cáceres y Gotteland (2010) que el Lactobacillus acidophilus en asociación con L. bulgaricus, B. lactis y S. thermophilus y en presencia de oligofructosa modula la microbiota intestinal y disminuye la translocación bacteriana en pacientes colectomizados, sugiriendo que estas cepas contribuyen a estabilizar la función intestinal de barrera.
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Narrativas de pacientes con síndrome de intestino irritable: análisis de casos

Narrativas de pacientes con síndrome de intestino irritable: análisis de casos

El síndrome de intestino irritable (SII) es una enfer- medad psicosomática cuya prevalencia ha aumentado considerablemente en los últimos años. Tiende a pre- sentar comorbilidad con otros cuadros psicopatológi- cos como la ansiedad, fobias, hipocondría y depresión, lo cual otorga mayor complejidad al tratamiento médico y psicoterapéutico. Existe escasa evidencia empírica sobre tratamientos psicoterapéuticos que ayuden a estos pacientes a lidiar con la sintomatolo- gía. El presente trabajo tuvo por objetivo describir las narrativas de pacientes que padecen SII y explorar el rol que cumplen estas narrativas en la constitución y mantenimiento de la enfermedad. Se seleccionaron dos pacientes de sexo femenino con diagnóstico mé- dico de SII y se realizó una entrevista en profundidad. El diálogo fue transcrito a texto y los datos fueron analizados desde el enfoque biográfico. Los resultados muestran que las pacientes padecen altos niveles de alexitimia, pensamiento operatorio y dificultades en la expresión emocional; confirmando las principales características de la personalidad psicosomática. Se propone definir abordajes psicoterapéutico específicos a cada paciente de acuerdo a su personalidad inferida a través de sus narrativas, más que una técnica homo- logada unificada para todos los pacientes que padecen esta enfermedad.
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AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS DEL QUESO DE CABRA ARTESANAL DEL SURESTE DE COAHUILA PARA SU USO COMO CULTIVOS INICIADORES EN QUESOS PASTEURIZADOS.

AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS DEL QUESO DE CABRA ARTESANAL DEL SURESTE DE COAHUILA PARA SU USO COMO CULTIVOS INICIADORES EN QUESOS PASTEURIZADOS.

En la leche cruda utilizada para la elaboración de quesos artesanales se encuentra una diversidad de microorganismos, de los cuales algunos son los responsables de la textura y sabor en este alimento. Dentro de estos microorganismos son reconocidas las BAL como aquellas que proporcionan las características típicas en quesos artesanales. Las BAL son microorganismos muy utilizados en la actualidad en diversos alimentos, sobre todo en las fermentaciones, debido a las propiedades que brindan al ser aplicadas en diversos alimentos. Fueron descubiertas en 1857 por Louis Pasteur y clasificadas en 1919 por Orlan Jensen, de acuerdo al tipo de metabolismo de azúcares, en homofermentativas y heterofermentativas; en las primeras se obtiene como metabolito final ácido láctico y en las segundas además del ácido láctico fracciones equimolares de etanol, aldehídos y CO 2 . Hoy en día las BAL son utilizadas como cultivos iniciadores.
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Aislamiento y evaluación de bacterias ácido lácticas con capacidad antagónica a partir de productos cárnicos madurados artesanalmente

Aislamiento y evaluación de bacterias ácido lácticas con capacidad antagónica a partir de productos cárnicos madurados artesanalmente

Con aquellas cepas de bacterias ácido lácticas (BAL) que se comprobó la acción antagónica en la prueba de antagonismo indirecto; a partir de un vial de cada cepa se realizó un inóculo correspondiente al 10% del Volumen Efectivo de Trabajo (VET) en caldo TSA + (extracto de levadura) para Listeria monocytogenes y caldo nutritivo para E. coli y S. aureus, se dejaron en periodo de incubación durante 12h a 37°C bajo condiciones de aerobiosis y agitación constante 150 r.p.m. Las condiciones de crecimiento para E. coli y S. aureus fueron 4 horas a 35ºC +/- 2ºC. A partir de los cultivos de las BAL, transcurrido el periodo de incubación el cultivo fue centrifugado a 5000g a 4°C durante 15 minutos. El sobrenadante se separó del pellet celular a un nuevo tubo estéril para ajustar pH a 6.5 (Usando NaOH 0.1 - 1N). Posteriormente se filtró mediante membranas Millipore ® de 0.22µm con el fin de separar todas las células presentes en el sobrenadante.
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Identificación molecular y caracterización cinética de bacterias ácido lácticas aisladas de una bebida fermentada

Identificación molecular y caracterización cinética de bacterias ácido lácticas aisladas de una bebida fermentada

Los cultivos utilizados fueron previamente cultivados en caldo MRS a 35°C por 24 h, se centrifugaron a 12000 rpm durante 10 minutos y el sedimento obtenido se resuspendió en el medio API CHL, posteriormente se depositó en los microtubos en los que se encuentran los carbohidratos. La zona aeróbica de los microtubos (superficie) se cubrió con aceite de parafina para crear las condiciones de anaerobiosis requeridas. Las tiras con los distintos microtubos se incubaron a 37 °C. Se realizaron dos lecturas de las mismas a las 24 y 48 h, respectivamente. La fermentación de los carbohidratos se manifestó por un cambio de color del microtubo, debido a la producción anaeróbica de ácido, que fué detectado por el indicador de pH incluido en el medio API CHL (Antuneset al., 2002; Lukácováet al., 2006).
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Evaluación del efecto de Saccharomyces cerevisiae sobre la caracterización sensorial del café en dos sistemas de fermentación

Evaluación del efecto de Saccharomyces cerevisiae sobre la caracterización sensorial del café en dos sistemas de fermentación

Cromatografía liquida (HPLC) para perfil de azúcares. El análisis de perfil de azucares por HPLC se realizó con estándares de sacarosa, glucosa, fructosa, galactosa, maltosa y lactosa. Se registró presencia del disacárido sacarosa en ambas muestras y de los monosacáridos glucosa y fructosa (cuadro 7). Según estudios realizados por Steiman (2003) en café verde procesado de manera convencional encontró sacarosa, fructosa y glucosa en cada una de las muestras evaluadas. El contenido de glucosa mostro diferencia significativa (t=0.0122), presentando mayor contenido el tratamiento ASL. Según Geromel et al. (2006) los carbohidratos de bajo peso molecular como la sucrosa, glucosa y fructosa dependen principalmente del desarrollo del grano. Durante la evaluación de los resultados se encontró galactosa en la muestra inoculada con la cepa L ORO en condiciones cerradas mostrando diferencia significativa (t=0.0127), provocado por la limitada cantidad de oxígeno dentro de la misma se encontraron cantidades promedio de 0.91 mg/g de muestra de café verde. La presencia de monosacáridos como la galactosa y manosa están relacionados específicamente con la expresión genómica durante el desarrollo del grano (Pré et al. 2008), las levaduras distribuidas por LALLEMAND, contribuyen a la expresión del potencial genético del café durante la fermentación.
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PARA OBTENER EL GRADO DE

PARA OBTENER EL GRADO DE

La degradación de ácido gálico en pirogalol por las cepas de bacterias lácticas ensayadas se plantea como un proceso cometdólico debido a que el ácido gálico no fu[r]

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DETERMINACIÓN DE LA VIDA ÚTIL DE UN ALIMENTO PROCESADO, YOGHURT SIN LACTOSA

DETERMINACIÓN DE LA VIDA ÚTIL DE UN ALIMENTO PROCESADO, YOGHURT SIN LACTOSA

Una vez formado el yoghurt, se reduce la temperatura hasta unos 5ºC. En torno a esos valores, que se mantienen durante todo el periodo de almacenamiento, la actividad de las bacterias es escasa. Apenas se reproducen, por lo que su número permanece estable, pero aún siguen con vida y desarrollando otras funciones metabólicas. La competencia bacteriana, los bajos valores de pH y las bajas temperaturas impiden el desarrollo de otras bacterias que pudieran estar presentes. Ahora bien, estas condiciones no impiden el crecimiento de levaduras y/o mohos (en el caso de estar presentes), que podrían acabar desarrollándose a medida que pasa el tiempo.
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Aislamiento de bacterias lácticas del queso crema artesanal chiapaneco y evaluación de cambios fisicoquímicos y microbiológicos durante su almacenamiento, para determinar la vida de anaquel.

Aislamiento de bacterias lácticas del queso crema artesanal chiapaneco y evaluación de cambios fisicoquímicos y microbiológicos durante su almacenamiento, para determinar la vida de anaquel.

Sin embargo, también se encuentran en los productos lácteos microorganismos benéficos, como las bacterias lácticas (BAL) estas bacterias han sido asociadas desde hace mucho tiempo con efectos beneficos a la salud, las diferentes especies de muchas de BAL pueden producir una gran variedad de metabolitos de potencial antimicrobiano, incluyendo ácido lactico y acético, peróxido de hidrogeno y bacteriocinas. Las BAL están asociadas con la inhibición de microorganismos deterioradores de alimentos o patógenos como Staphylococcus, Bacillus, Salmonella y Listerias respectivamente (Montville & Winkowski, 1997). Es por esto que existe un gran interés en el estudio de las bacterias lácticas autóctonas para emplearlas en la producción industrial de quesos tradicionales, para que conserven sus propiedades típicas y sean a la vez más seguros desde el punto de vista microbiológico.
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Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas (BAL) preentes en el mucílago de cacao (Theobroma cacao L ) trinitario  y nacional

Aislamiento e identificación de bacterias ácido lácticas (BAL) preentes en el mucílago de cacao (Theobroma cacao L ) trinitario y nacional

Actualmente las bacterias lácticas son utilizadas en su mayoría por industria de los lácteos en una extensa variedad de productos fermentados como el queso, yogurt o el kéfir, la acción de estas bacterias tiene como consecuencia un proceso microbiano por lo cual el azúcar de la leche (lactosa) se transforma en ácido láctico. A medida que el ácido láctico se acumula la estructura de las proteínas de la leche se van modificando es decir se van cuajando, y lo mismo ocurre con la textura del producto, existen otras variables la temperatura y la composición de la leche, que influyen en las cualidades particulares de los distintos productos resultantes (29).
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Aislamiento y caracterización de bacterias desnitrificantes antárticas con potencial uso en biorremediación de diesel

Aislamiento y caracterización de bacterias desnitrificantes antárticas con potencial uso en biorremediación de diesel

Debido a la frecuente exposición a hidrocarburos, en las cercanías de las estaciones Antárticas la microbiota autóctona del área afectada está naturalmente adaptada a la degradación de combustibles y derivados (6, 12), y se sabe que muchos microorganismos son capaces de consumir hidrocarburos como fuente de carbono (16). Se reportó en ambientes prístinos, estos microorganismos aumentan en desde menos de 0,1% hasta 100% de la población microbiana total del ambiente expuesto a contaminación por hidrocarburos (3). Igualmente, sería útil ayudar en la degradación añadiendo bacterias especializadas que puedan degradar los contaminantes o aumentar la capacidad de degradación de la comunidad autóctona (6). Se han usado métodos dependientes e independientes de cultivo para determinar los impactos de la contaminación por hidrocarburos en las comunidades bacterianas de los suelos antárticos. En suelos control se encuentran muchos filos de bacterias diferentes, sin embargo en suelos contaminados con hidrocarburos en la isla Rey Jorge domina el filo proteobacteria, indicando que un derrame de crudo en un suelo mineral puede llevar a una disminución de la diversidad bacteriana (42, 43).
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