PDF superior Células madre mesenquimales para terapia celular en la especie canina

Células madre mesenquimales para terapia celular en la especie canina

Células madre mesenquimales para terapia celular en la especie canina

Como se ha descrito, condicionado a las particularidades del tamaño de nuestros pacientes, así como la logística necesaria para estas terapias avanzadas, el empleo alogénico facilitaría una rápida iniciación del tratamiento, evitando la extracción del tejido donante y aislamiento de sus MSCs. Por otro lado, permite seleccionar los mejores donantes, al evaluar previamente in vitro sus MSCs, personalizando la terapia. Las cAd-MSCs alogénicas han sido administradas en diversos estudios, tanto de manera sistémica como local, sin que se haya descrito ningún tipo de complicación, pero a día de hoy, son pocos los conocimientos sobre su migración y anidamiento en el perro. 7,173,175,292 La administración sistémica de MSCs limita su capacidad de migración, debido a que gran parte son retenidas a nivel pulmonar, lo cual disminuiría su efectividad. 175,293 También, se ha descrito en algunas especies, complicaciones por la administración sistémica de grandes dosis, como embolismos e infartos en diferentes tejidos. 292
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TítuloEstudio descriptivo de las células madre mesenquimales en la articulación artrósica y su aplicación en terapia celular para reparar cartílago articular humano

TítuloEstudio descriptivo de las células madre mesenquimales en la articulación artrósica y su aplicación en terapia celular para reparar cartílago articular humano

El CD90, o Thy-1, se expresa en células hematopoyéticas, células del timo, tejido neuronal, placenta y muchos tejidos conectivos (Young et al., 2001). Se considera una parte de la superfamilia de las inmunoglobulinas, ya que presenta una gran homología con dichas glicoproteínas (Young et al., 2001). El CD105, o endoglina, es característico de células progenitoras de adipocitos-condrocitos-osteocitos de células estromales de médula ósea (Pittenger et al., 1999; Young et al., 2001). Además, suele expresarse en células endoteliales, sincitiotrofoblastos, macrófagos y células estromales. Se ha sugerido que juega un papel importante en la señalización de TGF-β durante la condrogénesis (Alsalameh et al., 2004). El CD117, o c-kit, es un receptor que se expresa en células madre y células progenitoras hematopoyéticas (Teramura et al., 2008). El CD166, o ALCAM, es la molécula activadora de adhesión célula-leucocito. Se sabe que esta molécula de adhesión se expresa en CMM (Pittenger et al., 1999). La expresión del CD271 en CMM ha sido descrita en varios tejidos humanos como médula ósea (Cattoretti et al., 1993; Quirici et al., 2002; Jones et al., 2006; Soncini et al., 2007), grasa (English et al., 2007), membranas fetales (Soncini et al., 2007) o la pulpa dentaria (Waddington et al., 2009). El aislamiento de CMM utilizando anticuerpos frente a CD271 permite obtener una población celular homogénea fenotípica y funcionalmente (Quirici et al., 2002; Bühring et al., 2007), con un potencial clonogénico elevado y un alto potencial de diferenciación en múltiples líneas de células mesenquimales (Quirici et al., 2002; Soncini et al., 2007; Waddington et al., 2009). El STRO-1 se ha descrito como un marcador de CMM (Simmons y Torok-Storb, 1991). El método de inmunoaislamiento ha sido utilizado para obtener poblaciones de CMM positivas para marcadores específicos, como STRO-1 (Simmons y Torok-Storb, 1991; Gronthos et al., 2003), CD105 (Majumdar et al., 2000; Aslan et al., 2006) y CD271 (Quirici et al., 2002; Soncini et al., 2007). Se ha mostrado que células STRO-1+ procedentes de médula ósea y seleccionadas por inmunomagnetismo se diferencian en múltiples fenotipos mesenquimales, incluido el condrocitario (Dennis et al., 2002).
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Terapia celular dirigida contra la sordera: estudio de la capacidad de transdiferenciación de células madre mesenquimales humanas y de fibroblastos hacia células sensoriales del oído interno

Terapia celular dirigida contra la sordera: estudio de la capacidad de transdiferenciación de células madre mesenquimales humanas y de fibroblastos hacia células sensoriales del oído interno

La inducción de la expresión de Sox2 en los fibroblastos NIH/3T3 tratados con 5azadC ya significa un gran paso en relación a la reprogramación, tanto hacia una célula pluripotente como a un progenitor neural y ótico (Pevny y Nicolis, 2010; Neves y cols., 2013): Ya se ha indicado anteriormente que Sox2 es un marcador típico de células pluripotentes pero también se expresa en CM neurales, en el dominio neurosensorial de la vesícula ótica y en las células progenitoras de CC y CS. En consecuencia, Sox2 es un factor clave en la monitorización del proceso de transdiferenciación de los fibroblastos hacia células similares a CC. Oct4 por su parte, como también se ha comentado, es un marcador de pluripotencia aunque su expresión también está presente en progenitores neurales (Ilieva y Dufva, 2013). La transducción de Sox2 y Oct4, conjunta o individualmente, ha sido considerada suficiente para reprogramar distintos tipos celulares hacia células iPS (Huangfu y cols., 2008; Zhu y cols., 2010; Tsai y cols., 2011; Yuan y cols., 2011), aunque sustituyendo el resto de factores de transcripción por combinaciones de moléculas capaces de conseguir los mismos efectos mediante la inhibición de la metilación génica y cambios en el metabolismo y señalización celular (Feng y cols., 2009). Otro ejemplo es el trabajo de Ring y cols. (2012) en el que únicamente sobreexpresando Sox2 en fibroblastos embrionarios de ratón y exponiendo las células a factores de crecimiento se logran obtener PN multipotentes. Esta aproximación se asemejaría más a nuestro objetivo, ya que tras el tratamiento de los fibroblastos NIH/3T3 con 5azadC tenemos una población celular que expresa genes de pluripotencia (Oct4 y Sox2). En estos cultivos se podría estudiar el efecto de distintos factores de crecimiento sobre la expresión de otros marcadores de PN y óticos y continuar con la diferenciacion hacia CC.
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Estudios en neurociencias: aportes para la investigación en cultivo de células madre mesenquimales

Estudios en neurociencias: aportes para la investigación en cultivo de células madre mesenquimales

plazar células y tejidos dañados afectados de manera congénita, por enfermedad degenerativa o mediante trauma. En tales procedimientos las MSC son administra- das a los pacientes a través de la sangre o directamente en el tejido dañado. El uso de la terapia celular con MSC es actual- mente tópico de debate; sin embargo, debido a sus tres propiedades biológicas; alta diferenciación, tropismo y capacidad inmunorreguladora. Las MSC son can- didatas potenciales en terapia celular aplicable a muchas enfermedades, tales como enfermedad del injerto contra el huésped, enfermedades cardiovas- culares y del cartílago, enfermedades autoinmunes; diabetes tipo I, artritis reumatoidea, esclerosis múltiple, lupus eritomatoso sistémico, etcétera (Castro- Marreza et al., 2015).
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Proliferación y diferenciación osteogénica de células madre mesenquimales en hidrogeles de plasma sanguíneo humano

Proliferación y diferenciación osteogénica de células madre mesenquimales en hidrogeles de plasma sanguíneo humano

Nuestros resultados demostraron que las Ad- MSC proliferaron en el interior del hidrogel de plasma sanguíneo humano presentando un patrón de proliferación muy similar al observado en el cultivo en monocapa (figura 7). Esto indica que el hidrogel proporcionó un microambiente adecuado, con un tamaño de poro apropiado (entre 20 y 30 µm) (figura 6, paneles B y C) para la proliferación celular y que en estas condiciones las Ad-MSC conservaron su capacidad de diferenciación hacia el linaje osteogénico (figuras 3 y 4). Estas dos características son muy importantes para pensar en la utilización de este modelo en terapia celular del tejido óseo, ya que es fundamental que las células conserven su capacidad de proliferación y diferenciación osteogénica en el momento de ser trasplantadas para que respondan adecuadamente a los estímulos generados en el sitio de la lesión. En cuanto a su aplicación clínica, el hidrogel de plasma sanguíneo humano puede administrase en el sitio del defecto en estado líquido para que se adapte a la forma y tamaño del defecto a tratar. Una vez allí, se gelifica formando una estructura tridimensional que contiene en su interior las células madre mesenquimales y permite que estas células ejerzan su actividad terapéutica. Esta podría llegar a ser una estrategia exitosa en la búsqueda de una alternativa para la administración y aplicación clínica de las células madre mesenquimales en medicina regenerativa.
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Evaluación de la capacidad neuroprotectora de las células madre mesenquimales sobre neurorretina

Evaluación de la capacidad neuroprotectora de las células madre mesenquimales sobre neurorretina

Las patologías retinianas degenerativas como la DMAE o la retinosis pigmentaria, son patologías con una prevalencia en aumento y que a día de hoy no tienen tratamientos efectivos. Por ello es necesario profundizar en los mecanismos fisiopatológicos de estos procesos con el objetivo de alcanzar tratamientos que sean realmente efectivos y así mejorar la calidad de vida de los pacientes (26)(27). En este sentido una de las opciones terapéuticas más prometedoras es la terapia celular, la cual se define como el proceso de restauración de un tejido dañado a partir de nuevas células para poder tratar una patología.
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Células madre mesenquimales de médula ósea y de cordón umbilical en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares

Células madre mesenquimales de médula ósea y de cordón umbilical en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares

Este tipo de células se empleó durante varios años, pero rápidamente cayeron en desuso porque no tenían poder de transdiferenciacion y su empleo en Cirugía Cardiovascular trajo variadas complica- ciones. La primera publicación en América relacio- nada con el empleo de células en la terapia celular o regenerativa fue en la revista Cardiología Interconti- nental en 2001, por Chachques et al . 11 de los Depar- tamentos de Cirugía Cardiovascular de los Hospita- les Broussais y Georges Pompidou de París, Francia. Rápidamente, grupos independientes de varios países altamente desarrollados en sus sistemas de salud, comenzaron a emplear células de medula ósea, en este caso mononucleares donde se inclu- yen las células marcadas como CD34 linaje positivo, con poder de transdiferenciacion 12 .
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Respuesta a la terapia regenerativa con células madre mesenquimales alogénicas, aplicadas en casos clínicos con defectos óseos en caninos

Respuesta a la terapia regenerativa con células madre mesenquimales alogénicas, aplicadas en casos clínicos con defectos óseos en caninos

Los defectos óseos graves en caninos pueden resultar en complicaciones como unión retardada o no-unión, frecuentemente en huesos largos. La terapia tradicional consta en reintervención quirúrgica y/o antibioticoterapia según el caso, pero obteniéndose generalmente pocos resultados alentadores. Existen opciones terapéuticas para combatir estas complicaciones como el uso de células madre mesenquimales (CMM). Las CMM presentan características atractivas para su uso terapéutico, como su capacidad de promover la angiogénesis, ser inmunomoduladoras y multipotentes. El objetivo general de este trabajo fue evaluar el tratamiento con CMM derivadas de tejido adiposo (CMM-TA) alogénicas, en dos casos clínicos caninos, con defectos óseos graves. Las CMM-TA alogénicas fueron aplicadas repetidas veces, por vía percutánea sobre la zona de lesión o sobre xenoinjerto de hueso en los casos clínicos tratados. En ambos pacientes fue realizado un seguimiento clínico y radiológico, hasta un año post tratamiento con CMM. Al finalizar la terapia, en ambos pacientes se observó una mejoría clínica y radiográfica luego de la aplicación de CMM-TA. No hubieron signos de rechazo de dichos implantes. La conclusión es que existió un retorno funcional de los miembros afectados en ambos casos y no se observaron efectos adversos a los aloinjertos, lo que nos indica que la terapia celular contribuyó a su recuperación y podría utilizarse como opción alternativa a las terapias tradicionales. Es necesaria la profundización del conocimiento sobre las CMM y su efecto terapéutico in vivo.
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Implante de células madre mesenquimales alogénicas en una no-unión de radio en un canino

Implante de células madre mesenquimales alogénicas en una no-unión de radio en un canino

La ausencia de consolidación ósea (no-unión) se manifiesta frecuentemente con dolor local, limitación funcional, atrofia muscular, deformidad de grado variable y presencia de fistulas en los casos que dicha no-unión sea producto de una osteomielitis. La hipótesis del presente trabajo es que las Células Madre Mesenquimales (MSC) trasplantadas sobre un defecto óseo podría promover la regeneración. El objetivo fue evaluar el tratamiento con MSC derivadas de tejido adiposo (MSC-TA) alogénicas en un canino hembra, raza greyhound “galgo”, 3 años de edad, con una no-unión de radio del miembro izquierdo, producto de una fractura expuesta, que derivó en una osteomielitis crónica. La terapia celular consistió en 5 inyecciones percutáneas sobre el defecto óseo, con 2 x10 6 MSC-TA por implante, una vez por semana. En 5 semanas se culminó el tratamiento regenerativo con un total de 10 x10 6 MSC- TA alogénicas. El paciente fue evaluado clínica y radiológicamente durante 16 semanas. Los resultados fueron mejoría clínica con retorno a la funcionalidad del miembro, debido a la resolución del proceso de osteomielitis con cese del dolor y ganancia de masa muscular. Radiológicamente desaparecieron los signos de osteomielitis. Se concluye que la terapia con MSC-TA alogénicas sobre la no-unión contribuyó al retorno funcional del miembro afectado y fue mitigado el proceso de osteomielitis con una terapia mínimamente invasiva. Fue segura su utilización, porque no existió evidencia de rechazo a los aloimplantes. Creemos que la terapia celular para reparación de defectos óseos en pequeños animales es una alternativa futura muy prometedora.
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Evaluación in vitro del potencial neuroprotector de las células madre mesenquimales sobre los fotorreceptores

Evaluación in vitro del potencial neuroprotector de las células madre mesenquimales sobre los fotorreceptores

La degeneración de los fotorreceptores (FR) es un proceso en el cuál confluyen diversas enfermedades neurodegenerativas de la retina como son la degeneración macular asociada a edad o la retinitis pigmentosa. Enfermedades que representan unas de las principales causas de ceguera a nivel mundial ya que actualmente carecen de un tratamiento realmente efectivo. Las terapias avanzadas se muestran como una alternativa para el tratamiento de este tipo de patologías; entre ellas, la terapia celular mediada por factores paracrinos se perfila como la alternativa más viable. En este sentido, la utilización de células madre mesenquimales (MSCs) podría frenar la degeneración que sufren los FR retinianos en este tipo de patologías. Por ello éste trabajo se planteó el estudio inmunohistoquímico de los FR tras el cocultivo de la retina con las MSCs y el análisis del secretoma proteico tras el cocultivo. Los resultados del presente trabajo mostraron como las MSCs tenían la capacidad de frenar la neurodegeneración de la capa de FR de la retina. Lo que sugiere su posible futura aplicación en tratamientos de terapia celular destinados a pacientes que sufren distrofias retinianas que cursan con la degeneración de los FR. También se muestra como el efecto neuroprotector desarrollado por las MSCs se podría basar en la secreción de factores proteicos por parte de las MSCs, que estarían destinados a contrarrestar los procesos típicos de la degeneración retiniana. Todo ello sienta las bases para, en un futuro, elaborar terapias neuroprotectoras basadas en la combinación de factores neuroprotectores procedentes de las MSCs.
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Diferenciación a oligodendrocitos de células madre mesenquimales humanas originadas en tejido adiposo.

Diferenciación a oligodendrocitos de células madre mesenquimales humanas originadas en tejido adiposo.

considerando su potencial para formar la mielina, promover y orientar el crecimiento axonal y restaurar la anatomía y función de las regiones lesionadas. Además de que las CMMH autólogas localizan el sitio lesionado, se implantan en él y proliferan (homing), se sabe ahora que las CMMH secretan factores tróficos, que pueden tener efectos neuroprotectores o promover la plasticidad en la médula espinal. Por lo tanto, los efectos benéficos de la terapia celular con CMMH son multifactoriales y, a menudo, difíciles de atribuir a un sólo mecanismo. El beneficio neurológico mostrado en modelos de roedores se considera como evidencia de que la terapia celular tiene potencial terapéutico en LME en humanos; sin embargo, la mayoría de estos estudios emplean células de ratón; que por ahora, no es factible implantar en seres humanos. Así como el número de estudios en los que las células humanas han sido puestas a prueba en modelos de roedores es notablemente bajo [35] [4].
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Aislamiento y caracterización de células madre mesenquimales de caninos, equinos y felinos en Uruguay

Aislamiento y caracterización de células madre mesenquimales de caninos, equinos y felinos en Uruguay

En el presente trabajo, se utilizó el término de CMM para todas las especies, dado que se cumplieron las recomendaciones de la International Society of Cellular Therapy (ISCT) para animales domésticos (Bourin y col., 2013), debido a que mostraron mor- fología fibroblástica, adherencia al plástico, capacidad de formar colonias y potencial de tridiferenciación in vitro (linajes: adipo- so, cartilaginoso y óseo). El criterio de referencia para estas es- pecies es la prueba de tridiferenciación in vitro (Dominici y col., 2006). Sin embargo, los primeros trabajos sobre terapia celular en especies domésticas comenzaron por describir aplicaciones terapéuticas de “CMM” sin una adecuada caracterización (Arin- zeh y col., 2003; Bruder y col., 1998; de Mattos Carvalho y col., 2011; Pacini y col., 2007). Posteriormente, en consecuencia, a las recomendaciones de la ISCT aparecieron trabajos enfocados en la caracterización celular de estas especies de interés veteri- nario (Clark y col., 2017; Hillmann y col., 2016; Kang y col., 2012). La importancia de la adecuada caracterización permite estandarizar las terapias celulares, ya que sin una mínima carac- terización de las células utilizadas es difícil atribuirle los resul- tados beneficiosos a una población celular indefinida y también dificulta su reproducibilidad experimental (Bourin y col., 2013; Hoffman y Dow, 2016).
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TítuloInmortalización de células madre mesenquimales humanas con el antígeno T del virus SV40

TítuloInmortalización de células madre mesenquimales humanas con el antígeno T del virus SV40

3. TERAPIA CELULAR Y REGENERACIÓN DEL CARTÍLAGO ARTICULAR. La terapia celular ofrece la posibilidad de regenerar los tejidos dañados o perdidos para restaurar su estructura y función original. Así, en el caso de la artrosis ofrece una solución a largo plazo para regenerar el cartílago, aliviar los síntomas y retrasar la progresión de la enfermedad (Zhang et al., 2016). Muchos de los mecanismos que causan los síntomas y la fisiopatología de la artrosis se pueden revertir mediante la aplicación de terapias celulares y, de hecho, se han utilizado condrocitos autólogos para la regeneración del cartílago. Sin embargo, este tratamiento presenta varios inconvenientes, como el número limitado de cé lulas disponibles, la necesidad de realizar múltiples intervenciones quirúrgicas, la des- diferenciación de los condrocitos a fibroblastos durante su expansión en cultivo y la lesión en el sitio donador debida a la extracción de cartílago (Gupta et al., 2012; Makris et al., 2015). Las CMMs se consideran una fuente celular más adecuada que los condrocitos del cartílago articular, ya que pueden obtenerse fácilmente a partir de varios tejidos, como la médula ósea, y tienen una alta tasa de proliferación, capacidad de diferenciación condrogénica y actividad inmunosupresora. Los resultados preliminares demuestran que la terapia con CMMs es eficaz en cuanto a la reducción del dolor y la recuperación de la función de la articulación en el tratamiento de la artrosis (Freitag et al., 2016; Zhang et al., 2016).
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Estudios en neurociencias: aportes para la investigación en cultivo de células madre mesenquimales

Estudios en neurociencias: aportes para la investigación en cultivo de células madre mesenquimales

plazar células y tejidos dañados afectados de manera congénita, por enfermedad degenerativa o mediante trauma. En tales procedimientos las MSC son administra- das a los pacientes a través de la sangre o directamente en el tejido dañado. El uso de la terapia celular con MSC es actual- mente tópico de debate; sin embargo, debido a sus tres propiedades biológicas; alta diferenciación, tropismo y capacidad inmunorreguladora. Las MSC son can- didatas potenciales en terapia celular aplicable a muchas enfermedades, tales como enfermedad del injerto contra el huésped, enfermedades cardiovas- culares y del cartílago, enfermedades autoinmunes; diabetes tipo I, artritis reumatoidea, esclerosis múltiple, lupus eritomatoso sistémico, etcétera (Castro- Marreza et al., 2015).
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Revisión: uso de células madre mesenquimales en terapias oftalmológicas veterinarias

Revisión: uso de células madre mesenquimales en terapias oftalmológicas veterinarias

Conociendo ya su potencial de acción las SC se pueden clasificar según su origen en SC embrionarias y SC somáticas o adultas, respectivamente las primeras corresponden a células totipotenciales derivadas de la masa celular interna de un embrión al estado de blastocito por lo que numerosas investigaciones se han centrado en estas células para la producción de distintos tipos de tejidos e incluso de órganos simples, así como en la incorporación de genes foráneos, lo que las convierte en idóneas para la terapia génica paliativa y en una firme promesa para la medicina futura, por otro parte las SC somáticas o adultas ASCs corresponden a progenitores multipotenciales que pueden renovarse constantemente y dar lugar a células especializadas capaces de reparar distintos tipos de lesiones y renovar células seniles, presentando una gran versatilidad biológica, principalmente por su capacidad de alterar drásticamente el fenotipo en respuesta a los cambios del microambiente donde se estén desarrollando. (Acevedo & Cortés, 2008) Todos los tipos de células madre son rigurosamente estudiados debidos a sus beneficios, así como el epitelio olfativo
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Modulación de la capacidad de la respuesta reparadora de las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo.

Modulación de la capacidad de la respuesta reparadora de las células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo.

Las ESCs derivan del blastocisto y poseen dos características principales: i, son pluripotentes, es decir son capaces de diferenciarse a distintos tipos celulares procedentes de cualquiera de las tres capas germinales (endodermo, mesodermo y ectodermo) y ii, bajo unas condiciones determinadas son capaces de proliferar indefinidamente (Ying y cols., 2003). Sin embargo, el dilema ético que supone la destrucción de un embrión humano y los problemas asociados a la seguridad de la terapia basada en ESCs son los principales factores que han ralentizado el desarrollo de terapias clínicas con dichas células. La pluripotencia de dichas células es un arma de doble filo; la misma plasticidad que permite a las ESCs generar cientos de tipos celulares diferentes también hace que sea difícil controlar su proliferación, su potencial de diferenciación y de tumorigenicidad en el trasplante in vivo (Nussbaum y cols., 2007). Por esta razón, la mayoría de los estudios con este tipo celular se centran en modelos animales, aunque dependiendo de la legislación de cada país, existe una regulación diferente en cuanto a la investigación con ESCs (De Trizio y Brennan, 2004; Volarevic y
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La terapia con células madre en la degeneración del epitelio pigmentario de la retina

La terapia con células madre en la degeneración del epitelio pigmentario de la retina

Las enfermedades retinianas constituyen un grupo de patologías de gran impacto en la sociedad actual. Algunas entidades, como la degeneración macular asociada a la edad (DMAE), primera causa actual de ceguera en el mundo occidental, la enfermedad de Stargardt y la retinitis pigmentaria, comparten una alteración histológica común, la degeneración del epitelio pigmentario de la retina (EPR). Actualmente, no existe tratamiento para todas ellas, y las opciones terapéuticas de las que disponemos, no siempre son efectivas o no llegan a producir la completa recuperación, además de suponer una gran carga asistencial y un elevado coste. Ante esta situación surge la necesidad de investigar sobre la terapia con células madre para lograr la restauración o sustitución del EPR. Las células madre se presentan como una alternativa terapéutica para estos pacientes, que está mostrando resultados prometedores. En este trabajo se realiza, en primer lugar un resumen sobre las generalidades de estas patologías, para después hacer un recorrido por la trayectoria de la terapia celular en la patología retiniana en los últimos años. Se describen los hallazgos principales en cuanto a diferentes tipos celulares: células madre embrionarias, fetales, de cordón umbilical y hematopoyéticas y mesenquimales procedentes de médula ósea. Se comentan además algunas de las investigaciones y ensayos clínicos más significativos que se están llevando a cabo actualmente alrededor de todo el mundo.
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Estudio clinico de terapia celular autologa con células madre adultas expandidas ex vivo, en el tratamiento de la osteonecrosis de la cabeza femoral

Estudio clinico de terapia celular autologa con células madre adultas expandidas ex vivo, en el tratamiento de la osteonecrosis de la cabeza femoral

procesado y multiplicación de las células recolectadas de MO usando el procedimiento de XCELIA - División Terapias Avanzadas del BST dura 21 días (desde la obtención de la MO hasta la obtención de XCEL-MT-OSTEO-ALPHA). Las células mononucleares (CMN) se separan mediante gradiente de densidad con Ficoll. Posteriormente y de forma previa a la siembra se lleva a cabo un estudio de viabilidad celular. Comprobado el buen estado de las células éstas se siembran en frascos de cultivo en medio DMEM suplementado con 10% de suero humano (SH). Durante el cultivo se efectúan 2 procesos de tripsinización o pases, que tienen como objetivo el multiplicar y purificar la estirpe celular. Al finalizar la etapa de cultivo se realiza la caracterización de las células obtenidas mediante estudios inmunofenotípicos por citometría de flujo, utilizándose para ello los marcadores establecidos para este tipo de células debiendo resultar un fenotipo celular positivo para las células mesenquimales.
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Aplicación de células madre estromales mesenquimales en ortopedia canina

Aplicación de células madre estromales mesenquimales en ortopedia canina

Liu y col. en el año 2013 implantaron MSC alogénicas derivadas de tejido adiposo en un modelo canino con gran pérdida de hueso en el cráneo sin terapia inmunosupresora. Como resultado observaron que la regeneración ósea se da de la misma forma que la obtenida con CM autólogas y no observaron reacciones inflamatorias locales ni sistémicas. Estos mismos resultados fueron obtenidos por Liningston y col. diez años antes en un estudio similar realizado en caninos con la diferencia de haber utilizado medula ósea como fuente de CM. Ellos encontraron que las células permanecían viables ocho semanas después de ser implantadas. En el año 2009 Granero-Moto y sus colaboradores realizaron una experiencia donde inyectaron de forma sistémica MSC alogénicas derivadas de MO en ratones con fractura de tibia. Encontraron que las células una vez que llegan al nicho expresan una proteína iniciadora de la reparación ósea llamada BMP-2 que es la encargada de dirigir la diferenciación de las MSC hacia osteoblastos. Ya que las células fueron implantadas de forma i/v, los científicos comprobaron que migran hacia la zona de la injuria gracias al receptor para quimiocina CXCR4 presente en la superficie celular que se une a su ligando, la quimiocina SDF-1 quien es liberada cuando el tejido óseo es dañado. Sin embargo hay discrepancias en cuanto a si las células madre realmente expresan el receptor CXCR4.Esto puede estar relacionado a los tiempos de cultivo y pasajes celulares, ya que a mayor cantidad de pasajes la expresión del receptor es cada vez menor y por lo tanto la habilidad de las MSC para llegar al sitio a reparar. La solución que vieron los autores fue utilizar cultivos sin haber sufrido pasaje alguno.
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Células madre en terapia celular cardíaca

Células madre en terapia celular cardíaca

este tipo celular no es tanto su capacidad de diferenciarse a car- diomiocitos, como su efecto paracrino, que mediante secreción de citoquinas promueve la supervivencia, crecimiento y diferen- ciación de otros tipos celulares en el área de infarto; además po- seen no solo bajo potencial inmunogénico, sino que tienen cierta capacidad de inmunosupresión.(40) El tejido adiposo derivado del mesénquima embrionario contiene gran cantidad de CMMs, células progenitoras endoteliales y células adiposas. Los datos ex- perimentales sugieren que las células derivadas de tejidos adipo- so y mesenquimales pueden transdiferenciarse en células con las características de cardiomiocitos e incluso en vasos sanguíneos, o al menos en tejidos neovasculares (41,42). El uso de células adipo- sas es muy atractivo porque el acceso a ellas es fácil y se encuen- tran en elevada cantidad en prácticamente todos los individuos (43). En 2009, Hare JM. Y cols. (44) realizan un ensayo aleatoriza- do, doble ciego y prospectivo, en el que estudiaron la seguridad y la eficacia de la terapia intravenosa con CMMs alogénicas aisladas de la médula ósea (hCMMs) en pacientes con IAM (n=53). Las tasas de eventos adversos fueron similares entre el grupo tratado con hCMMs (5,3 por paciente) y el tratado con placebo (7,0 por paciente), y los índices de función renal, hepática, y la hematolo- gía no fueron diferentes. La monitorización electrocardiográfica ambulatoria demostró una reducción de episodios de taquicardia ventricular (p = 0,025), y las pruebas de función pulmonar de- mostraron mejoras en el volumen espiratorio forzado en 1 s (p = 0,003) en los pacientes tratados con hCMMs. La puntuación de los síntomas globales en todos los pacientes (p = 0,027) y la fracción de eyección en el subgrupo en los pacientes con IAM anterior fueron significativamente mejor en pacientes tratados con hCMMs frente a los tratados con placebo. Se comprobó
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