Antecedentes en Olea europaea

Entre los marcadores utilizados en olivo, los microsatélites se han convertido en los marcadores por excelencia, dada su naturaleza codominante, capacidad discriminante y repetitividad entre laboratorios. El alto número de microsatélites disponible actualmente permite su utilización rutinaria en estudios de recursos genéticos en olivos y en programas de mejoramiento según Trujillo et al. (2006). En Olea europaea, estos marcadores han sido usado en diferentes aplicaciones como en la discriminación de cultivares Sarri et al., Fendri et al., citados por Bracci (2011), como en estudios de relaciones entre olivos silvestres y cultivados (Belaj et al., citados por Bracci, 2011).

Tratándose de una especie con gran diversidad como el olivo, las tres técnicas (RAPDs, AFLPs, SSRs) se pueden utilizar con éxito para estudios de diversidad genética y caracterización varietal (Belaj et al., 2003). Sin embargo, para la identificación de variedades a efectos de certificación varietal, los SSRs ofrecen la facilidad de documentar y compartir sus resultados (Belaj et al., 2003) y mayores ventajas dada su gran reproducibilidad Belaj et al. (2003), sea en el mismo laboratorio o en diferentes laboratorios que realizen experimentos idénticos Belaj et al. (2004). Ambos los AFLPs (Vos et al., citados por Belaj et al., 2003) y los RAPDs (Fabbri et al., Mekuria et al., Gemas et al., Gonzalo- Claros et al., Hess et al., Belaj et al., Besnard et al., Sanz-Cortés et al., citados por Belaj et al., 2003), son muy eficientes para el estudio de las relaciones

genéticas en olivo. Debido a su gran capacidad los AFLPs son muy eficaces para muchas aplicaciones en olivo, pero su compleja técnica limita su utilización Fendri (2008). Los marcadores RAPD seguirán siendo una buena opción para estudios de diversidad genética, clarificación de sinonimias y homonimias en olivo, por su sencillez y el bajo coste pero su uso se verá limitado en el futuro debido a la falta de consistencia entre distintos laboratorios (Jones et al., citados por Belaj et al., 2003).

Los marcadores moleculares RAPDs, AFLPs y SSRs fueron comparados en cuanto a su información y eficiencia en estudios de diversidad genética y relaciones entre treinta y dos cultivares de olivo en Italia y España. El mayor nivel de polimorfismo detectado por los marcadores SSRs (más que con RAPDs y AFLPs), destacan su capacidad de discriminación según Belaj et al. (2003). Este resultado está de acuerdo con otros estudios, donde los SSRs fueron comparados con otros sistemas de marcadores (Powell et al., Pejic et al., Belaj et al., citados por Taamalli et al., 2006). Estos marcadores fueron capaces de discriminar efectivamente varios genotipos, pero solamente los SSRs fueron capaz de diferenciar los cultivares “Frantoio” y “Cellina” (Belaj et al., 2003). La gran variabilidad observada en loci SSRs, fue la esperada a causa del único mecanismo por el cual esta variación se genera: deslizamiento durante la replicación, que ocurre más frecuentemente que mutaciones sencillas de nucleótidos y eventos de inserción y delección, los cuales generan el polimorfismo detectable por análisis AFLP (Powell et al., Melbourne et al., citados por Taamalli et al., 2006).

En previo reporte de la transferibilidad de los SSRs dentro de la familia Oleáceas (Lefort et al., citados por Rallo et al., 2003) se demostró que loci SSRs desarrollados para Fraxinus estuvieron presentes en varias taxa dentro del género Olea Rallo et al. (2003).Tres microsatélites aislados de Fraxinus

excelsior L. ha sido exitosamente aplicado en el olivo (Lefort et al., citados por

Cipriani et al., 2002).Treinta microsatélites aislados de olivo, usando bibliotecas genómicas enriquecidas en repeticiones (AC) y (AG) y aplicados a una lista de 13 cultivos de diferentes regiones de Italia, se han usado para evaluar el grado de polimorfismo de estos marcadores. Todos los cultivares fueron fácilmente separados unos de otros. Se resolvieron dos problemas de sinonimia “Frantoio” y “Casaliva” que son considerados muy similares. Frecuentemente los cultivares “Leccino’’ y ‘’Less’’ son considerados algunas veces un mismo cultivar y a partir de diferencias mostradas en 22 de los 28 loci polimórficos por lo que esa posibilidad puede ser excluido. El alto valor de diversidad genética (h) y el poder de discriminación (PD) encontrados en muchos de los loci microsatélites estudiados, los convierte en una herramienta válida para discriminar entre los cultivares que se propagan corrientemente (Cipriani et al., 2002).

Cuatro microsatélites, IAS-oli11, IAS-oli12, IAS-oli17, IAS-oli22, desarrollados por el Instituto de Agricultura Sostenible (CSIC) de Córdoba, España, fueron utilizados para identificar genotipos pertenecientes al olivar de dicha provincia. Los perfiles electroforéticos generados por las accesiones de los cultivares Arbequina y Frantoio fueron similares a los obtenidos con las muestras de referencia de CSIC (Córdoba), pero no se pudo verificar identidad entre las muestras de referencia con las colectadas de Empeltre y Manzanilla. A su vez, se confirmó la presunta sinonimia entre Frantoio y Oblonga. Las muestras locales de Nevadillo no mostraron diferencias entre sí aunque el perfil de resultados de microsatélites fue distinto al de Picual, cultivar considerado como sinónimo. A partir de esta serie de resultados se consideró la necesidad de profundizar los estudios tendientes a establecer la correcta identidad de los materiales locales cuyos perfiles microsatélites presentaron diferencias con los materiales de referencia y confirmaron la utilidad de los microsatélites como herramienta para la identificación y autenticación varietal (Taborda et al., 2006).

Aplicando cinco microsatélites desarrollados para olivo, fueron estudiados 33 genotipos de 15 especies de Olea. Al menos doce de ellas fueron exitosamente amplificadas para los cuatro loci más polimórficos. El polimorfismo se encontró tanto a nivel inter como intra específico, confirmando su utilidad como una herramienta útil para estudios de biodiversidad. La identificación de cultivares pudo ser lograda a través de dichos microsatélites en un total de 46 cultivares. El 95% de alelos fue identificado con sólo tres microsatélites (Rallo et al., 2002).

Posteriormente con nueve pares de cebadores SSR se analizaron en 35 cultivares de España e Italia de interés comercial. Todos los microsatélites fueron polimórficos con una media de 7,5 alelos por locus, con un poder de discriminación (PD) medio de 0,79. El conjunto de microsatélites aplicados discriminó todos los cultivares estudiados. La combinación conjunta de tres de ellos, UDO99-009, UDO99-043 y UDO99-14 hizo posible la identificación de todos los cultivares incluidos en este estudio (Belaj et al., 2004).