Biodisponibilidad de péptidos bioactivos

La funcionalidad de los péptidos bioactivos condicionará la necesidad de que sufran el proceso de absorción o que actúen sin absorberse. Por ejemplo, los péptidos anorexigénicos, que participan en la conducta alimentaria regulando el apetito, desarrollan su función en la luz intestinal. Del mismo modo, péptidos con actividad antitumoral frente a cáncer de colon, podrían también ejercer su acción sin absorberse. Otros en cambio, requieren no solamente ser absorbidos por el intestino sino, atravesar el epitelio intestinal, pasar a la circulación sistémica y dirigirse a los sitios en los que manifiesten su acción. Como ejemplos de este tipo de péptidos, podemos mencionar los antioxidantes y los antihipertensivos. Los péptidos antitrombóticos deben ser capaces de atravesar la barrera intestinal y llegar a la circulación sistémica intactos. Para eso deberán resistir las condiciones del estómago, pepsina y su bajo pH, la acción de las proteasas pancreáticas vertidas en el intestino delgado, tripsina, -quimotripsina, elastasa, carboxipeptidasas A y B, la actividad de las peptidasas de los enterocitos y la de las peptidasas séricas. Para estudiar la resistencia de los péptidos a la digestión gastrointestinal, usualmente se los somete a una digestión in vitro, para determinar su bioactividad una vez digeridos. En la literatura hay ejemplos que demuestran que la digestión no afecta e incluso aumenta la potencial bioactividad de los mismos (Matsui y col, 1999; Minervini y col., 2003). Aunque estos ensayos intentan repetir el camino con el que se encuentran los péptidos provenientes de proteínas alimentarias, no representan completamente el sistema real ni contempla las barreras de absorción.

Se conoce, desde hace mucho tiempo, que las proteínas se absorben como aminoácidos una vez que son totalmente digeridas. Para eso se ponen en juego varios transportadores que están involucrados en este paso, todos ellos mediante el aporte de energía, es decir transporte activo. Algunos son específicos para un aminoácido particular mientras que otros transportan grupos de aminoácidos (Kanai y Hediger, 2004; Verrey y col., 2004). El concepto de que cantidades significativas de pequeños péptidos pueden escapar de la digestión total a aminoácidos e ingresar a la circulación intactos es relativamente nuevo. Adibi (1977) describió y estudió la ruta PepT1 (Peptide transporter 1), a través de la cual pequeños péptidos pueden absorberse a través del epitelio intestinal. PepT1 es un transportador de oligopéptidos que funciona como un co- transportador y se ubica en las membranas del borde de cepillo del epitelio intestinal. Esta proteína juega un rol importante en la absorción y digestión de proteínas dietarias, ya que media el transporte de oligopéptidos desde el lumen hacia los enterocitos (Adibi, 1997). Además de la ruta PepT1, los péptidos pueden ser absorbidos paracelularmente. Este mecanismo serviría para péptidos altamente hidrosolubles que sean capaces de atravesar las uniones estrechas entre enterocitos, sin pasar por dentro de las células (Nellans, 1991). Otra vía posible, la difusión pasiva, podría ser utilizada por péptidos suficientemente hidrofóbicos como para atravesar la bicapa lipídica (Manson y col., 1991). Por último, otro mecanismo que puede involucrar la entrada de los péptidos es la transcitosis. La transcitosis o transporte transcelular consiste en el pasaje de macromoléculas desde un espacio extracelular a otro mediante la formación de vesículas (Tuma y Hubbard, 2003). Así, la estructura particular de cada péptido determinará en última instancia la ruta preferencial de transporte (Vermeirssen y col., 2004).

La sociedad actual enfrenta la necesidad de contar con alimentos que sean más beneficiosos para la salud, que den respuesta al ya establecido crecimiento de la expectativa de vida y sean el vehículo para minimizar la aparición o agravamiento de las enfermedades crónicas que aquejan a sus integrantes. Este escenario ha sido propicio para el surgimiento de los alimentos funcionales ya varios años atrás, lo que ha representado una oportunidad real para contribuir a la mejora de la

calidad de la dieta. La directa consecuencia de estas observaciones ha sido la búsqueda continua de nuevas fuentes de sustancias bioactivas.

En ese marco y junto a los datos que demuestran que las proteínas de las semillas de amaranto presentan algunas propiedades biológicas, nos planteamos entonces el siguiente interrogante: ¿Presentarán las semillas de amaranto péptidos con actividad antitrombótica encriptados en sus proteínas?

BJETIVOS

! "#$ %! & !' ( )! ! * "! "'(( +,! %! &! '(' -& -#. #! & " * /,! *#'$(& )! (* ! 0(' () !*(' ' (' & ,! $ *#& % '! )#! & "! * #ógicamente activos derivados del amaranto. En el marco enunciado nos proponemos estudiar los aspectos básicos de la actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto.

12íficos

En particular, en este trabajo se procederá a:

 Obtener proteínas de amaranto hidrolizadas mediante el empleo de proteasas comerciales, de la activación de una proteasa endógena o usando proteasas involucradas en la digestión gastrointestinal, estableciendo condiciones que nos permitan conseguir aislados proteicos con elevado grado de hidrólisis.

 Estudiar el efecto del pH, temperatura y tiempo de incubación sobre la actividad de la proteasa endógena que acompaña a las proteínas en los aislados proteicos de amaranto.

 Caracterizar las proteínas presentes en los aislados proteicos de amaranto, o en fracciones separadas según su solubilidad en diferentes medios y los hidrolizados proteicos obtenidos, tanto en aspectos estructurales como fisicoquímicos.

 Evaluar los efectos de aislados de amaranto, sus fracciones proteicas y sus hidrolizados sobre la coagulación empleando diversas metodologías345 367 8,34 5 35 8y 9 :

5 35 8.

 Separar los péptidos o polipéptidos biológicamente activos.

 Analizar la biodisponibilidad de los péptidos bioactivos obtenidos, estimando su absorción a través del tracto gastrointestinal empleando ensayos con cultivos celulares.  Secuenciar los péptidos bioactivos encontrados y realizar estudios 34 ; <=3>8 para evaluar sus posibles mecanismos de acción.