CAMBIOS CON LA DIFERENCIACIÓN CELULAR

En vista de que con el progreso de la espermatogénesis se incrementaba el contenido de especies ricas en PUFA en todos los lípidos, se decidió estudiar en el adulto la contribución de la diferenciación celular a estos cambios. Gracias a la posibilidad de aislar espermatocitos en paquiteno (EP) y espermátidas redondas (ER) con un aceptable grado de pureza aplicando modificaciones para la rata (Oresti et al.

2010) de los métodos originalmente diseñados para el ratón (Bellve et al. 1977, Romrell et al. 1976), se investigaron en ellas las subclases de CGP y EGP, así como sus ácidos grasos. También se estudiaron por comparación los cuerpos residuales (CR) que como mencionamos en la introducción derivan de las espermátidas más diferenciadas (paso 19 de la espermiogénesis en la rata). Las fracciones aisladas de los dos tipos de células germinales purificadas, EP y ER, y de los CR satisficieron los criterios generalmente aceptados de viabilidad y pureza para este tipo de preparaciones (89, 96, y 77% para EP, ER y CR, respectivamente) (Fig. 11).

2.3. Fosfolípidos y sus ácidos grasos

Los EP y las ER exhibieron una composición en fosfolípidos (Fig. 12)similar a la de los túbulos seminíferos (TS) de los cuales se aislaron, puesto que ambos tipos celulares, sumados, representan una parte importante de las células presentes en los TS del animal adulto. Los CGP y EGP fueron las dos clases de fosfolípidos mayoritarias en los dos tipos celulares (en promedio, un 55% y 30% del total, respectivamente), mientras fosfolípidos como SM, PS y PI se presentaron en proporciones similares y llamativamente bajas, de alrededor de un 4% cada uno en las células. La cardiolipina, al igual que los lisofosfolípidos, representó un porcentaje aún menor (menos del 3%).

La composición en clases fosfolipídicas de los CR también tuvo como mayoritarios a los CGP y EGP. Una característica interesante de estas partículas fue

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que la PS fue el tercer fosfolípido en importancia cuantitativa en ellas (8,5% del total de los fosfolípidos).

En comparación con los dos tipos de células en estudio, los túbulos seminíferos contuvieron una proporción significativamente mayor de SM (7%) y una proporción ligeramente menor de CGP. Esta diferencia puede atribuirse a las células de Sertoli que están presentes en los túbulos sin fraccionar, las cuales contienen hasta un 20% de sus fosfolípidos en forma de SM, en contraste con el escaso 4% de las células.

Entre las subclases de CGP, la PC fue ampliamente mayoritaria (87-89%), en segundo lugar se ubicó la plasmanilcolina (un 9 %), y en tercer lugar la plasmenilcolina (un 2-4% del total), tanto en los dos tipos de células germinales como en los CR (Fig. 12, panel inferior). En cambio en los EGP de las células, el orden de importancia de las subclases fue significativamente distinto que en los CGP. Así, prevaleciendo la PE (74%), en segundo lugar estuvo la plasmeniletanolamina (12-14%), y muy cercana a ésta estuvo la proporción de plasmaniletanolamina (12%).

En los CR, como en los dos tipos celulares, el orden de importancia de las subclases fue fosfatidil ˃ plasmenil ˃ plasmanil etanolamina, pero, con respecto a las células, los porcentajes de plasmaniletanolamina fueron menores (9%) mientras que los de plasmeniletanolamina fueron mucho mayores (23%), es decir que estas partículas fueron casi 2 veces más ricas en plasmeniletanolamina que las células.

Con relación a los ácidos grasos de las subclases fosfatidil- y plasmenil- de CGP y EGP (Tablas 1 y 2), en concordancia con lo observado al transcurrir el tiempo durante el desarrollo posnatal, conforme avanzó el grado de diferenciación de espermatocito a espermátida las células se enriquecieron en PUFA, en especial el 22:5n-6.

En EP, los dos fosfolípidos con uniones ésteres, PC y PE, se asemejaron entre sí en que mostraron un porcentaje mayor de 20:4n-6 que de 22:5n-6 (20:4 >22:5). Por su parte, los mismos dos GPL de las ER se asemejaron entre sí en que alcanzaron proporciones muy parecidas de estos dos PUFA (20:4 ≈ 22:5). En contraste, los dos plasmalógenos, plasmenilcolina y plasmeniletanolamina, presentaron una proporción considerablemente mayor de 22:5n-6 que de 20:4n-6 (22:5 >> 20:4) en ambos tipos celulares. Llamativamente, los CR contuvieron una proporción de PUFA aún mayor que la de las células estudiadas, en especial en los dos plasmalógenos.

En la Fig. 13 se resumen gráficamente los contrastes mencionados en el 20:4n-6 y el 22:5n-6. Confrontando primero túbulos seminíferos con células, resultó evidente que los dos PUFA fueron proporcionalmente más abundantes en los GPL de estas

Resultados Capítulo I

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últimas. Como ya mencionamos, esto es consistente con el hecho de que los túbulos contienen células de Sertoli, las cuales son más pobres en ellos que las células germinales (Beckman & Coniglio 1979). Comparando ahora las células entre sí, la proporción de 22:5n-6 se incrementó mucho con el progreso de la diferenciación mientras la de 20:4n-6 bajó en las cuatro subclases, muy especialmente en los dos plasmalógenos.

Siguiendo el siguiente orden EP→ ER → CR, la relación 22:5n-6 / 20:4n-6 pudo calcularse, respectivamente, en 0.5, 1 y 4 en PC y 0.8, 1.0 y 1.2 en PE, mientras que en los correspondientes plasmalógenos esa relación fue de 2, 4, y 8 en plasmenilcolina y 4, 10, y 60 en plasmeniletanolamina. Por lo tanto, la fracción de los CR no sólo mostró la más alta relación entre plasmenil y fosfatidil subclases en CGP y EGP, sino también la más alta relación entre 22:5n-6 y 20:4n-6 en las cuatro subclases estudiadas.

2.2. Lípidos neutros y sus ácidos grasos

La Tabla 3 compara el contenido de TAG y TUE, así como de EC, en los dos tipos celulares y en los CR. La concentración de TAG aumentó con la diferenciación de espermatocito a espermátida, y resultó mucho más alta en los cuerpos residuales. Este hecho señala que los TAG son componentes importantes de las células espermatogénicas, y que su contenido aumenta con su grado de diferenciación.

En contraste con los TAG, los TUE, así como los EC, fueron lípidos minoritarios tanto en las células germinales como en los CR, y con tendencia a decrecer con la diferenciación celular. El hecho de que el contenido de estos lípidos fuera significativamente menor en las células espermatogénicas que en los túbulos seminíferos, en los que están presentes las células de Sertoli, permite pensar que éstas últimas, si bien no necesariamente las únicas, son la fuente principal de TUE y de EC intratubulares.

Con el progreso de la diferenciación, los TAG aumentaron su porcentaje de 22:5n-6 (Tabla 4) y de PUFA más largos, tal como los GPL (Tablas 1 y 2), en el orden EP → ER → CR. Por su parte, los minoritarios TUE detectados en las células germinales tendieron a aumentar levemente su 22:5n-6 pero a disminuir sus PUFA de 24 carbonos y de más larga cadena, entre ellos el 28:5n-6 o el 30:5 n-6 con la diferenciación. Los EC, llamativamente, contuvieron más 28:5n-6 que 22:5n-6 en espermatocitos en paquiteno, tendiendo ambos PUFA a disminuir con la diferenciación (Tabla 4).

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3. EFECTOS DE LA EXPOSICIÓN A EPISODIOS INTERMITENTES DE