Colecta de datos conductuales

El periodo de muestreo se realizó durante los meses de abril a diciembre del 2014. Las observaciones de los individuos se realizaron cuatro días a la semana, dos veces por mes en horarios alternados (matutino de 7:00 a 12:00 y vespertino de 12:00 a 17:00). Para el registro conductual, se utilizó el método focal-animal propuesto por Altmann (1974), en combinación con un muestreo de conducta continuo, por periodos de 10 minutos. Antes del inicio del estudio, los animales fueron habituados a la presencia del observador por un periodo de solo ocho días, puesto que ya habían sido objeto de observaciones previas. El orden de seguimiento del grupo fue dirigido para balancear el número de minutos registrados por individuo, los cuales fueron buscados (e identificados) visualmente a través de binoculares.

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Se empleó una hoja de registro, en la cual se anotó la hora de inicio y término de la alimentación (expresado en horas, minutos y segundos). Se consideró como inicio, el momento en el que el focal tomó alguna parte vegetal y la introdujo a su boca con fines alimenticios. Se registró la especie y la parte vegetal (hoja joven, hoja madura, fruto maduro, fruto inmaduro) que el focal consumió en el momento de la alimentación. Por último, con la ayuda de un asistente de campo (Figura 5), se colectaron muestras (200 g, peso fresco) de las especies vegetales utilizadas como recursos alimenticios por las hembras de aullador (ramas con hojas y frutos). Lo anterior, sirvió para realizar análisis químicos proximales. Cabe señalar, que cada muestra vegetal fue identificada, pesada y secada parcialmente (<40°C) de manera inmediatamente.

30 5.4. Cálculos utilizados para determinar el consumo de alimento

Se realizó el cálculo de la tasa de alimentación, y de la proporción de las partes vegetales consumidas. Para calcular la proporción de la dieta por parte vegetal (PDppv), se analizó el porcentaje de partes vegetales consumidas (Felton et al. 2009).

PDppv= A x 100 / B

PDppv: proporción de la dieta por parte vegetal A: número de partes vegetales consumidas B: total de todas las partes vegetales consumidas

Para calcular la tasa de alimentación (TA) por cada parte vegetal, se observó el número de partes vegetales consumidas por minuto (Felton et al. 2009). Cuando no se pudo observar el número de unidades consumidas, se contaron sólo los minutos invertidos sin estimar la cantidad.

TA= #PV/T

TA: Tasa de alimentación

#PV: Número de partes vegetales consumidas T: 1 minuto

31 5.5. Colecta de muestras alimenticias

La metodología usada en este apartado se hizo de acuerdo a lo propuesto por Rothman et al (2012). Las muestras de los alimentos fueron colectadas de los mismos árboles (200 gramos peso fresco) usados para la alimentación dentro de los cinco días posteriores al consumo, con el fin de mantener el mismo estado fenológico de la planta y la misma configuración nutricional. Estas muestras sirvieron para calcular el porcentaje de materia seca y para la realización de los análisis químicos proximales.

5.5.1. Procesamiento y secado de las muestras alimenticias

Se procesaron las partes vegetales similares a las que los monos eligieron, con el fin de emular la dieta (Rothman et al. 2012). Inmediatamente después de la colecta de las muestras (hojas jóvenes y maduras), estas fueron pesadas y deshidratadas en un lugar seco y oscuro a temperatura ambiente (24°C-25°C). Para el caso de los frutos, estos fueron colectados (se determinó el peso fresco), inmediatamente congelados a -20°C y posteriormente se secaron en un horno eléctrico a una temperatura de 45°C hasta alcanzar un peso constante. En ambos casos, una vez obtenido el secado parcial (90% del peso seco), las muestras fueron pre-molidas en un molino mecánico y posteriormente en un molino eléctrico. Cada muestra fue empaquetada en bolsas herméticas colocando el nombre de la especie y la cantidad obtenida

5.5.2. Análisis químicos proximales

Los análisis químicos proximales fueron realizados en el Laboratorio de Nutrición Animal del Centro Nacional de Investigaciones en Fisiología y Mejora Animal, en

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Querétaro, México siguiendo los lineamientos de la AOAC (1990). Se determinó el contenido químico de las partes y especies vegetales en cuanto a: materia seca, minerales totales, fibra neutro-detergente, fibra ácido-detergente, grasa cruda, nitrógeno, carbohidratos y taninos condensados. Cada muestra fue analizada por duplicado, con un coeficiente de variación < 2. Muestras secas de 2 gramos fueron secadas a 110°C durante 6 horas con lo que se determinó la materia seca (MS). Para el cálculo de la materia orgánica (MO) una muestra de 2 gramos fue incinerada en una mufla a 550°C por 6 horas, por lo que la pérdida de peso representa la materia orgánica.

Muestras parcialmente secas (45°C) de 2 gramos fueron analizadas para su contenido de grasa cruda (GC) por el método modificado de Soxhlet empleando éter

de petróleo (Soxtec 2055 TM_{). El contenido de nitrógeno total se determinó por el}

método de micro-Kjeldahl (Helrich 1990), el cuál fue convertido a proteína cruda (proteína cruda = nitrógeno x factor 6.5). Las muestras se analizaron para fibra neutro-detergente con cenizas residuales (FND: con sulfito de sodio y α-amilasa Sigma A3306), y luego para fibra ácido-detergente (FAD: Van Soest 1991). Carbohidratos (CH) se determinaron a partir de la sumatoria de los minerales totales, fibra neutro-detergente, grasa y proteína menos 100, que equivale al

porcentaje total del ítem (Carbohidratos= 100 – a+b+c+d). Finalmente, para la

determinación de los taninos condensados (TC) se utilizó el ensayo ácido-butanol (Hagerman y Butler 1994).

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Con los datos obtenidos a partir de los análisis químicos, se logró calcular el índice de proteína-fibra para estimar la calidad del alimento, además de calcular el contenido energético de cada ítem consumido.