PLANTAS DE FAENAMIENTO
C. coli jejuni coli y
jejuni Negativo** #* %* #* %* #* %* #* %* 1CT 50 75,76 9 13,64 7 10,60 2CT 14 50 8 28,57 5 17,86 1 3,57 3CT 9 64,29 4 28,57 1 7,14 4CT 5 83,33 0 0 1 16,67 5CT 7 53,85 2 15,38 4 30,77 6CT 3 100 0 0 0 0
* #= número de muestras identificadas, %= Porcentaje de muestras identificadas.
** Muestras que no se tipificaron mediante la PCR múltiple.
Fuente: Investigación Directa
Elaboración: La Autora Los aislamientos en los cuales se identificó dos bandas después de la electroforesis y la banda de 773 pb no era clara, fueron sometidos a una PCR con un set de primers para C. jejuni, como método de confirmación de resultados.
Los antibióticos utilizados en las parvadas de aves que fueron positivas a Campylobaccter spp., fueron agrupados según grupos farmacológicos como se describe en el Cuadro 9. Aquí se puede observar que los grupos farmacológicos más utilizados fueron: quinolonas, nitrofuranos y fenicoles.
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Cuadro 9. Grupos farmacológicos usados en granja previo al faenamiento en
las aislamientos positivos a Campylobacter spp.
Grupos farmacológicos Resultados Generales #* %* Aminoglucósidos 4 3,1 Betalactámicos 6 4,3 Estreptograminas 5 3,8 Fenicoles 35 26,9 Macrólidos 30 23,1 Nitrofuranos 61 46,9 Pleuromutilinas 10 7,7 Tetraciclinas 5 3,8 Quinolonas 82 63,1 Sulfonamidas 2 1,5
* #= número de parvadas positivas que usaron antibiótico, %= Porcentaje de parvadas
positivas que utilizaron antibiótico.
Fuente: Investigación Directa Elaboración: La Autora
Discusión de Resultados
El aislamiento en MCCDA por cultivo directo, ha demostrado ser un método eficaz para el aislamiento de C. jejuni y C. coli. Un estudio para la detección de C. jejuni y C. coli en contenido cecal de broilers usando algunos métodos de cultivo, demostró que el aislamiento por cultivo directo en MCCDA y en agar Karmali detectan entre 102 y 103 UFC g-1, indicando que estos métodos son apropiados para monitorear Campylobacter spp. en heces de pollos (Rodgers, Clifton, Marin, & Vidal, 2010). Al utilizar un modelo Bayesiano para determinar la sensibilidad de los métodos de cultivo para Campylobacter spp. en carne de pollo, se determinó que la sensibilidad del aislamiento bacteriano
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utilizando pre enriquecimiento fue de 41% mientras que la siembra directa fue de 69% (Habib, Sampers, Uyttendaele, De Zutter, & Berkvens, 2008). En otro modelo Bayesiano se estimó que la sensibilidad del cultivo directo de muestras cecales de pollo en MCCDA está entre 64% y 66% (Woldemariam, Bouma, Vemooij, & Stegeman, 2008).
Una investigación en la cual se utilizó PCR múltiple para la identificación de C. coli y C. jejuni de cultivos puros y directamente a partir de muestras de heces en seres humanos demostró que la sensibilidad de la PCR múltiple en muestras de heces en humanos fue de 105 células por ml de heces; mientras que cuando las mismas muestras fueron cultivadas en MCCDA previo a la PCR la sensibilidad fue de 100 células por ml de heces, determinando que el cultivo en MCCDA previo a la PCR es superior en comparación con la purificación directa de ADN al menos al analizar muestras frescas de heces en seres humanos (Persson & Olsen, 2005).
Como resultado a estos estudios se puede concluir que el uso de MCCDA para aislamiento de Campylobacter spp., previo a la PCR múltiple, puede mejorar la sensibilidad de la PCR múltiple.
La PCR múltiple utilizada en el presente estudio, fue evaluada en una investigación con cepas ATCC, en la cual se determinó que la sensibilidad y especificidad para la identificación de C. jejuni es de 93% y 100% respectivamente, mientras que para C. coli estos valores son 100% (On & Jordan, 2003). Estos resultados soportan el uso de esta PCR como método eficaz para la tipificación de C. coli y C. jejuni.
El aislamiento de Campylobacter spp. que se obtuvo en el presente estudio (71,8%), concuerda con resultados obtenidos en otros investigaciones. Así, se ha reportado que la prevalencia media de Campylobacter spp. en la unión Europea es 71,2% (EFSA, 2010), mientras que en Reino Unido es 75,8% (Powell et al., 2012). En Argentina, en un estudio se aisló 62,1% de Campylobacter spp. a partir de contenido cecal de pollos faenados en tres
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plantas de faenamiento (Velilla, Terzolo, & Méndez, 2011). En la provincia de Shandong, China, la prevalencia de Campylobacter spp, en contenido cecal fue 35,9% (Chen et al., 2010). Mientras que en Estados Unidos, en un estudio se determinó la prevalencia en varias parvadas de pollos boiler de muestras fecales en 51,4% (Berghaus et al., 2013). Esta información obtenida en varios países sustenta los resultados obtenidos, al existir una alta prevalencia de Campylobacter spp. a nivel mundial.
En la mayoría de estudios realizados en pollos, la frecuencia de aislamiento de C. jejuni es mayor que la de C. coli. En un estudio en Andalucía en muestras cloacales de pollos en granja, la prevalencia de C. jejuni fue 31,71% y C. coli 6,0% (Torralbo, 2013). Estos resultados concuerdan con resultados de otros autores en los que se ha encontrado 39,5% C. jejuni y 17,7% C. coli en lotes de broiler (Sasaki et al., 2010). En Europa se estimó que la presencia de C. jejuni fue 40,6% y C. coli 31,9% en pollos broiler (EFSA, 2010). Todos estos estudios contrastan con los resultados obtenidos en la presente investigación, sin embargo, en España se detectó mayor prevalencia de C. coli (61,4%) que C. jejuni (38,3%) (EFSA, 2010), la variación de este estudio con otros estudios en países de la unión Europea se puede asociar a los diferentes métodos de muestreo y detección de Campylobacter spp. En un estudio realizado en muestras de ciegos de pollos en Argentina, se identificó el 62,2% de positividad a C. coli y 37,8% a C. jejuni (Velilla et al., 2011). Estos últimos resultados son similares a los obtenidos en el presente estudio en el que se identificó el 67,69% de C. coli, 38,3% de C. jejuni y aislamientos mixtos de C. coli y C. jejuni 13,85%.
En una investigación realizada en Thailandia se atribuyó mayor incidencia de C. coli a la contaminación de carne pollo con carne de cerdo en negocios minoristas (Suzuki & Yamamoto, 2009). Sin embargo, este factor no se puede atribuir a las muestras tomadas en este estudio, pues las plantas de faenamiento en las cuales se tomaron las muestras procesaban exclusivamente pollos broiler.
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Fernández (2011) indica que C. coli ha sido aislado con mayor frecuencia en países Sudaméricanos tanto de seres humanos como de animales, representando el 25% de casos de diarrea en seres humanos producida por especies de Campylobacter. Esta información concuerdan con el alto porcentaje de aislamientos de C. coli obtenido en el presente estudio.
Las diferencias reportadas por varios autores en las proporciones de los aislamientos de C. coli y C. jejuni en diferentes zonas geográficas se podría atribuir a variaciones climáticas, zootécnicas, genéticas bacterianas, etc. Sin embargo, al no existir explicaciones claras sobre estas variaciones, se necesitan estudios epidemiológicos complementarios para determinar los factores a los que se les puede atribuir estas diferencias.
En la presente investigación los aislamientos mixtos de C. jejuni y C. coli representaron el 13,85% de las muestras, lo que concuerda con el rango descrito en otros estudios en los que se reporta infecciones mixtas entre el 11,7 al 19,1% de las muestras estudiadas (Torralbo, 2013; Al Amri, Senok, Yusuf, Al-Mahmeed, & Botta, 2007).
Una de las muestras aisladas como Campylobacter spp, no pudo ser identificada por la PCR múltiple. Otros autores han reportado muestras de Campylobacter spp. que no pudieron ser identificadas como C. jejuni o C. coli (Sasaki et al., 2010). Esto se puede dar porque existen otras especies de Campylobacter termófilas como C. lari, cuya frecuencia de aislamiento en aves es rara. Por ejemplo en Italia se determinó la prevalencia de C. lari en 1,1% de las muestras aisladas de contenido cecal (Di Giannatale et al., 2010).
Según la FAO el riesgo de Campylobacter spp. en pollos broiller, está altamente asociada a la edad de faenamiento (FAO & WHO, 2009). En diversos estudios se menciona que el pico máximo de colonización en aves está entre 42-45 días de vida, debido al estrés que provoca, el retiro de alimento previo al faenameinto, encierro en jaulas y transporte a la planta de
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faenameinto (Velilla et al., 2011). Este dato concuerdan con La edad promedio de faenamiento de las parvadas positivas (44,67 días; S: 3,50) muestreadas en el presente estudio.
En todas las parvadas positivas al aislamiento de Campylobacter spp. se utilizó algunos antibióticos, de los cuales los de mayor uso fueron: quinolonas en el 63,1% de muestras positivas, nitrofuranos en el 46,9% y fenicoles en 26,9%. En varios estudios en países sudamericanos se ha demostrado la existencia de cepas de origen humano y animal resistentes a eritromicina, tetraciclina, ampicilina y quinolonas, siendo la resistencia a quinolonas común en la mayoría de cepas de Campylobacter spp. Así, en Perú se identificó entre 63-78% de cepas resistentes a quinolonas, en Argentina entre 49,1-59,6%, en Bolivia 47%, en Brasil 72,2% y Chile 50% (Fernández, 2011). Probablemente las cepas de C. coli y C. jejuni aisladas en este estudio también presenten fenotipos resistentes a los antibióticos más utilizados, entre ellos las fluroqinolonas, por lo que posteriores estudios sobre la resistencia a antimicrobianos deben ser realizados para estimar el potencial riesgo de estas bacterias en la salud de la población.
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CAPÍTULO V