por el endotelio de los vasos sanguíneos.
Por su parte, el modelo basado en la modificación del gen Tie2 contenido en un BAC, desarrollado durante la realización de este trabajo, presenta una mayor similitud con el nuestro en cuanto al control de la expresión de CreERT2. Sin embargo, la caracterización detallada de dicha línea no ha sido publicada por lo que es difícil comparar su comportamiento en cuanto a expresión, inducibilidad y eficiencia de la recombinación. Finalmente, los modelos de recombinación inducible en el endotelio vascular basados en secuencias de otros genes como Cdh5, Pdgfb y el factor de transcripción SCL (Claxton et al., 2008; Gothert et al., 2004; Monvoisin et al., 2006; Sorensen et al., 2009) son difícilmente comparables con el descrito en la presente memoria dadas las diferencias en las estrategias de caracterización utilizadas en cada línea.
2. Análisis de la expresión de Tie2
Como se indicó anteriormente, la estrategia seguida para la generación del modelo Tie2CreERT2 garantiza que la expresión de la recombinasa inducible esté gobernada por todas las secuencias regulatorias endógenas que dirigen la expresión de Tie2, así pues el modelo generado constituye una herramienta única y de gran precisión para el análisis del patrón de expresión de dicho receptor y para el análisis, mediante trazamiento de linajes, de la diferenciación ulterior de poblaciones celulares que expresan Tie2 en algún momento de su desarrollo.
En sentido general, el análisis del patrón de expresión de Tie2, a juzgar por la detección de eventos de recombinación mediados por Cre mediante líneas trazadoras, permite concluir que dicho receptor se expresa principalmente en el endotelio vascular sanguíneo durante todas las etapas del desarrollo embrionario y postnatal estudiadas. Nuestros resultados además confirman que la expresión de Tie2 en el compartimento vascular sanguíneo durante la edad adulta no es simétrica, siendo mayor en el endotelio de las arteriolas respecto a las vénulas, tal como se había reportado previamente (Anghelina et al., 2005; Mecha Disassa et al., 2008), y en vasos de menor calibre respecto a aquellos de diámetro superior.
2.1 Especificidad por el endotelio vascular sanguíneo
En general se considera que los receptores Tie1 y Tie2 son expresados por las células endoteliales del sistema vascular sanguíneo y linfático. Así pues, hasta la fecha no se ha descrito que ninguna población de células endoteliales exprese de forma específica uno sólo de estos receptores. Las demostraciones de la expresión de Tie2 en el endotelio linfático se basan fundamentalmente en la utilización de anticuerpos (Morisada et al., 2005; Tammela et al., 2005) o de técnicas bioquímicas en células en cultivo (Hamaguchi et al., 2006; Nguyen et al., 2007). Adicionalmente, existen datos que
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sugieren una función in vivo de las angiopoietinas en el desarrollo y mantenimiento de los vasos linfáticos (Gale et al., 2002; Morisada et al., 2005; Tammela et al., 2005), sin embargo, es posible que las angiopoietinas puedan mediar su función en el endotelio linfático a través de receptores distintos a Tie2. Al respecto, cabe destacar que la Ang2 es capaz de dirigir algunos programas celulares señalizando a través de la integrina αVβ1 (Hu et al., 2006) y que el bloqueo de dicha integrina es capaz de inhibir la linfoangiogénesis en algunos modelos experimentales (Okazaki et al., 2009).
Si bien existen publicaciones que detallan la relevancia de Tie1 en el desarrollo de la vasculatura linfática (D'Amico et al., 2010; Qu et al., 2010), la importancia específica de Tie2 en el endotelio vascular linfático no ha sido demostrada y no existen evidencias que permitan concluir si su expresión en dicho linaje es una característica común a todas las células. Adicionalmente, el análisis detallado de la expresión diferencial de Tie1 y Tie2 es complicado por las limitaciones de las sondas moleculares diseñadas para discriminar ambos receptores (Augustin et al., 2009).
Los resultados obtenidos durante la caracterización del modelo Tie2CreERT2 sugieren que la expresión de Tie2 es fundamentalmente específica del endotelio vascular sanguíneo o bien que sus niveles de expresión en el endotelio linfático son demasiado bajos como para inducir la recombinación de una forma eficiente. Ésta última parece la explicación más plausible si se toma en consideración que las únicas evidencias de recombinación en células endoteliales de vasos linfáticos se obtuvieron con protocolos de inducción de larga duración (cinco u ocho semanas de tamoxifeno en la dieta) y en uno de los sistemas de análisis de mayor sensibilidad (tinción X-gal en preparación completa de diafragma y peritoneo). Adicionalmente, los reportes previos basados en la inmunodetección de Tie2 refieren que los niveles de expresión de dicho receptor en el endotelio vascular linfático son menores que los presentes en células endoteliales de vasos sanguíneos (Morisada et al., 2005; Tammela et al., 2005).
La especificidad por el endotelio vascular sanguíneo en el modelo Tie2CreERT2 es una característica establecida desde el desarrollo embrionario. Así pues, tratamientos con tamoxifeno a E10.5 o E12.5 revelan que la práctica totalidad de las células susceptibles de recombinación forman parte o dan origen al endotelio de los vasos sanguíneos, sin que sea posible detectar su presencia en estructuras vasculares linfáticas en el adulto. Previamente se ha descrito que Tie2 se expresa en el endotelio vascular linfático al menos desde E11.5 del desarrollo embrionario en el ratón, aunque a niveles significativamente menores que los detectados en células endoteliales de los vasos sanguíneos, (Morisada et al., 2005); dicho resultado sería compatible con la interpretación, antes apuntada, de que la expresión de Tie2 en el endotelio linfático no es lo suficientemente alta como para dirigir recombinación de manera eficiente en dicho compartimento vascular.
El fenotipo de los ratones knockout para Tie2 provoca letalidad embrionaria entre E10.5 y E12.5 asociada fundamentalmente a una marcada reducción en el número de células endoteliales, defectos en el desarrollo cardíaco y presencia de hemorragias (Dumont et al., 1994). Así pues, si bien Tie2 no es imprescindible para la diferenciación de las primeras células endoteliales y la formación del plexo
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