Evaluación de la actividad inhibitoria de péptido sintéticos

En varios estudios se ha demostrado que existe una alta diversidad genética de cepas de M. bovis en las poblaciones bovinas (Steck et al., 1978; Brennan, 1989; Draper, 1998 Gorocica et al., 2005), lo que respalda los resultados obtenidos en esta tesis, donde se observó variación en la sensibilidad entre cepas, como fue el caso de la cepa 5 sensible a todos los péptidos sintéticos.

Por otra parte, se sabe que la diversidad genética de las cepas no solamente ocurre entre diferentes regiones de México sino también dentro de un mismo rebaño, por lo que el brote de la tuberculosis bovina en un rebaño puede ser casada por múltiples

cepas de M. bovis (Perumaalla et al., 1996).De este modo, se entiende la importancia

de estudios epidemiológicos genéticos de M. bovis, que resultarían una herramienta de

gran utilidad en la búsqueda de un compuesto con actividad sobre esta micobacteria. El haber encontrado actividad de inhibición en el péptido sintético de anémona sobre cepas diferentes de M. bovis, es concordante con trabajos anteriores donde se comprobó actividad antifímica en extractos crudos de anémona (Munro, 2005), por lo que se sugiere continuar con esta línea de investigación.

Finalmente el hecho de haber encontrado, en la revisión de antecedentes, discrepancias entre los datos mostrados por SAGARPA y SENASICA en cuanto al grado de prevalencia de tuberculosis de ganado en México, sugiere que estos criterios deberían cotejarse cuidadosamente de manera paralela, por las implicancias prácticas que conlleva, porque según el grado se aplican diferentes requisitos más o menos rigurosos antes de movilizar los hatos.

Conclusiones

Los procedimientos seguidos con fracciones y subfracciones fueron adecuados, ya que permitieron obtener resultados que apoyan la hipótesis de que el crecimiento de Mycobacterium bovis puede ser inhibido por una o más toxinas del veneno de Conus californicus.

El empleo de péptidos sintéticos, en la medida en que estén disponibles, e independientemente de que provengan de entidades diferentes al género Conus, puede ser un recurso metodológico a tener en cuenta en futuros estudios. La variación que se mostró en la sensibilidad entre cepas refuerza la idea de que estudios epidemiológicos genéticos de M. bovis, resultarían una herramienta de gran utilidad en la búsqueda de un compuesto con actividad sobre esta micobacteria. Los datos sobre el grado de prevalencia de la tuberculosis en el ganado bovino de diferentes regiones de México, ofrecidos por parte de diferentes agencias de gobierno, deberían ser consistentes entre sí, debido a las implicancias prácticas que esto conlleva.

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55 Anexos

Anexo 1. Preparación del medio liquido para M. bovis.

Se pesa 4.7g de medio deshidratado Middlebrook 7H9 sin glicerol y se disuelve en 900ml de agua destilada estéril, se transfiere a matraces Erlenmeyer y se esteriliza a 121 °C, a una presión de 1.3 bars durante 15 minutos. Cuando el medio este frío se adiciona el OADC hasta lograr una concentración final del 10 %. Finalmente se realiza el control de esterilidad incubando el medio a 37°C durante 72h, el medio debe permanecer estéril sino es el caso se debe desechar y preparar nuevo. El medio se conserva a 4°C hasta su utilización.

56

Anexo 2 . Preparación del estándar de Mc. Farland #1 A. Disolución de ácido sulfúrico 1%

Depositar aproximadamente 90mL de agua desionizada en un matraz volumétrico de 100 ml, con una pipeta volumétrica de 1mL agregar 1.0 mL de

H2SO4 concentrado. Aforar a 100ml con agua desionizada y mezclar. Almacenar

en una botella de vidrio con tapón de rosca hasta por un año. B. Disolución de cloruro de bario 1.175 %

Pesar 1.175g de cloruro de bario dihidratado y depositarlo en un matraz volumétrico de 100ml. Añadir aproximadamente 50ml de agua desionizada y mezclar bien para disolver. Aforar a 100ml Con agua desionizasa y mezclar. Almacenar en una botella de vidrio con tapón de rosca hasta por un año.

Para preparar los tubos a las concentraciones deseadas seguir las indicaciones de la tabla.

Concentración de los estándares de la escala de Mc. Farland. Estándar de Mc. Farland. Ba Cl2 1.175% (ml) H2SO4 1% (ml) Número aproximado de bacterias (x106_)/ml 0.5 0.5 99.5 1 1 99 300 2 2 98 600 3 3 97 900 4 4 96 1200 5 5 95 1500 6 6 94 1800 7 7 93 2100 8 8 92 2400 9 9 91 2700 10 10 90 3000