Extractos de flor

La ilustración 37 ilustración presenta la comparación entre las especies G.elegans, A.satureioides y A.bogotenis de los extractos acetonicos de flor. Se observa, que del minuto 50 al minuto 80, se encuentra las señales de HPLC-DAD más intensas no identificadas que están presentan en los tres perfiles. Al analizar los cromatogramas individualmente se encuentran señales que no fueron identificadas, aunque por su intensidad y resolución en el perfil cromatográfico pueden ser marcadores importante de la especie, como es el caso de los extractos de flor de G. elegans con señales en tiempos de retención en 45,0, 47,3, 48,5 y 55,4 min, las cuales no están presentes en las especies A. bogotensis y A.satureioides. En la región del minuto 80 al 100, solamente se observa similitud entre los perfiles de las especies del genero Achyrocline.

Ilustración 37 . Cromatográma comparativo extractos de flor G.elegans, A.satureioides y A.bogotenis Las condiciones cromatográficas corresponden a las descritas en la

metodología 5.5.2 Extractos de hoja.

En los extractos cetónicos de hoja ilustración 38, la región comprendida del minuto 40 al 60 se presentaron dos señales definidas y con alta intensidad en el mismo tiempo de retención para las especies A.satureioides y A. bogotensis. Sin embargo, en el perfil cromatográfico de la especie G.elegans estas señales presentan un corrimiento y de igual forma una menor intensidad. En la región descrita del minuto 70 en adelante hay semejanza entre los perfiles de las especie A. satureioides y A. bogotensis, con excepción de la especie G.elegans en donde no se encuentran las mismas señales. Estas señales por encontrarse en esta región del perfil cromatográfico posiblemente sean atribuibles a flavonoides de mediana polaridad.

Ilustración 38.Cromatográma comparativo extractos de hoja A. Satureioides, A Bogotensis y G. Elegans. Las condiciones cromatográficas corresponden a las descritas en la

metodología

6 CONCLUSIONES

Él estudió cromatográfico por HPL-DAD bajo las condiciones de una columna C18 (250 nm x 4,6 mm) con temperatura controlada a 20°C, un detector de arreglo de diodos con elección de longitud de onda a 254 nm, flujo de 1 ml/min, un volumen de inyección 99 µL y bajo un gradiente de composición de Metanol-Ácido acético (2%), logro la separación de 8 compuestos polifenoles (7 flavonoides y 1 polifenol).

La metodología analítica por HPLC bajo las condiciones anteriormente descritas permitió la identificación de por lo menos uno de los 7 flavonoides, en los extractos cetónicos de hoja y flor para las especies estudiadas, específicamente en la especie Gnaphalium elegans los flavonoides encontrados fueron; Rutina (T.R 58,0 min), Quercetina (T.R 68,0 min), 5,7-dihidroxiflavanona (T.R 87,0 min) , 3,5- dihidroxi-6,7,8-trimetoxiflavona (T.R 91,0 min) y 5,7-dihidroxi-3,6,8-trimetoxiflavona (T.R 94,0 min); para la especie Achyrocline satureioides los flavonoides identificados fueron Rutina (T.R 58,0 min), Quercetina (T.R 68,0 min), 3,5- dihidroxi-7-metoxiflavonona (T.R 88,3 min) , 3,5-dihidroxi-6,7,8-trimetoxiflavona (T.R 91,0 min) y 5,7-dihidroxi-3,6,8-trimetoxiflavona (T.R 94,0 min), y en la especie Achyrocline bogotensis los flavonoides reconocidos fueron, Quercetina (T.R 67.5 min), 3,5-dihidroxi-6,7,8-trimetoxiflavona (T.R 91,0 min) y 5,7-dihidroxi-3,6,8- trimetoxiflavona (T.R 94,0 min),

Se realizó una cuantificación preliminar por estándar externo para los flavonoides encontrados, que sirvió como marcador de diferenciación en los contenidos de los flavonoides analizados, en donde el contenido vario en cada una de las especies estudiadas, lo cual puede servir como una herramienta complementaria en la diferenciación de las especies.

Se establecieron patrones cromatográficos que en los cuales se identificaron señales características de cada uno de los extractos trabajados para determinar las diferencias en dichos perfiles que pueden llegar a ser una herramienta en la identificación y diferenciación de las especies pertenecientes incluso al mismo género.

7 RECOMENDACIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos y los perfiles cromatográficos en las especies G.elegans, A.satureiodes y A.bogotenis, se recomienda analizar las señales no identificadas, pero representativas entre cada una de las especies, por un método confirmativo como espectrometría de masas o resonancia magnética nuclear entre otras.

Utilizar las mismas condiciones analíticas e instrumentales desarrolladas en el presente trabajo con un número mayor de muestras y en diferentes especies de los géneros Gnaphalium y Achirocline, con el fin de comparar los perfiles preliminares obtenidos y lograra establecer una huella dactilar para estas especies por análisis computarizado estadístico.

Realizar ensayos de cuantificación bajo curva de calibración a diferentes concentraciones de material (hoja y flor) y hacer adición estándar para la identificación especifica de los patrones.

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9 ANEXOS

Anexo 1. Perfiles cromatográficos de cada uno de los patrones por separado: Catequina, Resveratol, Rutina, Quercetina, 5,7-dihidroxiflavanona, 3,5-dihidroxi-7- metoxiflavonona, 3,5-dihidroxi-6,7,8-trimetoxiflavona, 5,7-dihidroxi-3,6,8- trimetoxiflavona. (8 Páginas).

Anexo 2. Perfiles cromatográficos 5,7-dihidroxiflavanona del patrón de referencia y G. elegans de las 3 réplicas. (4 Páginas).

Anexo 3. Perfiles cromatográficos especie Achyrocline Satureioides hoja de las 3 réplicas (9 Páginas).

Anexo 4. Espectros UV de las señales identificadas de la especie Achyrocline satureiodes hoja (3 Páginas).

Anexo 5. Perfiles cromatográficos especie Achyrocline Satureioides flor de las 3 réplicas (9 Páginas).

Anexo 6. Espectros UV de las señales identificadas de la especie A Achyrocline Satureioides flor (4 Páginas).

Anexo 7. Perfiles cromatográficos especie Achyrocline Bogotensis hoja de las 3 réplicas (8 Páginas).

Anexo 8. Espectros UV de las señales identificadas de la especie Achyrocline Bogotensis hoja (3 Páginas).

Anexo 9. Perfiles cromatográficos especie Achyrocline Bogotensis flor de las 3 réplicas (9 Páginas).

Anexo 10. Espectros UV de las señales identificadas de la especie A Achyrocline Bogotensis flor (1 Páginas).

Anexo 11. Perfiles cromatográficos especie Gnaphalium elegans hoja de las 3 réplicas (7 Páginas).

Anexo 12. Espectros UV de las señales identificadas de la especie Gnaphalium elegans hoja (4 Páginas).

Anexo 13. Perfiles cromatográficos especie Gnaphalium elegans flor de las 3 réplicas (9 Páginas).

Anexo 14 Espectros UV de las señales identificadas de la especie Gnaphalium elegans flor (4 Páginas).

Anexo 15. Perfile cromatográficos sobrepuestos de las 3 réplica para las especie Gnaphalium Elegans, Achyrocline Satureioides y Achyrocline Bogotensis para hoja y flor (6 Páginas).