Identificación de metabolitos secundarios

La presencia de alcaloides es detectada por el reactivo de Dragendorff, el reactivo de Mayer, el reactivo de Hager y el reactivo de Wagner, y los esteroides y triterpenos por las pruebas de Salkowski y Liberman Burchardt. Los flavonoides se identifican mediante prueba de reactivo alcalino, prueba de acetato de plomo, prueba de Shinoda y prueba de reducción de ácido clorhídrico de zinc y saponinas mediante prueba de espuma. Los compuestos fenólicos y los taninos son detectados por la prueba de cloruro férrico y la prueba de acetato de plomo, mientras que los taninos por la prueba de gelatina (57), (5).

El análisis fitoquímico debe comprender cuatro etapas bien definidas y comprende los siguientes ensayos:

- Recolección y clasificación botánica de la especie en estudio. - Extracción, separación y purificación de constituyentes químicos. - Determinación estructural.

- Ensayos farmacológicos 1.6.4.1 Ensayo de Dragendorff

El ensayo de Dragendorff permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides; si hay opalescencia se considera (+), turbidez definida (++) y precipitado (+++) (52).

1.6.4.2 Ensayo de Mayer

Utilizado para la determinación cualitativa de alcaloides y la presencia de dichos metabolitos se reporta si se observa opalescencia (+), turbidez definida (++) y precipitado coposo (+++) (52).

1.6.4.3 Ensayo de Lieberman-Buchard

Permite reconocer en un extracto la presencia de triterpenos y/o esteroide, ambos tipos de productos deben poseer un núcleo de androstrano, generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6. Un ensayo positivo se tiene por un cambio rápido de coloración.

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- Rosado - azul muy rápido

- Verde intenso - visible aunque rápido - Verde oscuro – negro – final de la reacción

La reacción de Liebermann-Burchard es también utilizada para diferenciar las estructuras esteroles de esteroidales, las primeras producen coloraciones azul o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa rojo, rosado o púrpura. Estas coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos, xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes (52).

1.6.4.4 Ensayo de Borntrager

Es útil para detectar la presencia de quinonas, siendo el ensayo positivo cuando la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado, en este caso se reporta (++), o rojo para lo cual se reporta (+++) (52).

1.6.4.5 Ensayo de Espuma

Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpérnica. El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y es persistente por más de 2 minutos (52).

1.6.4.6 Ensayo de Benedict

Permite reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos de un extracto vegetal. Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos. Un ensayo positivo puede dar la siguiente información general (52).

- Desarrollo de una coloración rojo-vino, compuestos fenólicos en general. - Desarrollo de una coloración verde intensa, taninos del tipo

pirocatecólicos.

- Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos 1.6.4.7 Ensayo de Shinoda

Permite reconocer la presencia de flavonoides en el extracto de un vegetal. El ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intenso en todos los casos (52).

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1.7 Actividad Antimicrobiana

La actividad de un agente antiinfeccioso está definida por su espectro antibacteriano, es decir, el conjunto de microorganismos patógenos que se ven afectados por las concentraciones del antibiótico sin causarle toxicidad (59). Los antibióticos son compuestos orgánicos naturales o sintéticos que inhiben o destruyen bacterias u otros microorganismos, generalmente a bajas concentraciones (60) y se comportan como bactericidas y como bacteriostáticos (59).

Como bactericidas producen la muerte de los microorganismos responsables del proceso infeccioso. En este grupo se encuentran los antibióticos β-lactámicos, aminoglucósidos, rifampicina, vancomicina, polimixinas, fosfomicina, quinolonas y nitrofurantoínas (59).

Como bacteriostáticos inhiben el crecimiento bacteriano, aunque el microorganismo permanece viable, de forma que, cuando se suspende el tratamiento, puede volver a recuperarse y multiplicarse. El hecho de que un agente sea bactericida o bacteriostático depende de su mecanismo de acción y, por tanto, de su estructura, pero también contribuyen paralelamente otros factores como:

- Concentración alcanzada en el sitio de la infección - Tipo de bacteria

- Tamaño del inóculo - Tiempo de acción

- Fase de crecimiento de la bacteria (59). 1.7.1 Categorías de antimicrobianos

- Los que poseen una acción bactericida poco relacionada con la concentración.

- Los que poseen actividad bactericida concentración dependiente – como los aminoglucósidos y las fluoroquinolonas.

- Aquellos que se comportan como bacteriostáticos: macrólidos, tetraciclinas y cloranfenicol, entre otros (59)

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La actividad antibacteriana exige una normalización o cuantificación, que se consigue mediante los métodos utilizados in vitro para comprobar la susceptibilidad del microorganismo en relación con el antibiótico. Con estos métodos se define:

- Concentración mínima inhibitoria (CMI): Es la menor concentración de antibiótico capaz de inhibir el crecimiento de 105 _{bacterias en 1 mL de} medio de cultivo, tras 18-24 horas de incubación (59).

- Concentración mínima bactericida (CMB): Es la menor concentración capaz de destruir o matar 105 _{bacterias en 1 mL de medio de cultivo, tras} 18-24 horas de incubación (59).

- Punto de corte se sensibilidad: Es la concentración de antibiótico por debajo de la cual se considera sensible una determinada especie bacteriana (59).

1.7.2 Mecanismo de acción

La biología de los microorganismos se ve alterada por los siguientes mecanismos:

- Inhibición de la síntesis de la pared celular - Desorganización de la membrana citoplasmática - Inhibición de la síntesis de proteínas

- Interferencia en la síntesis y/o metabolismo de los ácidos nucleicos - Antimetabolitos que bloquean la síntesis de ácido fólico (59)