No. DE METAFASES INCIDENCIA
CENTRO DE ESTUDIO No. de individuos No. de células t(7;14) (q33-36;q11-12) t(7;14) (p13-15;q11-12) t(7;14) otros Total t(7;14) por persona t(7;14) por célula
FRECUENCIA REFERENCIAS DIAGNOSTICO
Denver Colorado 300 600 3 1 4 1/75 1/1500 6x10-4 Hecht et al (1975) Asesoramiento genético Denver Colorado 2500 40000 17 17 1/147 1/2353 4x10-4 Hecht et al (1979) Tempe Arizona 240 2800 2 2 1/120 1/1400 7x10-4 Kaiser-McCaw et al (1979) Atlanta Georgia 852 21300 1 4 5 1/170 1/4260 2x10-4 Beatty- De Sana et al (1975) Retraso mental y familiares Halifax Canadá 250 5000 2 1 3 1/83 1/1667 5x10-4 Welch an Lee (1975) Diagnosticos diversos Stockholm Sweden 45 5500 6 6 12 1/4 1/458 2x10-3 Zech and Haglund(1978) Hombres y mujeres de varios proyectos de investigación Paris France 12500 50000 16 28 44 1/284 1/1136 8x10-4 Aurias et al (1980) Johannesburg 1402 32300 6 6 12 1/117 1/2692 3x10-4 Wallace et al (1984) Diagnosticos diversos Johannesburg 3462 45000 6 6 12 1/228 1/3750 2.6x10-4 Wallace et al (1984) Diagnosticos diversos Lund Sweden 1595 17545 5 6 11 1/145 1/1595 6.2x10-4 Petersson and Mitelman(1985) Bangalore India 1561 31220 3 5 8 1/195 1/3902 2.5x10-4 Reddy and Thomas (1985) Anomalías cromosómicas Rochester 11915 16599 1 42 39 1 82 1/145 1/2024 4.9x10-4 Dewald et al (1986) Diagnósticos diversos
Indianapolis 140 3500 1 4 5 1/28 1/700 1.4x10-3 Higgins and
Palmer (1987)
Parejas con múltiples abortos Hosp.Gral. Manuel Gea González 240 6000 3 3 1/80 1/2000 5x10-4 (1997) Parejas con antecedente de aborto espontáneo
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DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos muestran que la alteración de célula única se observo en el 3.3% de los pacientes estudiados (240), siendo entonces un 6.6% como parejas estudiadas (120). La frecuencia de célula única en nuestro estudio fue de 1X 10-3 , en el estudio realizado por Higgins y Palmer (1987) se reportó una frecuencia de 2x 10-3 diferencia que pudo deberse a la selección de la muestra ya que en nuestro estudio se incluyeron pacientes con antecedente de uno a cinco abortos espontáneos y en el de Higgins y Palmer (1987) la muestra se seleccionó con base a 2 o más abortos, es importante señalar que no existe en la literatura otro reporte que relacione pérdidas reproductivas con este tipo de rearreglos.
La alteración que se observó con mayor frecuencia fue la t (7; 14) siendo entonces una frecuencia de 5 X 10–4 que comparada con la población estudiada de Higgins y Palmer (1987) mostró diferencia ya que su frecuencia de 1.4x10-3 siendo esta mayor que nuestro estudio.
En otros estudios realizados con diferentes poblaciones las frecuencias varían de 1.4x10-3 Higgins y Palmer (1987) a 8x10-4 Aurias et al (1980), lo que refleja que esta variación pueda deberse a diferencias en la selección de pacientes.
Aún cuando se han postulado varias teorías con relación a este hallazgo se considera que los cromosomas 7 y 14 pueden tener una gran inestabilidad por la frecuencia en que se presentan.
Zech y Hagland (1978) reportaron que el receptor de células-T esta formado por las cadenas, alfa (α) y beta (β), y que el gen para la cadena beta del receptor de células -T humanas esta localizado en el brazo largo del cromosoma 7 en la banda q35, como esta
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región se encuentra propensa a desarrollar rupturas in vivo, probablemente refleja
inestabilidad generada por rearreglos somáticos de los genes del receptor de células -T durante la diferenciación normal en esta línea celular.
Croce y cols (1985) mediante hibridación in situ reportaron que el gen que codifica la
cadena alfa (α) del receptor de células -T , se localiza en la banda 14q11-q12, región que consistentemente esta involucrada en translocaciones e inversiones detectables en
leucemias de células-T y linfomas; así entonces el locus para la cadena α puede participar en la activación del oncogen en tumores de células-T.(36)
Jones y cols (1985) observaron en células híbridas somáticas de humano - roedor que existen genes que codifican la cadena α del receptor de células - T humanas y que mapean en el cromosoma 14 humano. Estos genes codifican dos diferentes clases de antígeno receptor que están presentes en el mismo cromosoma, los rompimientos involucrados en los cromosomas 7 y 14 son frecuentes en tumores de células - T. (37)
Las translocaciones de célula única en cultivos de linfocitos pueden ocurrir in vitro o in vivo, los puntos de ruptura 7p13-15, 7q35 y 14q11 en las translocaciones 7;14 involucran
genes para las cadenas α ,β, γ en los receptores antigénicos de células-T humanas, las translocaciones cromosómicas pueden estar relacionadas con los rearreglos que ocurren durante el desarrollo somático de la unidad receptora de células-T, o pueden ser debido a la alta actividad en la transcripción de sitios específicos en la célula-T. Los puntos de ruptura entre los cromosomas 7 y 14 tienen su explicación posiblemente en que la mayoría de los rearreglos ocurrieron durante la estimulación con PHA, esto también revela una consistente asociación con sitios frágiles.
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El hallazgo de translocaciones de célula única en parejas con aborto habitual puede reflejar una inestabilidad de estos cromosomas. Estos rearreglos también pueden ocurrir en la línea germinal y causar descendencia anormal o pérdidas gestacionales debido a un cariotipo anormal.
Estos rearrreglos también pueden ocurrir in vivo; su origen puede estar relacionado con la edad, mosaicismo o embarazos previos. Las anormalidades de célula única pueden indicar mosaicismo parental. Covone y cols (1984) propusieron que células del trofoblasto fetal pasan a la circulación materna por lo que las anormalidades de célula única pueden ser el residuo de un primer embarazo en el cual las células fetales han permanecido en circulación materna. (38)
Sciorra y cols en (1992) reportaron un mosaico bajo de una translocación 7/14 en el padre de un paciente con 7q+ y múltiples anomalías congénitas. El estudio cromosómico del padre se realizó en linfocitos y fibroblastos y sólo se encontró una célula alterada en linfocitos. El sitio de ruptura del cromosoma 7 coincidía en padre e hijo, lo cual es un hallazgo poco usual pero significativo. (39)
Estos rearreglos cuando ocurren en las células germinales pueden incrementar las pérdidas gestacionales o ser el reflejo de translocaciones crípticas que escapan al estudio citogenético o pueden estar relacionados a un mosaicismo como ocurrió en el caso de Sciorra y cols. Por lo que debe hacerse seguimiento en parejas o individuos con este tipo de alteración ya que el seguimiento podría aclarar la significancia clínica de un evento aparentemente aislado.
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Al considerar la frecuencia de célula única en relación al número de abortos observamos que aumenta a partir del cuarto aborto, lo cual puede ser una indicación de riesgo de pérdidas reproductivas la presencia de este hallazgo.
En resumen la frecuencia de alteración de célula única en parejas con antecedente de aborto aumenta en relación al número de abortos, lo cual puede ser una indicación de causa de abortos como se observa en la Gráfica 1, aún cuando hasta el momento no existe una clara significancia biológica de este hallazgo.
Es importante destacar que en este estudio también se encontró con mayor frecuencia la t (7; 14) como se reporta en la literatura, lo cual indica que efectivamente son sitios susceptibles de rearreglo cromosómico.
Es de llamar la atención que en este estudio el hallazgo de célula única se observó en diferentes años y en diferentes estaciones del año, lo que hace pensar que existe algún mecanismo intrínseco entre estos dos cromosomas específicamente y con ciertos puntos de ruptura que provocan estos intercambios cromosómicos pero que pueden ser la causa de pérdidas gestacionales en parejas con antecedente de aborto espontáneo.
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SUGERENCIAS
Seria importante considerar el realizar la comparación de este estudio con otros grupos, como incluir parejas que tengan hijos con múltiples malformaciones congénitas, parejas con niños con Síndrome de Down, parejas con niños con retraso mental y parejas con niños con alteraciones cromosómicas, y así contar con una comparación con otras patologías para obtener una significancia biológica más amplia con respecto a nuestro estudio.
Específicamente en este estudio es importante seguir estudiando a este tipo de parejas pero además con un grupo de comparación que contase con las siguientes características:
1.- Parejas sin antecedente de aborto espontáneo. 2.- Parejas sin antecedente de alteración cromosómica.
36 CONCLUSIÓN
1.- En todos los grupos, aún con diferente número de abortos se identificaron alteraciones de célula única.
2.- Estos rearreglos se presentaron de manera preferente en el sexo femenino, siendo sólo un caso el que se reporta en el sexo masculino.
3.- No se encontró relación alguna entre hallazgo de célula única, edad, y/o número de abortos. 4.- Los cromosomas que preferencialmente estuvieron involucrados fueron el 7 y 14.
5.- El cromosoma que con mayor frecuencia se vio involucrado en todos los rearreglos fue el cromosoma 14.
6.- La frecuencia de rearreglos cromosómicos en nuestro estudio fue de 1.3 X 10-3. 7.- La frecuencia para la traslocación 7; 14 fué de 5X10-4.
8.- La frecuencia de alteración de célula única en parejas con antecedente de aborto aumenta con relación al número de abortos.
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ANEXO REACTIVOS
Heparina
Medio Mc Coy 5 A modificado (Gibco) Frasco de 100 ml
Por cada 100ml de medio agregar 1ml de antibiótico y 1 ml de glutamina. Antibiótico: Penicilina-Estreptomicina (Gibco) Frasco de 20 ml liofilizada. L- Glutamina-200ml 100X líquida Frasco de 20 ml
Heparina
Fitohemaglutinina (PHA) Gibco Frasco de 10 ml liofilizada. Colchicina (Sigma) 10µg/ml
Solución hipotónica KCL 0.075M Fijador: Metanol 3: 1 Ac. Acético Tripsina 0.06%
Etanol al 30%
Eosina Azul de metileno en solución, según Wright para microscopía. Eosina Azul de metileno solución Giemsa.
Buffer Sörensen pH 6.8 Solución isotónica NaCL 0.9% Bicarbonato de sodio 7.5%
Película Kodalith Ortho 6556 tipo 3 de 35mm 30.Sm (100 pies) Revelador Dektol Kodak
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