Introducción

La Creatinina es un producto del deshecho metabólico formado a partir de la conversión no enzimática de creatina y fosfocreatina, la cual es excretada por los riñones a la orina111.La determinación de creatinina en suero es una prueba muy común que se realiza en los análisis rutinarios de sangre, ya que cuando los niveles de creatinina en suero aumentan por encima de 10 mg/dL nos indica la existencia de una enfermedad renal crónica (CKD). Sin embargo esta prueba no sería de utilidad en la detección precoz de la misma.

La enfermedad renal crónica (CKD) se ha convertido en los últimos años en un problema de salud mundial (afecta a entre un 5-10% de la población)117 siendo cada vez mayor el número de afectados que se encuentran en fase avanzada de la enfermedad (necesitando diálisis e incluso trasplante113). Para poder llevar a cabo una detección precoz de la misma, en el año 2002 la Fundación para la iniciativa de la calidad de los resultados de la enfermedad renal (K/DOQI) recomienda la medida del índice de filtrado glomerular (GFR) para una detección precoz de la enfermedad114. Dentro de esta medida, una determinación exacta y precisa de la concentración de creatinina en suero se antoja fundamental.

En el análisis de rutina la determinación de creatinina en suero humano se lleva a cabo con el conocido como método de Jaffé121, basado en una detección colorimétrica del derivado formado al reaccionar la creatinina con ácido pícrico. Sin embargo, este método posee una gran limitación ya que se encuentra interferido por una gran variedad de cromógenos como son la glucosa, acetona, compuestos carbonilos y especialmente la bilirrubina, ya que su presencia en altas concentraciones da lugar a valores falsamente disminuidos en la concentración de creatinina135,137, provocando un grave problema en la determinación exacta y precisa de la misma.

Existen dos alternativas metodológicas para solucionar este problema: Por una parte los métodos de Jaffé compensados, que están basados en la substracción de un valor constante de cromógeno interferente al valor final. Y por otra parte, los métodos enzimáticos basados en una serie de reacciones enzimáticas consecutivas cuyo producto final es generalmente peróxido de hidrógeno. Estos métodos están considerados en la actualidad los menos interferidos en el análisis de rutina de creatinina siendo cada vez

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más recomendado su uso160, aunque no están siendo del todo aceptados por los laboratorios de rutina debido a sus altos costes159.

Debido a todo ello, surge la necesidad del desarrollo de nuevos métodos que proporcionen una determinación exacta y precisa de creatinina en el análisis de rutina. En este sentido, los métodos basados en dilución isotópica y espectrometría de masas (ID-MS) van a jugar un papel crucial. En la actualidad ya existen varios métodos de referencia basados en ID-MS para la determinación de creatinina, los cuales se encuentran incluidos en la base de datos de la Comisión conjunta para la trazabilidad en la medicina de laboratorio (JCTLM)97, basados tanto en LC-MS como en GC-MS. Estos métodos utilizan trazadores isotópicos de creatinina enriquecidos en varios átomos de 13C o 15N como patrones internos, donde la determinación de creatinina se lleva a cabo a partir de curvas de calibrado. Esta estrategia posee dos inconvenientes principales: 1) La existencia de efectos isotópicos entre analito y trazador. 2) La necesidad de construir un calibrado metodológico para la determinación de creatinina. Dentro de estos métodos, los basados en LC-MS ofrecen un análisis más rápido que los basados en GC-MS98 ,163, sin embargo la instrumentación es demasiado cara y poco accesible. A pesar de que la instrumentación de los métodos basados en GC-MS se encuentra disponible en la mayor parte de los laboratorios de rutina, el largo procedimiento de tratamiento de muestra que conlleva que incluye reacciones de derivatización muy largas imposibilita su aplicación en el análisis de rutina.

En este capítulo se presenta una alternativa para la determinación de creatinina mediante ID-MS y GC-MS, la cual reduce el tiempo de derivatización a únicamente dos minutos, elimina la necesidad de realización de una curva de calibrado y podría ser aplicado al análisis de rutina de creatinina en muestras interferidas.

La metodología propuesta está basada en el uso de creatinina marcada en un solo átomo de 13C con el objetivo de minimizar los efectos isotópicos a lo largo del análisis combinada con la regresión lineal múltiple que nos permite resolver el solapamiento espectral entre muestra y trazador, proporcionando directamente y a partir del espectro de masas experimental muestra-trazador las fracciones molares de analito (Xnat) y

trazador (Xenr) y evitando como se ha demostrado anteriormente173,303 la realización de

una curva de calibrado y por tanto, cuantificar la concentración de creatinina a partir de una solo medida.

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Esta metodología involucra además una etapa de derivatización basada en el uso de radiación microondas focalizada lo cual reduce esta etapa a un tiempo de dos minutos permitiendo llevar a cabo una determinación de creatinina exacta, precisa y libre de interferencias en menos de cuarenta y cinco minutos, pudiendo así aplicarse en el análisis de rutina.