4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.4 Invertebrados acuáticos
Análisis espacial
15 mallines aislados: En cada sitio de muestreo, se tomaron tres réplicas (n=3) de invertebrados en la columna de agua con red de mano (D-frame), es decir, 45 réplicas en total (n= 15 x 3 = 45).
15 mallines conectados: En la zona de inundación de los ambientes conectados (total: 15 sitios), se tomaron tres réplicas (n=3) de invertebrados de columna de agua con red de mano (D-frame). A su vez, sobre la sección lótica (ríos n=15) se tomaron tres réplicas (n=3) del bentos (corredera), con red Surber modificada o Kick net. De este modo, se obtuvo un total de 90 réplicas (n= 15 x 6 = 90).
Epele, Luis B. 2014. Comunidades de invertebrados acuáticos de mallines de Patagonia, bajo distintos niveles de antropización.
Dra. M. Laura Miserendino ǁ Dr. Alberto Rodrigues Capítulo
43 Análisis estacional (Mallín Crespo)
En cada ocasión (frecuencia mensual entre mayo de 2008 y abril de 2009) se tomaron muestras de invertebrados de columna de agua con red de mano (D- frame). En cada charca temporaria (P1, P2 y P3) se tomó una muestra mensual (n=3). Totalizando 36 pseudoréplicas (n= 12 x 3 = 36).
4.4.1 Métodos de colecta e identificación de invertebrados
La colecta de invertebrados de columna de agua (epibentos, necton y pleuston) se realizó con redes de mano (D-frame o marco D) de 800 µm de abertura de malla. Cada réplica tomada con este tipo de muestreador constó de ocho movimientos de la red (de 2 m cada uno) en una transecta perpendicular desde la orilla del espejo de agua hacia el centro (técnica multihábitat, U.S. EPA 2002a). En el Mallín Crespo, dado que las charcas son muy pequeñas y para no producir disturbios se realizaron cuatro movimientos de red por réplica. El objetivo de la transecta fue muestrear la mayor variedad posible de microhábitats (columna de agua y las distintas plantas acuáticas). La fijación de muestras se realizó in situ con formaldehído al 5% (v/v), las muestras se almacenaron en recipientes rotulados plásticos con tapa a rosca (500 cm3) y fueron trasladadas al laboratorio. Teniendo en cuenta el área de abertura de la red de marco D (medio círculo de 0,15 m de radio) y la distancia recorrida dentro del agua (2 m, paralelamente al sustrato del área inundada), las densidades de invertebrados se expresaron como ind.m-3 (Bolduc y Afton 2003, Balcombe et al. 2005, Hornung y Foote 2006).
Las muestras bénticas en arroyos se colectaron con red Surber modificada (Winget y Magnum 1979) de 250 µm de abertura de malla y 0,09 m2 de superficie. Para el Río Chubut los muestreos del bentos fueron realizados con red de pateo (Kick-net) de 250 µm de abertura de malla y 0,25 m2 de superficie (Hauer y Resh 1996). En cada sitio se tomaron tres réplicas (n=3) en zonas de correderas. La fijación de muestras se realizó in situ con formaldehído al 5% (v/v), las mismas se almacenaron en bolsas especialmente acondicionadas y fueron trasladadas al laboratorio. Las densidades de invertebrados bentónicos (tomadas con red Surber y kick net) se expresaron como ind.m-2.
44 Una vez en laboratorio las muestras se lavaron en tamiz de 250 µm de malla, para eliminar el formol. Los organismos fueron separados manualmente bajo lupa (5X de aumento). Luego fueron retirados del resto de la muestra (detrito, restos de macrófitas, etc.) y se conservaron en frascos rotulados por sitio con alcohol al 70%. La identificación y recuento se realizó con estereomicroscopio (Zeiss, Stemi DV4 y LEICA, MZ6) y microscopio (Lancet Instruments) utilizando claves regionales y publicaciones actuales sobre el tema (Bachmann 1981, Rodrigues Capítulo 1992, Lopretto y Tell 1995, Epler 2001, Fernández y Domínguez 2001, Vondel 2001, Oliva et al. 2002, Manzo 2005, Alarie et al. 2007, Michat y Archangelsky 2007, Manzo y Archangelsky 2008, Michat et al. 2008, Domínguez y Fernández 2009, Alarie et al. 2009). Los invertebrados fueron identificados al menor nivel taxonómico posible y debido a que no todos los organismos pudieron ser determinados a nivel de especie, los valores de riqueza espe ífi a se refi ie o o o i ueza ta o ó i a . E a uellos asos e do de o fue posible realizar una correcta identificación, el material fue enviado con tal propósito a distintos especialistas.
4.4.2 Regresiones largo-peso, biomasa y asignación de grupos funcionales
Para el cálculo de biomasa de los invertebrados se utilizaron regresiones largo- peso disponibles (Benke et al. 1999, Miserendino 2001). Estas pueden ser descriptas por la ecuación general PS = a Lb, o después de su transformación logarítmica como lnPS= lna + blnL (donde: a, b = constantes de regresión, PS = peso seco, y L = parámetros de longitud (largo total, ancho cefálico o largo del caparazón). La biomasa seca de invertebrados se expresará como mg.m-2 (invertebrados bentónicos de ríos y arroyos) y mg.m-3 (invertebrados de mallines).
En los casos en que no existieran regresiones largo peso disponibles se obtuvieron modelos a partir del material colectado, esto se realizó para: Rionaeschna sp., Cyanallagma interruptum, Ectemnostega quadrata, Tropisternus setiger y Lancetes sp. (Anexo 1). Los especímenes que se utilizaron estuvieron fijados en formol y preservados en alcohol. Se tuvo especial cuidado en la selección de los ejemplares para pesar; se utilizaron ejemplares completos (por ej., con el total de sus extremidades y branquias). El mínimo número de individuos utilizados para obtener una ecuación fue
Epele, Luis B. 2014. Comunidades de invertebrados acuáticos de mallines de Patagonia, bajo distintos niveles de antropización.
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45 de 16 (Ectemnostega quadrata), dado que no se contaba con otros ejemplares. Sin embargo, el resto de las ecuaciones fueron realizadas sobre la base de 20 individuos.
Los ejemplares de los distintos taxa se midieron hasta 0,05 mm utilizando un estereomicroscopio Zeiss (Stemi DV4) con ocular graduado. Cada espécimen fue transferido individualmente a un recipiente Ependorff plástico de 1,5 ml y secado en estufa a 105°C durante 4 horas o hasta peso constante (Smock 1980). Cada individuo se pesó en una balanza electrónica (OHAUS, Explorer) con una precisión de 0,1 mg. Las regresiones largo-peso se obtuvieron utilizando el programa Statistica for Windows (1984-2001. Número de serie: 31415926535897). Se evaluaron distintos modelos de regresión (lineales, exponenciales, etc.) para obtener las mejores ecuaciones. En general, los modelos lineales fueron los más adecuados.
Todos los invertebrados acuáticos (adultos y larvas) se clasificaron en seis categorías de grupos funcionales (desmenuzadores, raspadores, predadores, colectores recolectores, colectores filtradores y picadores herbívoros). Debido a la extensión geográfica de este estudio, no fue posible realizar experiencias con organismos vivos a campo o en laboratorio, por lo que los grupos funcionales se asignaron utilizando la bibliografía disponible (Merritt y Cummins 1996, White y Roughley 2008, Miserendino 2007, Archangelsky y Michat 2013). Los adultos y larvas se trataron por separado cuando sus dietas fueron diferentes (por ejemplo, Tropisternus setiger).