Objetivo Específico Nº Activ. Porcentaje de Avance
Investigaciones en ecofisiología
31 14 %
Metas previstas según Objetivo Específico Indicador Anual Meta (*)
Avance 1º Trim.
Grado de avance al 1º Trim (%) Preparación de infraestructura experimental
Equipamiento comprado-
reparado operativo
04 0 0
Acondicionamiento de juveniles de lenguado Acondicionamiento en
laboratorio 02 1 25 Evaluaciones: Consumo de oxígeno , contenido
energético, contenido de omegas (3 y 6) Experimentos realizados 8 0 0
Informe técnico de resultados trimestral y
Ejecutivo anual Informe técnico 6 1 17
.
RESULTADOS PRINCIPALES:
+ Preparación de infraestructura experimental:
Aún están en espera los insumos y los servicios de mantenimiento, de equipos programados feb y mar). + Acondicionamiento de juveniles de lenguado:
Se viene desarrollando el protocolo de acondicionamiento de juveniles de lenguado a las condiciones del laboratorio a dos temperaturas 17 y 22ºC. Los pesos promedios iniciales estuvieron entre 1,58 a 2,47 g (Fig 01).
Fig 1 tasa de crecimiento (gr/día) durente el periodo de acondicionamiento de juveniles de lenguado
Tabla 01.- Obtención de extracto lipídico
+ Evaluaciones: Consumo de oxígeno, contenido energético, contenido de omegas (3 y 6) en juveniles de lenguado:
Una vez establecido el protocolo de acondicionamiento de los juveniles durante los meses de febrero y marzo se iniciarán las evaluaciones correspondientes.
Se han venido realizando modificaciones en el protocolo de trabajo con el fin de mejorar para la obtención del extracto lipídico mediante el Método FOLCH – LEE (Tabla 01).
Otros: Se viene ejecutando el proyecto Evaluaciones Ecofisiológicas en juveniles de Paralabrax humeralis “cabrilla” y
Anisotremus taeniatus “chita” para el Programas de Presupuesto por Resultados (PpR) dentro de la Meta presupuestal:
Desarrollo de investigación básica de las especies acuícolas priorizadas.
EVALUACION
La aproximación en condiciones de laboratorio permiten conocer, entender y parametrizar la capacidad de respuesta fisiológica de juveniles de Paralichthys adspersus “lenguado” frente a variaciones de temperatura lo cual ayudará a comprender las implicancias de este factor como regulador en su crecimiento y desarrollo, permitiendo evaluar su desenvolvimiento (en esta etapa de desarrollo) en condiciones de cultivo. Los resultados relacionados a indicadores metabólicos tienen aplicación inmediata en el desarrollo de tecnología para su producción acuícola sostenida.
PRODUCTOS
- Informe preliminar del avance del acondicionamiento del recurso lenguado en cautiverio. Especie Código Peso de la muestra (g) Peso Vial vacio (g) Peso Vial + lípido (g) Peso de Lípidos (g) Porcentaje de Lípidos Totales (g) P1_A 0,2504 2.0044 2.0070 0.0026 1.0383% P1_B 0,2506 2.0593 2.0619 0.0026 1.0375% Odontesthes regia regia “Pejerrey” P1_C 0,25043 2.0537 2.0563 0.0026 1.0388% Pi1_A 0.2502 2.0581 2.0596 0.0015 0.5995% Pi1_B 0.2501 2.0441 2.0455 0.0014 0.5598% Pi2_A 0.5006 2.0200 2.0235 0.0035 0.6992% Cheilodactylus variegatus “Pintadilla” Pi2_B 0.5006 2.0464 2.0500 0.0036 0.7191%
OBJETIVO ESPECIFICO N° Activ. Porcentaje de Avance
Investigaciones en Patobiológia Acuática 32 8 %
Metas previstas según Objetivo Específico Indicador anual Meta acumulado Avance 1º Trim.
Grado de Avance al 1º trim (%) Muestreo de camarones en el río Quilca. Nº Muestra 180 - 0
Coloración y montaje de láminas de trematodo digenético. Nº de Láminas 30 - 0
Infección experimental en pollos y ratones. experimentos Nº de 2 - 0 0
Informes Técnicos de resultados- trimestral, I sem y anual Informes 6
1
17
RESULTADOS PRINCIPALES:
- Para el estudio taxonómico de la metacercaria del músculo del camarón de río Cryphiops caementarius del río Quilca de Arequipa, la salida al campo está previsto para el mes de abril.
- Se ha desarrollado el plan de trabajo que incluye las actividades a realizar en la primera salida al campo y se avanzó en la búsqueda de referencias bibliográficas.
EVALUACIÓN:
Dar a conocer la posición taxonómica de las metacercarias presentes en el camarón de río Cryphiops caementarius y su posible rol zoonótico.
PRODUCTOS
- Preparación del proyecto “Estudio taxonómico de la metacercaria del músculo del camarón de río Cryphiops
caementarius del río Quilca de Arequipa”.
- Preparación de protocolos.
- Procesamiento y estudio de muestras de peces formolados procedente de la bahía interior de Puno, enviados por la Sede Puno del IMARPE para diagnóstico histopatológico
Investigaciones em biotecnología acuática 33 08 %
Metas previstas según Objetivo Específico Indicador Anual Meta
Avance acumula do 1º Trim. Grado de Avance Al 1º Trim (%) Invernadero producción Litros de 10,000 750 8
Sala de procesos Gramos de biomasa 6,000 71 1
Laboratorio de Instrumentación Analítica Número de análisis
químico 100 - 0
Laboratorio de Biología Molecular y Genética Número de análisis
molecular 5 - 0
I
Innffoorrmmeessddeerreessuullttaaddoossttrriimmeessttrraalleess,,IIsseennyyaannuuaall Informes 6 1 17
RESULTADOS PRINCIPALES:
1. INVERNADERO Y SALA DE PROCESOS
Se han desarrollado actividades como parte del Proyecto: “Desarrollo de un protocolo biotecnológico para la obtención
de aceite de microalgas rico en DHA utilizando biorreactores tubulares”, FIDECOM - PSW – IMARPE, donde se busca
determinar el efecto de dos tipos de sales artificiales en el cultivo de cepas de las cepas Isochrysis galbana y
Phaeodactylum tricornutumk, mediante el análisis de la producción de biomasa y el contenido de compuestos
bioactivos.
+ Implementación de sistemas para cultivo masivo en Invernadero de Isochrysis galbana
Se inóculo un total de 540 L a una concentración de 1.6 x 106 cel./mL de la cepa I. galbana fue proporcionado por el Laboratorio de cultivo de Microalgas (IMARPE), y mantenidos en el Invernadero para su cultivo masivo utilizando dos tipos de sales en medios de cultivo.
Los cultivos masivos se han realizado bajo la siguiente metodología:
- Preparación de medios de cultivo para la siembra de microalgas con: (1) agua con sal “A”, (2) agua con sal “B”, y (3) agua de mar como control (Figura 1)
- Acondicionamiento y toma de parámetros abióticos
- Transporte del inóculo de I. galbana de la sala de microalgas en condiciones controladas. - Sembrado de 6 tanques de 300L de acuerdo a los siguientes tratamientos:
Sal A (100 L) + inóculo (100 L) x 2 tanques Sal B (100 L) + inóculo (100 L) x 2 tanques Control (100 L) + inóculo (100 L) x 2 tanques
Figura 1. Esquema de diseño experimental de tratamiento con dos tipos de sales para medios de cultivo para la cepa Isochrysis galban. 1 y 2 = repeticiones. A= agua + sal tipo A, B = agua + sal tipo B; C = agua de mar
+ Obtención de biomasa deIsochrysis galbana
El flujo de cultivo microalgal en el nivel masivo fue de tipo “Batch”, con una duración de 7 días. El cultivo se realizó en tanques de 300 L de capacidad con una densidad celular inicial de 6.4x105 cel/mL., bajo condiciones de invernadero, con una luminosidad de 280 ± 134 Lux (103) y una temperatura promedio de 32,9 ± 3,8 °C. Se tomaron diariamente datos de parámetros abióticos de: temperatura, pH, salinidad y oxígeno disuelto.
+ RESULTADOS
Se logró mantener los parámetros de cultivo sin variabilidad significativa en el tiempo de cultivo para todos los tratamientos (Tabla 1).
Tabla 1. Parámetros fisicoquímicos para el cultivo en invernadero de Isochrysis galbana mantenido por 7 días.
Tabla 2. Producción masiva de Isochrysis galbana cultivada en condiciones de invernadero por 7 días.
Para los tres tratamientos, se logró un volumen de cosecha de 150 L, obteniendo mayores valores de densidad celular de cosecha (3.51 cel/mLx108), biomasa húmeda (76.5 g) y seca (17.4 g) con el cultivo realizado con el tipo de Sal B (Tabla 2). Además se encontró, para todos los tratamientos, una relación directa entre niveles de densidad celular y biomasa seca.
2. LABORATORIO INSTRUMENTAL ANALÍTICO
Muestras liofilizadas de I. galbana vienen siendo procesadas para la determinación del perfil bioquímico. Se ha realizado la preparación de muestras de extracto de proteínas para la cuantificación de proteínas totales mediante el método modificado de Lowry para microalgas, utilizando un espectrofotómetro. Además se ha realizado la preparación de muestras de ácidos grasos para su determinación mediante cromatografía de gases.
3. LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA
Para realizar la caracterización a nivel molecular de diferentes cepas de microalgas proporcionadas por el Banco de Germoplasma, se han realizado una primera etapa de evaluación de métodos de colecta de muestra y de extracción de ADN total de I. galbana para ser utilizado como molde (o template) en estudios posteriores de amplificación por PCR convencional y secuenciamiento de marcadores moleculares.
+ Colecta de muestra
Se han evaluado diferentes métodos de colecta de muestra, considerando variantes como: densidad del cultivo (cél/mL), velocidad de centrifugación y lavado celular..
+ Implementación y adecuación de técnica de extracción de adndeIsochrysis galbana
Se han evaluado diferentes métodos de extracción de ADN, cuya efectividad ha sido determinada sólo de acuerdo a la calidad de ADN total extraido. Estas pruebas serán evaluadas posteriormente a nivel de cantidad (µg/mL) y pureza (ADN vs proteína).
Se han utilizado los siguientes procesos: Buffer CTAB - A y Buffer CTAB – B
Kit Promega para cultivo celular, modificado: Se consideró una incubación en buffer lisis x 10 – 15 minutos
Parámetros Tratamientos
Temperatura (°C) pH Salinidad (ppm) Oxígeno disuelto (mg/L) Control 29,0 ± 1,18 7,59 ± 0,67 35,7 ± 1,63 9,33 ± 1,51
Sal A 29,1 ± 1,06 7,89 ± 0,38 35,9 ± 1,22 11,43 ± 0,95 Sal B 29,1 ± 1,18 7,78 ± 0,49 34,6 ± 1,44 10,10 ± 1,12
Tratamientos Densidad Celular de
cosecha (cel/mLx106) Volumen de Cosecha
(L) Biomasa Húmeda (g) Biomasa Seca (g) Control 1.5 150 74.2 10.8 Sal A 2.63 150 73.3 12.6 Sal B 3.51 150 76.5 17.4
+ Evaluación de la calidad de adn
La evaluación de la calidad del DNA se realizó por electroforesis horizontal en un gel de agarosa al 1%, para lo cual se realizaron preparaciones de 50 mL agarosa diluida el 1% de buffer TBE (40mM tris 0.6% borato 2mM EDTA) al 1X. Se colocó aproximadamente 8 ul de muestra utilizando como buffer de carga Azul de bromofenol 6X diluido 1:10 (Fig 2).
Figura 2. Preparación de geles de agarosa para cámara electroforética horizontal (a), carga de muestras en el gel (b) y revelado en un fotodocumentador (c).
La electroforesis se realizó a 100V por 30 minutos, en buffer de corrida TBE 1X. El revelado se realizó sumergiendo los geles en una dilución de bromuro de etidio por 5 minutos y la visualización de los geles se realizó en un transiluminador UV, documentando los resultados fotográficamente.
+ Resultados
De acuerdo a la evaluación en geles de agarosa (Figura 7), según el nivel de degradación del ADN y la cantidad de extracción (intensidad de banda), se considera una mayor efectividad de extracción para I. galvana, con los siguientes métodos:
- protocolo Kit: se obtiene un ADN sin degradación pero en baja concentración - CTAB-A + PK + ARNasa: se obtiene ADN libre de ARN y sin fragmentación. EVALUACIÓN:
La baja variabilidad encontrada en los parámetros abióticos como temperatura, pH, salinidad y oxígeno demuestran la efectividad en la implementación y acondicionamiento de los sistemas de cultivo de la cepa I. galbana, para todos los tratamientos a analizar posteriormente. De esta manera, la variación en la densidad celular y biomasa que se observen posteriormente reflejarán directamente los efectos de las diferencias en los medios de cultivo (agua de mar, sal A o sal B)
Por otro lado, los procesos de estandarización de técnicas de extracción de ADN constituyen un paso importante para la obtención de un template o ADN molde de buena calidad (bajo nivel de degradación producto de la manipulación y/o calidad de la muestra biológica). Este proceso es preliminar al de amplificación de secuencias de ADN mediante PCR convencional, y secuenciamiento, necesarios para la identificación de I. galbana a nivel molecular.
PRODUCTOS
- Actividades para el desarrollo de un protocolo biotecnológico para la obtención de aceite de microalgas rico en DHA utilizando biorreactores tubulares,
- Se continúa el cultivo en invernadero de Isochrysis galbana, para obtención de biomasa
OBJETIVO ESPECIFICO N° Activ. Porcentaje de Avance
Banco de Germoplasma 34 18 %
Metas previstas según Objetivo Específico Indicador Anual Meta
Avance acumula do 1º Trim. Grado de Avance Al 1º Trim (%) Evaluación morfológica y biológica de cepas seleccionadas,
elaborar la codificación y ficha técnica de microalgas o zooplancton. Nº de microorgani smos evaluados 5 1 20
Reactivación de cepas de bacterias cepas de No de
bacterias 200 60 30 Identificación de especies de bacterias cepas de No de
bacterias 100 - 0 Elaboración del catálogo de las Cepas de microalgas y
rotíferos. N o de cepas en el formato 60 13 22 I Innffoorrmmeessddeerreessuullttaaddoossttrriimmeessttrraalleess,,IIsseennyyaannuuaall Informes 6 1 17
a
b
c
RESULTADOS PRINCIPALES
- Se logró la obtención de la Cepa Chlorella sp proveniente de la laguna de la Huacachina, Ica, que ingreso al Cepario con el código IMP-LBA -041 para este primer semestre del año.
- En este primer trimestre se hizo el proceso de activación de bacterias y en el segundo trimestre se iniciara con la clasificación taxonómica respectiva
- Banco de Germoplasma de Organismos Acuáticos:
Tetraselmis contracta, código de cepas IMP-LBA- 001 Dunaliella salina, código de cepas IMP-LBA-002 Dunaliella salina, código de cepas IMP-LBA- 003 Dunaliella salina, código de cepas IMP-LBA-004 Dunaliella salina, código de cepas IMP-LBA- 005
Scripsiellia trocoidea( Stein)Balech ex Loeblich III 1965, Código de cepa: IMP-LBA-006 Haematococcus pluvialis Flotow 1844, Código de cepa: IMP-LBA-007
Acutodesmus acuminatus, Código de la cepa : IMP-LBA-008 Nannochloropsis código de cepas IMP-LBA- 009
Heterosigma akashiwo, Código de la cepa: IMP-LBA-010 Isochrysis galbana Parke, Código de la cepa : IMP-LBA-011
Desmodesmus spinosus(Chodat) E. Hegewald, Código de la cepa : IMP-LBA-012 Nitzschia ovalis, Código de la cepa : IMP-LBA-013
PRODUCTOS
La elaboración del catálogo se encuentra en la etapa inicial
OBJETIVO ESPECIFICO N° Activ. Porcentaje de Avance
Estudio de organismos acuáticos de importancia económica con fines
acuicolas y de repoblamiento 35 13 %
Metas previstas según Objetivo Específico Indicador Anual (*) Meta Avance acum 1ºTrim.
Grado de Avance
al 1º Trim. (%) Realizar estudios para elevar la sobrevivencia larval del
lenguado Paralichthys adspersus y conocer la diferenciación sexual mediante análisis histológicos.
% de sobrevivencia
larval
2500 - 0
Evaluación de la capacidad de carga de diferentes microalgas para su uso como alimento y para la producción de biomasa
algal. N° L/mes 30 000 1800 17
Determinación de la capacidad de carga de rotíferos con
diferentes cepas microalgales en volumen de 10 y 150 L. Nº dietas 4 0,5 13 Informes de resultados trimestrales, I sem y anual Informes 6 1 17