El suelo degradado utilizado para la incubación correspondía originalmente a un Haplustol típico (Clasificación USDA) y la muestra fue obtenida de una parcela ubicada en la zona ―Los Molles‖ (localidad de La Granja), ubicado al pie de las Sierras Chicas aproximadamente a 60 km al Norte de la Ciudad Capital de Córdoba. Su textura es franco limosa (77 % de limo, 17,5 % arcilla y 5 % arena), los horizontes superficiales fueron removidos hasta el horizonte C, posteriormente permaneció con pastura natural durante un período de diez años.
Para el desarrollo del experimento de incubación se utilizaron contenedores de plástico de 0,5 dm3 de capacidad en los que se agregó suelo o suelo enmendado hasta el 75% de su capacidad. El suelo y las enmiendas fueron previamente secados al aire y tamizados por malla de 2 mm. Se prepararon las mezclas suelo/enmienda tal que las dosis
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de la enmienda correspondieran a 5, 20 y 50 Mg ha-1, las mezclas se homogeneizaron mediante agitación mecánica.
Las enmiendas utilizadas fueron las analizadas en el capítulo 3 de la presente tesis: compost de estiércol de conejo en la fase de compostaje activo CM8, compost de estiércol de conejo en la fase CM9 y vermicompuesto de estiércol de conejo correspondiente a la fase VM5 del proceso de compostaje- vermicompostaje (Tabla 3.1).
Para cada dosis de enmienda (tratamientos) se prepararon los contenedores correspondientes, los cuales se llevaron hasta el 70 % de su capacidad de retención hídrica con agua deionizada y se incubaron en un gabinete de germinación INDUTEK a una temperatura de 28 ºC, en oscuridad y sin cultivo. Las pérdidas de humedad de las muestras se controlaron durante todo el ensayo de incubación con el propósito de mantener constantes las condiciones iniciales, reponiéndose periódicamente con agua deionizada cuando la pérdida de peso llegaba al 10% del peso inicial.
El muestreo se llevó a cabo en los tiempos 0 (luego de proveer las condiciones de humedad y temperatura a los 5 días de preparados los contenedores), 2, 4, 6 y 8 semanas a partir del comienzo de la incubación. Se tomaron muestras compuestas de 5 submuestras de cada contenedor en los distintos tiempos de muestreo. A una fracción de cada muestra compuesta se le determinó el porcentaje de humedad y al resto de la muestra se la conservó a 4 ºC (por no más de 7 días) hasta el momento de la realización de los análisis biológicos y bioquímicos.
Se realizó un testigo (T) sin agregado de enmienda. Todos los tratamientos y el testigo se incubaron por triplicado.
MÉTODOS
Propiedades químicas
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El pH y la conductividad eléctrica (CE) de las enmiendas se midieron en un extracto 1:5 (enmienda: agua destilada) de la manera descripta en el capítulo 2. El pH del suelo se midió en una relación 1:2,5 (suelo: agua deionizada). La conductividad eléctrica del suelo se determinó en el extracto de saturación.
Determinación de Nitrógeno Total
El nitrógeno total (NT) se determinó por digestión Kjeldahl, de acuerdo al procedimiento que fue detallado en el capítulo 2.
Carbono Oxidable vía húmeda (micrométodo)
El método se basa en el procedimiento de Walkey y Black expuesto en el capítulo 2. En el micrométodo se redujo el tamaño de la masa de la muestra de suelo y los volúmenes y concentraciones de las soluciones reactivas de manera proporcional (Richter y Von Wistinghausen, 1981).
Se pesaron entre 100 a 200 mg de suelo seco y tamizado con tamiz de malla de 0,5 mm en tubo de ensayo y se agregaron 1,5 mL de dicromato de potasio 1N y 3 mL de H2SO4 concentrado. Se mezcló suavemente con movimiento de rotación y se dejó en
reposo durante 30 minutos resguardado convenientemente a fin de evitar la pérdida rápida de calor. Luego se agregó agua deionizada hasta aproximadamente la mitad del tubo, se agitó y dejó enfriar en heladera durante 20 minutos. Una vez fría, se agregaron tres gotas de indicador N-fenilantranílico 0,1% en solución de Na2CO3 al 0,2% y se tituló con sulfato
ferroso amónico (Fe (NH4)2 (SO4)2.6 H2O) 0,300 N hasta viraje de color violeta a verde.
Durante la titulación se mantuvo agitación constante. Cada titulación se realizó por triplicado con su correspondiente blanco.
Cálculos: CO (mg kg-1) = 82 , 0 3000 300 , 0 M P M B
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B = volumen (mL) del titulante consumido por el blanco M = volumen (mL) del titulante consumido por la muestra PM = Peso de la muestra en mg
0,300 = Normalidad del Fe (NH4)2 (SO4)2.6 H2O
3000 = Corresponde a la transformación de meq de C a g por cada kg de suelo 0,82 = Factor de corrección por oxidación (82%)
Carbono Orgánico Total
El carbono orgánico total (COT) de las enmiendas se determinó por calcinación a 550°C durante 5 horas, de acuerdo al procedimiento que fue descripto en el capítulo 2.
Carbono Soluble en Agua
El carbono soluble en agua (CSA) se determinó de acuerdo a la técnica propuesta por Burford y Bremmer (1975) detallada en el capítulo 2.
Propiedades biológicas
El contenido de Carbono proveniente de la biomasa microbiana proporciona información acerca del estado biológico del sistema suelo y sobre la dinámica de la materia orgánica en el mismo.
Carbono de la biomasa microbiana
El carbono de la biomasa microbiana (Cbio) se determinó por el método de fumigación-extracción con cloroformo modificado por Gregorich et al., (1990).
Se pesaron 5 g de suelo (testigo) y de cada uno de los distintos tratamientos tamizados por malla de 2 mm, se trasvasaron a un tubo de centrífuga de 50 mL de
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capacidad. Se agregó a cada uno de los tubos de los tratamientos 0,20 mL de cloroformo (libre de etanol) y se dejaron abiertos a temperatura ambiente durante 8 a 10 h dentro de un desecador. Posteriormente tanto a las muestras correspondientes a los tratamientos como a sus respectivos controles, se le agregaron 20 mL de solución de K2SO4 0,5 mol L-1, se
agitaron mecánicamente durante media hora y se centrifugaron entre 15 a 20 minutos a 2500 rpm. A todos los extractos obtenidos (controles y tratamientos) se les burbujeó nitrógeno (libre de CO2), durante 30 segundos aproximadamente, para desplazar el
cloroformo que pudiese estar presente. Sobre los extractos, así obtenidos, se determinó el contenido de carbono de la siguiente manera: se colocó en un tubo de digestión 98 mg de K2Cr2O7,4 mL del extracto y 4 mL de H2SO4 concentrado. Se colocó el tubo de digestión
en bloque digestor durante 15 minutos a 150ºC, se retiró y se conservó en oscuridad durante 12 horas. Posteriormente se le adicionaron 2 mL de agua deionizada, se agitó y se leyó la absorbancia en espectrofotómetro a 590 nm. Con el valor de absorbancia leído y a partir de una curva patrón de glucosa en distintas concentraciones se obtuvo el contenido de Cbio.