Se planteó un estudio transversal analítico sobre individuos con fisuras orofaciales evaluados en la consulta de genética clínica de La Fundación Operación Sonrisa sede Bogotá, entre abril de 2012 y julio de 2013, con el objetivo de determinar asociaciones entre FOF forma sindrómica y condiciones antenatales de alto riesgo, prematuridad y comorbilidades.
5.2. Población.
Se evaluaron trescientos once pacientes entre 3 semanas y 52 años de edad, afectados por diferentes tipos de FOF, provenientes de varias regiones del país. Todos asistieron a la consulta de genética clínica a la Fundación Operación Sonrisa Bogotá entre abril de 2012 y julio de 2013.
Principios éticos contemplados en la Declaración de Helsinki fueron considerados en la ejecución de procedimientos y protocolos de investigación. Cuenta con la aprobación del comité de ética de la Universidad de La Sabana
5.3. Procedimientos. 5.3.1. Consulta Clínica.
La consulta clínica fue realizada por el estudiante de maestría los lunes y viernes y por su tutor los viernes. Se brindó asistencia en salud, primando la construcción de una adecuada relación paciente-medico, como herramienta clave dentro del proceso de atención en salud.
De cada uno de los pacientes, se recolectó información acerca de antecedentes médicos, quirúrgicos, psicosociales, inmunológicos y familiares. En la población pediátrica se determinaron antecedentes antenatales (patologías obstétricas- factores de riesgo antenatal) y pediátricos (prematuridad, desarrollo psicomotor). Lo anterior fue consignado bajo un único formato de historia clínica genética, diseñado por la estudiante de maestría y su tutor.
Se realizó un examen clínico completo que comprendió: medición de índices antropométricos e identificación de otras anomalías congénitas o hallazgos fenotípicos. Se midió la longitud de manos, palmas, orejas. Distancia intercantal interna (DICI) y distancia intercantal externa (DICE). En niños menores de 5 años se evaluó el desarrollo psicomotor según la escala propuesta por el programa de Atención Integral a las Enfermedades Prevalente de la Infancia. (OMS, 2012). Se clasifico el desarrollo psicomotor como:
1. Sospecha de retraso del desarrollo. 2. Riesgo de problemas en el desarrollo. 3. Desarrollo normal con factor de riesgo 4. Desarrollo normal.
Teniendo como base los hallazgos clínicos, los pacientes fueron clasificados en tres categorías:
1. Sindrómico: pacientes con FOF y hallazgos clínicos que sugieren un síndrome o secuencia especifica.
2. No Sindrómico: pacientes con FOF sin otras anomalías clínicas o paraclínicas asociadas.
3. Malformación múltiple: pacientes con FOF y otras anomalías congénitas o fenotípicas, que no corresponden a ningún síndrome o secuencia conocida. En el caso de que los pacientes tuvieran 1 o más miembros familiares afectados, se consideró como caso múltiple familiar sindrómico o no sindrómico dependiendo de la categoría anterior. Todos los pacientes recibieron atención y manejo integral médico, quirúrgico y de rehabilitación.
5.3.2. Toma de muestras sanguíneas.
Previo asentimiento, lectura y firma del formato de consentimiento informado, se realizó la toma de muestras de sangre en los casos sindrómicos y múltiple familiar, con el objetivo de realizar pruebas diagnósticas moleculares que corroboraran el diagnostico clínico. La toma de muestras fue realizada por la estudiante de maestría y el bacteriólogo Julio Cesar Martínez, miembro del grupo de investigación de Genética Humana de la Universidad de la Sabana
Las muestras fueron rotuladas y almacenadas el banco de muestras del Laboratorio de Genética Humana de La Universidad de La Sabana, previa asignación de un código de ingreso a la base de datos.
5.3.3. Construcción de Base de Datos.
Se creó una base de datos en Excel, la cual contempló las siguientes variables: Edad. Género. Procedencia. Tipo de Fisura. Lateralidad. Antecedente de Prematuridad Antecedentes maternos Perdidas gestacionales Desarrollo psicomotor Patologías
Familiares afectados FOF
Anomalías congénitas- rasgos fenotípicos asociados: Tejido conectivo
Cardiovascular Urogenital
Piel y anexos cutáneos. Sistema nervioso
Medidas antropométricas: Peso / edad
Peso / talla- longitud Talla/ edad.
PC/ edad IMC
5.3.4. Análisis Estadístico
Todos los datos se analizaron mediante Epi-Info versión 7. Tablas de frecuencia y de contingencia, fueron utilizadas para analizar la distribución de las variables. Por medio del cálculo de odds ratio (OR), prueba de chi-cuadrado y prueba exacta de Fisher se analizaron posibles asociaciones entre Fisuras Orofaciales sindrómicas y factores de alto riesgo obstétrico, prematuridad y comorbilidades. La significancia estadística fue considerada como una p < 0.05.
5.3.5. Extracción de DNA
La extracción de DNA de las muestras sanguíneas, se llevó a cabo por la estudiante de maestría en el Instituto de Genética de la Pontificia Universidad Javeriana, bajo la tutoría de la bacterióloga Paola Ayala miembro del Instituto. Protocolo de extracción: PROBE.
5.3.6. Análisis Molecular.
Las muestras de DNA de algunos de los casos sindrómicos y múltiple familiar fueron enviadas al laboratorio de epidemiologia genética y bioinformática de La Universidad de Southampton (Inglaterra), liderado por el Dr. Andrew Collins PhD., en donde se está realizando el análisis molecular por secuenciación exomica. 5.4. Tutorías y Seminarios.
Semanalmente se realizaron discusiones académicos entre los miembros del grupo en torno a la formulación de hipótesis y revisión de la literatura.
Los casos clínicos evaluados fueron comentados y discutidos de igual forma.
5.5. CONSIDERACIONES ÉTICAS
Riesgos, beneficios y confidencialidad de los pacientes.
La muestra poblacional no recibió intervenciones ajenas a aquellas de naturaleza diagnóstica y terapéutico contempladas en el marco de atención integral en salud.
Los beneficios obtenidos derivaron del diagnóstico clínico y molecular de su patología y comprenden una aproximación al riesgo de recurrencia en su descendencia.
Los beneficios a largo plazo comprenden la extensión del campo de investigación en ciencias básicas en el país y el entendimiento de la genética y biología molecular de este grupo de enfermedades.
Los riesgos obedecieron a aspectos inherentes al instrumento metodológico para la obtención de las muestras. Molestias, dolor y el riesgo de infección del sitio de venopunción. Riesgos que se redujeron con la ejecución apropiada del protocolo de toma y transporte de muestras sanguíneas.
Las muestras sanguíneas fueron el único sustrato de extracción de DNA para su posterior análisis molecular.
Las muestras y los datos clínicos fueron almacenados en el banco de muestras del laboratorio de Genética Humana Universidad de La Sabana. La base de datos realizada se creó bajo códigos que reemplazan los datos de identificación de los pacientes, con el propósito de conservar su confidencialidad. Se usan claves para el acceso a medios electrónicos, bases de datos y áreas de almacenamiento de las muestras. Las publicaciones y demás documentos de divulgación investigativa se harán reservando la identidad de cada uno de los individuos.
6. RESULTADOS