9.1 Pruebas de control de calidad pre-enfriamiento – Referidas al manual de Control de Calidad de la AIEA 2003.
a) Corroboración del peso de la pupa para determinar la medida volumétrica de pupas
a empacar.
b) Determinación de la edad de la pupa (coloración de ojos). c) Habilidad de vuelo de Laboratorio.
d) Tiempo de emergencia del 50% de adultos. e) Proporción sexual.
f) Prueba de longevidad bajo tensión oscuridad.
9.2 Pruebas de control de calidad post-enfriamiento
a) Voladoras absolutas.
b) Longevidad con agua y sin agua.
9.3 Prueba de Voladoras Absolutas
Objetivo
Determinar las pérdidas o daño ocasionado al material biológico por efectos del enfriamiento a que son sometidas durante el proceso de colecta y así mismo obtener el porcentaje de voladoras absolutas para determinar las densidades de adulto volador liberado.
a) Materiales y Equipo
Caja Petri para el peso por gramo, vaso de precipitado de 1 litro, pupa por mezclada o colecta, engrapadora, balanza analítica, grapas, lapiceros, tamiz, bolsas de papel kraft, calculadora, espátula, cinta adhesiva, cremeros, marcador para identificar, cajas parc, porciones de dieta de agar y/o dieta seca, talco industrial, brocha de 2 pulgadas de ancho, papel parafinado (de la misma medida de la dieta), pitas para su amarre y formatos para registro.
b) Metodología
Inicio de la prueba
Por ejemplo: Peso de cada bolsa =15.50 gramos aprox. Peso de las seis bolsas 93.0 (el peso de las bolsas es variable).
Pupas por gramo: Se limpia la pupa a ser utilizada por medio de un tamizado. Seguidamente pesar un gramo y contar el número de pupas; realizar tres repeticiones de un gramo y el resultado es el promedio de los conteos. Este procedimiento es por envío lote y colecta. Por ejemplo:
133 + 132 + 133 = 398 /3= 133 pupas/g (peso en limpio)
Se coloca la medida en seis bolsas de papel kraft de 7,500 pupas lo que equivale a 45,000 pupas por caja (esta cantidad se divide entre el número de pupas por gramo) el resultado será el peso de la medida a colocar en cada bolsa.
Por ejemplo
Por bolsa 7500/133 = 56.39 gramos Por caja 45,000/133 = 338.34 gramos
Este resultado (338.34 gramos) nos indica la medida para las pruebas de tratamiento de normal y frío, las mismas son identificadas de la siguiente manera: número de envío, lote colecta y fecha de recepción.
Se coloca una grapa en el centro de las bolsas dejando únicamente dos espacios laterales para que pueda salir el insecto. En el espacio de la tapadera diseñado para este fin se coloca una porción de dieta de agar (gelatinosa) para su alimentación y en la parte superior de la porción de dieta el papel parafinado. Luego se les coloca pita con ganchos para un amarre seguro y se les traslada a la sala de emergencia hasta el día en que el material es liberado. Estas salas se encuentran a una temperatura mínima de 21°C y una máxima de 23°C.
Registro del formato de Voladoras Absolutas: NORMAL Y FRIO. Nombre de la cepa Envío Lote Mezclada (colecta) Fecha Liberación
Pupas por kilogramo: (133,000) = se multiplica el promedio por 1,000 Peso pupa: (1 / 133) 1,000 = 7.51 mg
Peso adulto: 7.51 x 0.9 = 6.76 mg
No. de gramos/caja: Este resultado se obtiene de multiplicar 56.39 por 6 bolsas que contiene cada caja.
9.4 Liberación
a) Metodología
El día que ha sido programada su liberación se separa la prueba de tratamiento, la cual es introducida al cuarto frío a una temperatura promedio de inicio de –3° mínimo y un máximo de 2 - 3 °C aproximadamente durante 45 minutos a 60 minutos
Posteriormente se vacía el contenido de las 6 bolsas tanto de la caja con tratamiento normal como la del frío en una charola plástica color negro (antes se le aplica talco industrial para evitar que se escapen las moscas no voladoras) y permitir escapar al insecto volador. Al completar la liberación, se vierten los residuos en una bolsa de papel kraft para ser pesados. Estas liberaciones se realizan aproximadamente a las 6:00 de la mañana en adelante (siempre y cuando exista claridad para motivar a la mosca).
Seguidamente se introduce a una temperatura de 0 °C con la finalidad de dormirla y facilite el peso de residuo en la balanza analítica (se vacía en un vaso de 1 litro).
b) Cálculo del Porcentaje de Voladoras
Calculo de la diferencia A - B
Gramos pupa / caja - peso residuo Normal 413.53 - 142.24 = 271.29 Frío 413.53 - 152.27 = 261.26 Porcentaje de voladoras
Diferencia de Normal- frío (1000)/peso adulto/No. Pupas/caja (x) 100 =
Normal 271.29 (1000) / 6.77 / 55,000 (100) = 72.86 Frío 261.26 (1000) / 6.77 / 55,000 (100) = 70.17
Perdida
Es la diferencia del % de voladoras normal y frío 72.86 - 70.17 = 2.69
9.5 Longevidad de adulto frío
Objetivo
Determinar el tiempo que viven el 50% de las moscas después de su tratamiento frío, con disponibilidad de agua y sin agua.
a) Materiales y Equipo
Jaula pequeña de plexiglás (grosor de 0.5 cm, con dimensiones de 21 x 21 x 21 cm y un agujero de 10 cm de diámetro en la parte superior cubierto con un cedazo plástico y un agujero de 15 cm de diámetro en la parte frontal).
Manguera plástica (para colocar en el círculo de la caja plexiglás). Tela de tul (para hacer mangas).
Tubo succionador con pipeta. Termómetro.
Vasos plásticos de 0.5 litro (con orificio en la parte superior extrema). Cinta adhesiva.
Frascos entomológicos. Azafates.
Hules (para colocar en vasos). Algodón común.
Algodón dental. Agua destilada.
Estantería tubos fluorescentes de 20 watts.
b) Metodología
Al quinto día de su tratamiento frío (liberación) se procede a colectar una muestra aproximadamente 600 adultos, transfiriéndolos a una caja plexiglas.
Se realizan 5 repeticiones identificados cada uno con No. de envió, lote, colecta, fecha y la hora de introducirlas.
Se preparan en un azafate 5 repeticiones con 30 moscas (vaso 0.5 litro). Con agua
Se perfora el orificio de cada vaso de medio litro a un costado sellando con cinta adhesiva (lado superficial) y se cubre con una malla que tiene las siguientes medidas: 2 cm de abertura para no obstaculizar el ingreso de la mosca, y se sujeta la malla con hule, seguidamente se introduce el frasco entomológico (contiene agua destilada y algodón dental el cual le permitirá ingerirla).
Es el mismo procedimiento a excepción de que se le coloca en el orificio algodón común y sin agua. Estas pruebas son trasladadas a la sala de prueba con condiciones de temperatura mínima de 24 °C y un % 60 a 70 H.R.
Después de 8 horas se registra la primera lectura hasta obtener un 50 % de mortalidad. Cada período de lectura se realizará a cada 6 horas.
Para calcular el tiempo de vida
- Se colocan los promedios en una hoja milimetrada indicando la hora y los porcentajes, se grafica para conocer la hora en que se obtuvo 50% de mortalidad, como referencia se toma la hora de inicio de la succión del material biológico y la diferencia será el número de horas de ciclo de vida. 100 90 80 % 70 E M 60 E R 50 G E 40 N C 30 I A 20 10 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 HORAS
FORMATOS DE RECEPCION, MANEJO Y LIBERACION