1. Rosa de bengala
La brucelosis es responsable de enormes pérdidas económicas en áreas ganaderas alrededor del mundo, así como un riesgo potencial para la salud humana, particularmente en países en vías de desarrollo. Aun cuando los reportes de incidencia y prevalencia de la enfermedad varían considerablemente de país a país, la brucelosis bovina causada principalmente por la bacteria Brucella abortus sigue siendo la forma mas difundida. Por consiguiente, se hace necesario el establecimiento de programas apropiados para control y erradicación de esta zoonosis.
Las pruebas serológicas son las herramientas más útiles para evaluar la epidemiología de la brucelosis y la eficacia de los programas de vacunación. Los métodos más comúnmente usados incluyen aglutinación, fijación de complemento, inmunodifusión en gel e inmunoensayos enzimáticos. Actualmente, mediante la combinación de una buena información clínico-epidemiológica, junto con el uso de pruebas serológicas presuntivas y confirmatorias, se obtienen mejores resultados en el diagnóstico preliminar de casos sospechosos. Es importante además capacitar al personal médico y de laboratorio, ya que la brucelosis es una entidad de origen insidioso, difícil de identificar, y representa un riesgo de contaminación a nivel de laboratorio si no se siguen procedimientos apropiados con personal conciente del peligro de esta infección bacteriana.
Materiales y reactivos
• Suspensión concentrada de Brucella abortus (cepa Weybridge 99) inactivada por calor y
fenol 0.5%, dispersa en buffer de lactato pH 5.0 y teñida con Rosa de Bengala. • Pipeta automática
• Placa de cerámica blanca lisa • Aplicadores descartables • Agitador inclinado (opcional)
• Sueros y antígeno almacenados a 2-8°C. Llevar a temperatura ambiente antes de usar • Solución salina 0.85 % o PBS 0.01 M pH 7.4
Procedimiento Animales
1. Colocar una gota de 15 a 30 µl de cada suero en la placa
2. Colocar una gota de 15 a 30 µl de Rosa Bengala a la par de cada suero 3. Mezclar con el aplicador para homogenizar
4. Agitar manualmente o en agitador por 5 a 10 minutos
Humanos
1. Hacer diluciones dobles seriadas hasta 1:64 con solución salina o PBS 2. Diluir el antígeno 1:5 con PBS
3. Colocar 15 a 30 µl de cada dilución junto a una cantidad igual de antígeno diluido en la placa 4. Mezclar y agitar de la misma forma que el procedimiento anterior
Bacteriología Diagnóstica Pruebas Serológicas
Interpretación
No aglutinación: ausencia de anticuerpos Aglutinación visible: presencia de anticuerpos
2. Antiestreptolisina O (ASO)
La estreptolisina O (SO), es una de las toxinas producidas por bacterias del género
Streptococcus pyogenes, o estreptococos beta hemolíticos del grupo A de Lancefield. Es una
citolisina lábil al oxígeno y sensible a colesterol. Debido a la inmunogenicidad de la toxina, es posible determinar los anticuerpos en el suero de pacientes que han estado en contacto con esta bacteria Gram positiva. En personas sanas se pueden encontrar títulos bajos de anticuerpos contra SO, sin embargo, un aumento en el título es indicativo de una infección activa (reciente) como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal o erisipela.
El primer test serológico para la determinación de ASO fue descrito por Todd en 1932. Esta prueba se basa en la neutralización de la SO mediante cantidades crecientes del suero problema. El exceso de SO no neutralizada, es revelado por medio de hemólisis de los eritrocitos sensibilizados. Se pueden detectar también anticuerpos contra los estreptococos utilizando isoenzimas del ADN, así como mediante una prueba de hemaglutinación, denominada "Streptozyme" en la cuál se adsorben varios antígenos bacterianos sobre eritrocitos (hialuronidasa, estreptokinasa, ADNasa B, etc). El presente método se basa en la detección de anticuerpos anti-estreptolisina O en suero por su reacción contra la SO adsorbida sobre un soporte inerte de látex, lo que produce una aglutinación visible microscópicamente.
Materiales y reactivos
• Reactivo de látex (Wiener Lab): suspensión de partículas de látex poliestireno recubiertas con estreptolisina O.
• Control positivo y control negativo.
• Sueros no hemolizados almacenados a 2-8 ºC. Llevar a temperatura ambiente antes de usar
• Solución salina o PBS
• Pipeta automática de volumen variable • Placa de vidrio transparente
• Aplicadores descartables
Procedimiento Prueba cualitativa
1. Agitar el reactivo látex varias veces con el gotero
2. Colocar una gota (50 µl) de suero junto a 50 µl de reactivo látex en la placa 3. Mezclar con aplicador hasta homogenizar
4. Agitar por dos minutos y leer
Bacteriología Diagnóstica Pruebas Serológicas
2. Repetir el procedimiento anterior
Interpretación
No aglutinación: suspensión se mantiene homogénea Aglutinación visible: presencia de anticuerpos ASO
Título: inverso de la máxima dilución a la que se observa una aglutinación visible ASO (UI/ml) = título × sensibilidad de la reacción (200 UI/ml)
3. Prueba para el diagnostico presuntivo de sífilis (VDRL)
La sífilis es una enfermedad preferentemente de transmisión sexual causada por la espiroqueta Treponema pallidum, que invade las mucosas intactas o la piel con abrasiones leves. La detección y tratamiento de la enfermedad en etapas tempranas es fundamental a fin de evitar complicaciones graves como sífilis cardiovascular, neurosífilis y sífilis congénita.
Los anticuerpos inespecíficos o también conocidos como no-treponémicos o reagínicos, se presentan en pacientes sifilíticos y están dirigidos contra componentes propios, específicamente de naturaleza lipídica; mientras que los treponémicos o específicos reconocen tanto el T. pallidum como cepas de bacterias muy relacionadas a este género. La prueba de VDRL (siglas del inglés Venereal Disease Research Laboratory) es una técnica que detecta anticuerpos anti-cardiolipina, los cuales se pueden encontrar en embarazo, así como en infecciones agudas o crónicas (malaria, tuberculosis, lepra, brucelosis, artritis, cáncer, diabetes, lupus y otras enfermedades autoinmunes).
El principio de esta técnica se basa en la floculación de suspensión antigénica (cardiolipina- lecitina-colesterol) con cuando se mezcla con los anticuerpos reagínicos del suero.
Materiales y reactivos
• Placas o portaobjetos con anillo de parafina o cerámica con un diámetro de 14 mm • Pipetas automáticas
• Rotador mecánico ajustable a 180 rpm • Microscopio
• Solución salina 0.85%
• Antígeno: suspensión acuosa de cardiolipina y lecitina purificados en buffer fosfatos con cloruro de colina y EDTA (USR, OMS)
• Sueros o plasmas no bemolizados, sin inactivar
Procedimiento Prueba cualitativa
1. Colocar 50 µl de suero en un anillo de la lámina con micropipeta
2. Agregar una gota de la suspensión del antígeno con el gotero calibrado 3. Poner a rotar las láminas por 4 minutos a 180 rpm.
4. Observar al microscopio sin carro y aumento de 100X con la máxima iluminación.
Prueba semicuantitativa
Bacteriología Diagnóstica Pruebas Serológicas
2. Realizar el procedimiento anterior
Interpretación
R (reactivo): grumos grandes y medianos DR (débilmente reactivo): grumos pequeños NR (no reactivo): grumos ausentes
Bacteriología Diagnóstica Muestras Clínicas