Preparación de los reactivos
Los reactivos incluidos en el estuche están listos para el uso y forman una unidad inseparable.
La información necesaria para el correcto funcionamiento se introduce en el analizador a través de los códigos de barras de los reactivos.
Conservación y estabilidad
Conservar a 2‑8 °C. No congelar.
Conservar el estuche de reactivos Elecsys en posición vertical para garantizar la disponibilidad total de las micropartículas durante la mezcla automática antes del uso.
Estabilidad:
sin abrir, a 2‑8 °C hasta la fecha de caducidad indicada
una vez abierto, a 2‑8 °C 12 semanas en los analizadores 8 semanas
Obtención y preparación de las muestras
Sólo se ha analizado y considerado apto el tipo de muestras aquí indicado. Suero recogido en tubos estándar de muestra.
Plasma con EDTA tripotásico.
Debido a que la vida media de la PTH es corta, se recomienda que, en caso de necesitar suero, la sangre se centrifugue inmediatamente. Asimismo se recomienda emplear preferentemente muestras de plasma tratado con EDTA tripotásico, pues es más estable que el suero. Criterio: Comparación de método entre suero y plasma, pendiente de 0.9‑1.1 + intersección dentro de < ± 2 veces la sensibilidad analítica (LID) + coeficiente de correlación > 0.95.
Suero: estable durante 8 horas a 15‑25 °C; 2 días a 2‑8 °C; 6 meses a ‑20 °C.
Plasma: estable durante 2 días a 15‑25 °C; 3 días a 2‑8 °C; 6 meses a ‑20 °C.
Los tipos de muestra aquí indicados fueron analizados con tubos de recogida de muestras seleccionados, comercializados en el momento de efectuar el análisis, lo cual significa que no fueron analizados todos los tubos de todos los fabricantes. Los sistemas de recogida de muestras de diversos fabricantes pueden contener diferentes materiales que, en ciertos casos, pueden llegar a afectar los resultados de los análisis. Si las muestras se procesan en tubos primarios (sistemas de recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de los tubos. Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.
No utilizar muestras ni controles estabilizados con azida.
Se debe garantizar una temperatura de 20‑25 °C para la medición de muestras, calibradores y controles.
Para evitar posibles efectos de evaporación, determinar las muestras, los calibradores y los controles que se sitúan en los analizadores dentro de un lapso de 2 horas.
Material suministrado
Consultar la sección "Reactivos - Soluciones de trabajo" en cuanto a los reactivos suministrados.
Material requerido adicionalmente (no suministrado)
▪ REF 04894138190, PTH STAT CalSet, para 4 x 1 mL
▪ REF 05618860190, PreciControl Varia, para 2 x 3 mL de cada
PreciControl Varia 1 y 2 ▪ Equipo usual de laboratorio
▪ Analizadores Elecsys 2010 y cobas e
Material adicional para los analizadores Elecsys 2010 y cobas e 411: ▪ REF 11662988122, ProCell, 6 x 380 mL de tampón del sistema
▪ REF 11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL de solución detergente para
la célula de lectura
▪ REF 11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL de aditivo para el
agua de lavado
▪ REF 11933159001, Adapter for SysClean
▪ REF 11706802001, Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 tubos de ensayo
▪ REF 11706799001, Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 puntas de pipeta
Material adicional para los analizadores cobas e 601 y cobas e 602: ▪ REF 04880340190, ProCell M, 2 x 2 L de tampón del sistema
▪ REF 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L de solución detergente para la
célula de lectura
▪ REF 03023141001, PC/CC‑Cups, 12 recipientes para atemperar las
soluciones ProCell M y CleanCell M antes de usar
▪ REF 03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL de solución detergente
para finalizar el procesamiento y enjuagar tras cambiar de reactivos ▪ REF 03004899190, PreClean M, 5 x 600 mL de solución detergente de
detección
▪ REF 12102137001, AssayTip/AssayCup Combimagazine M,
48 cargadores con 84 tubos de ensayo o puntas de pipeta, bolsas de residuos
▪ REF 03023150001, WasteLiner, bolsas de residuos
▪ REF 03027651001, SysClean Adapter M
Material adicional para todos los analizadores:
▪ REF 11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL de solución
detergente del sistema
Realización del test
Para garantizar el funcionamiento óptimo del test, observe las instrucciones de la presente metódica referentes al analizador empleado. Consulte el manual del operador del analizador en cuanto a las instrucciones específicas de ensayo.
La mezcla de micropartículas que precede al uso así como la introducción de los parámetros específicos del test a través del código de barras impreso en la etiqueta del reactivo se efectúan automáticamente. No se requieren pasos manuales. Pero si, excepcionalmente, el analizador no pudiera leer el código de barras, el código numérico de 15 cifras deberá introducirse manualmente.
Analizadores cobas e 601 y cobas e 602: Es necesario emplear la solución PreClean M.
Antes del uso, atemperar los reactivos refrigerados a aprox. 20 °C y colocarlos en el rotor de reactivos (20 °C) del analizador. Evitar la formación de espuma. El analizador realiza automáticamente los procesos de atemperar, abrir y tapar los frascos.
Calibración
Trazabilidad: Este método fue estandarizado contra el test PTH
(REF 11972103). Este ha sido estandarizado frente a una prueba comercial
de PTH (RIA). La recuperación del estándar NIBSC 95/646 (OMS) se evaluó analizando diluciones en suero humano dentro del intervalo de medición (40‑4000 pg/mL) en 16 analizadores (analizadores cobas e 411 y
cobas e 601). La recuperación media fue de 100 % ± 4 %.
Cada reactivo Elecsys contiene un código de barras que incluye información específica para la calibración del lote de reactivos. La curva máster predefinida es adaptada al analizador a través del CalSet correspondiente.
Intervalo de calibraciones: Efectuar una calibración por lote con reactivos
frescos (registrados como máximo 24 horas antes en el analizador). Se recomienda repetir la calibración:
▪ después de 12 semanas si se trata del mismo lote de reactivos ▪ tras 7 días (al emplear el mismo estuche de reactivos en el analizador) ▪ en caso necesario: p. ej. si el control de calidad se encuentra fuera del
intervalo definido
Control de calidad
Para el control de calidad emplear PreciControl Varia. Adicionalmente pueden emplearse otros controles apropiados. Los controles de los diferentes intervalos de concentración deberían efectuarse junto con el test en determinaciones simples por lo menos 1 vez cada 24 horas, con cada estuche de reactivos y después de cada calibración.
Adaptar los intervalos y límites de control a los requisitos individuales del laboratorio. Los resultados deben hallarse dentro de los límites definidos. Cada laboratorio debería establecer medidas correctivas en caso de obtener valores fuera del intervalo definido
Sírvase cumplir con las regulaciones gubernamentales y las normas locales de control de calidad pertinentes.
Cálculo
El analizador calcula automáticamente la concentración de analito de cada muestra (en pg/mL o pmol/L).
Factores de conversión: pg/mL x 0.106 = pmol/L pmol/L x 9.43 = pg/mL
Limitaciones del análisis - interferencias No analizar muestras evidentemente hemolíticas.
La hemólisis ≥ 0.25 g/dL afecta al test. El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina < 1112 µmol/L o < 65 mg/dL), lipemia (Intralipid < 1500 mg/dL) ni biotina (< 205 nmol/L o < 50 ng/mL).
Criterio: Recuperación dentro de ± 10 % del valor inicial.
En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (> 5 mg/día), no recoger la muestra antes de transcurridas como mínimo 8 horas tras la última administración.
No se han observado interferencias por factores reumatoides hasta una concentración de 1500 UI/mL.
No se ha registrado el efecto prozona (high dose hook) con concentraciones de PTH de hasta 17000 pg/mL (1802 pmol/L). Se analizaron in vitro 16 fármacos de uso extendido sin encontrar interferencias.
En casos aislados pueden presentarse interferencias por títulos extremadamente altos de anticuerpos dirigidos contra anticuerpos específicos del analito, la estreptavidina y el rutenio. Estos efectos se han minimizado gracias a una concepción analítica adecuada.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico así como los resultados de otros exámenes.
Límites e intervalos Intervalo de medición
1.20‑5000 pg/mL ó 0.127‑530 pmol/L (definido por el límite de detección y el máximo de la curva máster). Los valores inferiores al límite de detección se indican como < 1.20 pg/mL (< 0.127 pmol/L). Los valores superiores al Límite de Detección se indican como > 5000 pg/mL o > 530 pmol/L.
Límites inferiores de medición
Límite inferior de detección del test
Límite inferior de detección: 1.20 pg/mL (0.127 pmol/L)
El límite de detección inferior equivale a la menor concentración medible de analito que puede distinguirse de cero. Se calcula como la concentración situada a 2 desviaciones estándar por encima del estándar más bajo (calibrador máster, estándar 1 + 2 DE, estudio de repetibilidad, n = 21).
Dilución
No es necesaria debido al amplio intervalo de medición.
Valores teóricos
15.0‑65.0 pg/mL (1.60‑6.90 pmol/L)16,17
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios valores.
Datos específicos de funcionamiento del test
A continuación, se indican los datos representativos de funcionamiento de las pruebas en los analizadores. Los resultados de cada laboratorio en particular pueden diferir de estos valores.
Precisión
La precisión ha sido determinada mediante reactivos Elecsys, una mezcla de sueros humanos y controles en un protocolo modificado (EP5‑A) del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 6 veces al día durante 10 días (n = 60). Se obtuvieron los siguientes resultados:
Analizadores Elecsys 2010 y cobas e 411
Repetibilidad Precisión intermedia
Media DE CV DE CV Muestra
pg/mL pmol/L pg/mL pmol/L % pg/mL pmol/L % SHb) 1 53.4 5.66 1.10 0.117 2.1 2.05 0.217 3.8 SH 2 215 22.8 3.56 0.377 1.7 5.93 0.628 2.8 SH 3 980 104 16.4 1.74 1.7 24.1 2.55 2.5
b) SH = Suero humano
La precisión ha sido determinada mediante reactivos Elecsys, una mezcla de sueros humanos y controles según un estudio separado de acuerdo al protocolo EP5‑A2 del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 2 ciclos diarios por duplicado, cada uno durante 21 días (n = 84). Se obtuvieron los siguientes resultados:
Analizadores Elecsys 2010 y cobas e 411
Repetibilidad Precisión intermedia
Media DE CV DE CV Muestra
pg/mL pmol/L pg/mL pmol/L % pg/mL pmol/L % PCc) Varia 1 48.4 5.13 0.801 0.085 1.7 1.10 0.117 2.3 PC Varia 2 164 17.4 2.55 0.270 1.6 3.07 0.325 1.9
c) PC = PreciControl
Analizadores cobas e 601 y cobas e 602:
Repetibilidad Precisión intermedia
Media DE CV DE CV Muestra
pg/mL pmol/L pg/mL pmol/L % pg/mL pmol/L % SH 1 2.47 0.262 0.243 0.025 9.8 0.406 0.043 16.5 SH 2 47.4 5.02 1.19 0.126 2.5 1.29 0.137 2.7 SH 3 255 27.0 4.26 0.452 1.7 5.61 0.595 2.2 SH 4 522 55.3 10.2 1.08 2.0 10.9 1.16 2.1 SH 5 3856 409 84.6 8.97 2.2 97.1 10.3 2.5 PC Varia 1 38.4 4.07 0.817 0.087 2.1 0.983 0.104 2.6 PC Varia 2 141 14.9 2.42 0.257 1.7 3.22 0.341 2.3 Comparación de métodos
En una comparación de método entre el test Elecsys PTH STAT (y) y el test Elecsys PTH (x) empleando muestras clínicas en el analizador Elecsys 2010 se obtuvieron las siguientes correlaciones (pg/mL): Número de muestras medidas: 159
Passing/Bablok18 Regresión lineal y = 1.047x + 0.314 y = 1.047x - 0.237 τ = 0.984 r = 0.998
La concentración de las muestras se situó entre aprox. 1.97 y 1394 pg/mL o aprox. 0.21 y 148 pmol/L.
Especificidad analítica
No se registró reactividad cruzada para: la osteocalcina, los fragmentos 1‑37 de PTH, la proteína asociada a la PTH (1‑86), la fosfatasa alcalina óseo-específica, los β‑CrossLaps.
Sensibilidad funcional
6.00 pg/mL (0.640 pmol/L)
La sensibilidad funcional es la menor concentración de analito cuya medición puede reproducirse con un coeficiente de variación de la precisión intermedia < 20 %.
Investigaciones clínicas relativas a la aplicación intraoperatoria
En 2006, la Academia Nacional de Bioquímica Clínica de los Estados Unidos publicó sus pautas de consenso para análisis de laboratorio en lugares de atención denominadas "Evidence Based Practice for Point of Care Testing".13 Las pautas recomiendan la determinación intraoperatoria de la hormona paratiroidea, 1) en pacientes con hiperparatiroidismo sometidos a una intervención quirúrgica, especialmente si se aplican procedimientos mínimamente invasivos o guiados, 2) en pacientes que repiten una intervención quirúrgica y 3) en reemplazo de las
determinaciones de laboratorio tradicionales de PTH durante la localización venosa en angiografías a fin de facilitar el muestreo. Las pautas
recomiendan además que en pacientes sujetos a una paratiroidectomía por hiperparatiroidismo se obtengan muestras basales antes de la exploración y previas a la resección de la glándula así como pasados 5 y 10 minutos tras la resección - con resultados que permitan constatar la reducción de 50 % respecto del nivel basal más alto de PTH. Las pautas también prevén la obtención de muestras adicionales.13
Varios grupos de investigadores efectuaron el análisis de PTH durante la cirugía paratiroidea utilizando el inmunoanálisis Elecsys PTH.6,7,8,9,10 En su aplicación destinada a demostrar la efectividad de la intervención quirúrgica en relación a la reducción postoperatoria de los niveles de calcio, el test presentó una sensibilidad general del 99.6 % y una especificidad general del 93.7 %.
Referencias bibliográficas
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in primary hyperparathyroidism. Br J Surg 1990;77:168-172. 3 Nussbaum S, Potts JT. Advances in Immunoassays for Parathyroid
Hormone. Clinical Applications to Skeletal Disorders of Bone and Mineral Metabolism. In Bilezikian JP, Levine MA, Marcus R (eds). The Parathyroids: Basic an Clinical Concepts. Raven Press, New York 1994:157-169.
4 Berson SA, Yalow RS, Aurbach GD, et al. Immunoassay of bovine and human parathyroid hormone. Proc Natl Acad Sci USA
1963;49:613-617.
5 Bergenfelz A, Nordén NE, Ahrén B. Intraoperative fall in plasma levels of intact parathyroid hormone after removal of one enlarged parathyroid gland in hyperthyroid patients. Eur J Surg 1991;157:109-112.
6 Ohe MN, Santos RO, Kunii IS, et al. Usefulness of a rapid immunometric assay for intra-operative parathyroid hormone measurements. Braz J Med Biol Res 2003;36(6):715-721.
7 Ohe MN, Santos, RO, Kunii IS, et al. Usefulness of intra-operative PTH measurement in primary and secondary hyperparathyroidism: experience with 109 patients. Arq Bras Endocrinol Metab 2006;50(5):869-875.
8 Seehofer D, Rayes N, Ulrich F, et al. Intra-operative measurement of intact parathyroid hormone in renal hyperparathyroidism by an inexpensive routine assay. Langenbecks Arch Surg
2001;386(6):440-443.
9 Seehofer D, Rayes N, Klupp J, et al. Predictive value of intact parathyroid hormone measurement during surgery for renal hyperparathyroidism. Langenbecks Arch Surg 2005;390(3):222-229. 10 Haustein SV, Mack E, Starling JR, et al. The role of intra-operative
parathyroid hormone testing in patients with tertiary hyperparathyroidism after renal transplantation. Surgery 2005;138(6):1066-1071.
11 Maier GW, Kreis ME, Renn W, et al. Parathyroid hormone after adenectomy for primary hyperparathyroidism: A study of peptide hormone elimination kinetics in humans. Jour Clin Endocrinol Metab 1998;83(11):3853-3856.
12 Carter AB, Howanitz TJ. Intra-operative testing for parathyroid hormone: a comprehensive review of the use of the assay and the relevant literature. Arch Pathol Lab Med 2003;127:1424-1442. 13 Nichols JH, Christenson RH, Clarke W, et al. National Academy of
Clinical Biochemistry Laboratory Medicine Practice Guidelines: Evidence Based Practice for Point of Care Testing. AACC Press:2006.
14 Bergenfelz A, Isaksson A, Lindblom P, et al. Measurement of parathyroid hormone in patients with primary hyperparathyroidism undergoing first and reoperative surgery. Br J Surg 1998;85:1129-1132. 15 Yang GP, Levine S, Weigel RJ. A spike in parathyroid hormone during
neck exploration may cause a false-negative intra-operative assay result. Arch Surg 2001;136:945-949.
16 Blind E. Measurement of Intact Parathyroid Hormone by an Extracting Two-Site Immunometric Assay. In: Schmidt-Gayk H, Armbruster FP, Bouillon R, (eds). Calcium regulating hormones, vitamin D metabolites, an cyclic AMP. Heidelberg: Springer 1990:151.
17 Thomas L. Parathyroid hormone (PTH). Clinical Laboratory Diagnosis. TH-Books, Frankfurt. 1st english edition 1998:248-250.
18 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III.
J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790.
Para más información acerca de los componentes, consultar el manual del operador del analizador, las hojas de aplicación, la información de producto y las metódicas correspondientes (disponibles en su país).
En la presente metódica se emplea como separador decimal un punto para distinguir la parte entera de la parte fraccionaria de un número decimal. No se utilizan separadores de millares.
Símbolos
Roche Diagnostics emplea los siguientes símbolos y signos adicionalmente a los indicados en la norma ISO 15223‑1.
CONTENT Contenido del estuche
SYSTEM Analizadores/instrumentos adecuados para los
reactivos Reactivo Calibrador
Volumen tras reconstitución o mezcla La barra del margen indica cambios o suplementos significativos.
© 2013, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com
REF SYSTEM
05608546 190 100
Elecsys 2010
MODULAR ANALYTICS E170
cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Español
Nota
El valor medido de PTH (1‑84) de una muestra de paciente puede variar según el método de análisis aplicado. Por tanto, el laboratorio siempre debe indicar el método de determinación de PTH (1‑84) empleado. Los valores de PTH (1‑84) de un paciente, obtenidos mediante diferentes procedimientos de test, no pueden compararse directamente entre sí y dan lugar a interpretaciones erróneas por parte del médico. Por esta razón, se recomienda que el laboratorio indique los resultados al médico haciendo la siguiente anotación: “Los resultados indicados a continuación fueron obtenidos con el test Elecsys PTH (1‑84). Los resultados no pueden intercambiarse con los obtenidos por análisis de otros fabricantes.”
No se han establecido los datos de funcionamiento del presente test para muestras pediátricas.
Uso previsto
Test inmunológico in vitro para la determinación cuantitativa de la hormona paratiroidea biointacta PTH (1‑84) en suero y plasma humanos destinado al diagnóstico diferencial de la hipercalcemia y la hipocalcemia. El test puede emplearse para determinaciones intraoperatorias.
Este inmunoensayo de electroquimioluminiscencia
(electrochemiluminescence immunoassay) “ECLIA” está concebido para su empleo en los analizadores automáticos Elecsys y cobas e.
Características
La parathormona (PTH) se forma en las glándulas paratiroideas, desde donde se incorpora a la circulación sanguínea. La PTH 1‑84, también denominada PTH biointacta, está compuesta por una única cadena de polipéptidos con 84 aminoácidos y tiene un peso molecular de aprox. 9500 daltons.1
La PTH tiene una vida media muy corta, después de algunos minutos es escindida en varios fragmentos y eliminada muy rápidamente de la circulación.2 La medición de la PTH 1‑84 biológicamente intacta permite
evaluar de forma directa la actividad secretora de las glándulas paratiroideas.3,4
La PTH tiene como tarea principal incrementar las concentraciones séricas de calcio estimulando la movilización del calcio desde el hueso y su reabsorción renal en el túbulo distal. La interacción entre la PTH y la calcitonina garantiza un nivel sanguíneo constante de calcio. La secreción de PTH es inhibida por altas concentraciones de calcio mientras que la PTH aumenta cuando la concentración de calcio disminuye. Asimismo, la PTH estimula la actividad de la enzima 1‑alfa hidroxilasa en el túbulo proximal renal intensificando la síntesis de la 1,25 dihidroxivitamina D, el metabolito activo de la vitamina D que, a su vez, aumenta la absorción intestinal del calcio y ejerce un mecanismo de retroalimentación endocrina sobre la secreción de PTH. La PTH disminuye también la reabsorción renal de fosfato en el túbulo proximal reduciendo de esta forma el fosfato sérico.5
Además, estimula la formación ósea fijándose a sus receptores osteoblásticos aumentando de esta manera la síntesis de colágeno de tipo I.6 Este efecto osteoanabólico se emplea actualmente en la práctica
clínica para el tratamiento de la osteoporosis.7
Al producirse alteraciones en la síntesis de PTH debido a trastornos en la glándula paratiroidea, el nivel de calcio en sangre supera lo normal (hipercalcemia) o bien no alcanza la media (hipocalcemia). Para detectar una disminución funcional de la glándula paratiroidea (hipoparatiroidismo)
se requieren análisis altamente sensibles capaces de registrar niveles de PTH inferiores a los normales.8,9
La hiperfunción de la glándula paratiroidea produce un aumento en la secreción de PTH (hiperparatiroidismo), causado en primer lugar por adenomas de las glándulas paratiroideas. El hiperparatiroidismo secundario como resultado de otras enfermedades (como p. ej. la deficiencia de vitamina D) va acompañado de bajos niveles de calcio en sangre. En la evaluación del hiperparatiroidismo, se concede actualmente una importancia singular a la determinación de las concentraciones de PTH y calcio.
Investigaciones clínicas relativas a la aplicación intraoperatoria
La determinación intraoperatoria de la PTH durante la resección de adenomas situados en las glándulas paratiroideas se efectúa en casos de hiperparatiroidismo primario,10,11,12 así como también en el
hiperparatiroidismo secundario acompañado de una deficiencia renal13,14 y
en el hiperparatiroidismo terciario tras trasplantes renales.15
Debido a que la vida media de la PTH es de 3‑5 minutos,16 una caída
significativa de los niveles posquirúrgicos de PTH tras haberse efectuado la resección de la glándula anormal permite al cirujano evaluar la resección completa y si la extracción del tejido paratiroideo hiperfuncionante ha sido exitosa.17
En 2006, la Academia Nacional de Bioquímica Clínica de los Estados Unidos publicó sus pautas de consenso para análisis de laboratorio en lugares de atención denominadas "Evidence Based Practice for Point of Care Testing".18
Las pautas recomiendan la determinación intraoperatoria de la hormona paratiroidea
1. en pacientes con hiperparatiroidismo sometidos a una intervención quirúrgica, especialmente si se aplican procedimientos mínimamente invasivos o guiados,
2. en pacientes que repiten una intervención quirúrgica y
3. en reemplazo de las determinaciones de laboratorio tradicionales de PTH durante la localización venosa en angiografías a fin de facilitar el muestreo.
Las pautas recomiendan además que en pacientes sujetos a una