3.4 PROCEDIMIENTOS Y TÉCNICAS
3.4.3 RECOLECCIÓN DE DATOS
Los datos fueron vertidos en la siguiente tabla.
Muestra Streptococcus mutans Lactobacillus casei
Agua estéril Alcohol 96% Extracto etanólico
Agua estéril Alcohol 96% Extracto etanólico 1 0 mm 11 mm 32mm 0 mm 9mm 31mm 2 0 mm 12mm 33m 0 mm 10mm 36mm 3 0 mm 17mm 35mm 0 mm 12mm 37mm 4 0 mm 8mm 32mm 0 mm 16mm 40mm 5 0 mm 15mm 35mm 0 mm 12mm 34mm 6 0 mm 18mm 38mm 0 mm 12mm 29mm 7 0 mm 17mm 37mm 0 mm 13mm 33mm 8 0 mm 16mm 32mm 0 mm 9mm 35mm 9 0 mm 18mm 35mm 0 mm 11mm 32mm 10 0 mm 11mm 35mm 0 mm 10mm 30mm
39 3.4.4 PROCESAMIENTO DE LOS DATOS
Para el procesamiento de los datos obtenidos se utilizaron métodos estadísticos con el programa SPSS 15.0. Primero se aplicó la prueba de Kolmogorov – Smirnov para evaluar si los datos obtenidos tenían una distribución normal.
Debido a que los datos resultaron tener una distribución normal, se aplicó la prueba T-STUDENT para evaluar si existía diferencia estadísticamente significativa entre los halos de inhibición del alcohol a 96% y los producidos por el extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense
40 IV. RESULTADOS
CUADRO 1. HALOS DE INHIBICIÓN DEL ALCOHOL AL 96° Y DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense var. Truxillense EN
LOS CULTIVOS DE S. mutans Y L. casei
Valores estadísticos S. mutans L. casei
Alcohol 96° Extracto Etanólico de Hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense Alcohol 96° Extracto Etanólico de Hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense Media 14.3 34.4 11.4 33.7 Desviación Estándar 3.590391217 7.626508793 2.053821272 7.840454532 Mediana 15 35 11 33 Moda 11 35 12 Varianza 12.45555556 4.488888889 4.488888889 11.56666667 Rango 0.074 0.222 Mínimo 8 32 9 29 Máximo 18 38 16 40 Suma 143 344 114 337
En el Cuadro 1 se observan las medias de los halos de inhibición del alcohol en los cultivos de S. mutans, siendo de 14,3 mm, y en el caso de los cultivos de L. casei es de 11,4 mm. Los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense en los cultivos del S.
mutans es de 34,4 mm y en los de L. casei es de 33.7 mm
Coincidentemente, la varianza de los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense en los cultivos de S. mutans es igual a la del alcohol de 96° en los cultivos de L.casei.
41 CUADRO 2. FRECUENCIA DE LOS DE INHIBICIÓN DEL ALCOHOL 96° EN
LOS CULTIVOS DE S. mutans
Frecuencia Porcentaje Porcentaje válido Porcentaje acumulado Válidos 8.00 1 10.0 10.0 10.0 11.00 2 20.0 20.0 30.0 12.00 1 10.0 10.0 40.0 15.00 1 10.0 10.0 50.0 16.00 1 10.0 10.0 60.0 17.00 2 20.0 20.0 80.0 18.00 2 20.0 20.0 100.0 Total 10 100.0 100.0
Se observa el valor mínimo de los halos de inhibición del alcohol de 96° es de 8mm y el mayor, de 18 mm en los cultivos de S. mutans.
42 CUADRO 3. FRECUENCIA DE LOS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN
LOS CULTIVOS DE S. mutans
Frecuencia Porcentaje Porcentaje válido Porcentaje acumulado Válidos 32.00 3 30.0 30.0 30.0 33.00 1 10.0 10.0 40.0 35.00 4 40.0 40.0 80.0 37.00 1 10.0 10.0 90.0 38.00 1 10.0 10.0 100.0 Total 10 100.0 100.0
Se observa el valor mínimo de los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense es de 32mm y el mayor, de 38 mm en los cultivos de S. mutans.
43 CUADRO 4. FRECUENCIA DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL ALCOHOL 96°
EN LOS CULTIVOS DE L. casei
Frecuencia Porcentaje Porcentaje válido Porcentaje acumulado Válidos 9.00 2 20.0 20.0 20.0 10.00 2 20.0 20.0 40.0 11.00 1 10.0 10.0 50.0 12.00 3 30.0 30.0 80.0 13.00 1 10.0 10.0 90.0 16.00 1 10.0 10.0 100.0 Total 10 100.0 100.0
Se observa el valor mínimo de los halos de inhibición del alcohol de 96° es de 9mm y el mayor, de 16 mm en los cultivos de L. casei.
44 CUADRO 5. FRECUENCIA DE LOS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN
LOS CULTIVOS DE L. casei
Frecuencia Porcentaje Porcentaje válido Porcentaje acumulado Válidos 29.00 1 10.0 10.0 10.0 30.00 1 10.0 10.0 20.0 31.00 1 10.0 10.0 30.0 32.00 1 10.0 10.0 40.0 33.00 1 10.0 10.0 50.0 34.00 1 10.0 10.0 60.0 35.00 1 10.0 10.0 70.0 36.00 1 10.0 10.0 80.0 37.00 1 10.0 10.0 90.0 40.00 1 10.0 10.0 100.0 Total 10 100.0 100.0
Se observa el valor mínimo de los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense es de 29mm y el mayor, de 40 mm en los cultivos de L. casei.
45 CUADRO 6. COMPARACIÓN DE MEDIAS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL
ALCOHOL AL 96° Y DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE
Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN LOS CULTIVOS DE S. mutans
*P=0.0000<0.05 se encontró diferencias significativas
GRÁFICO 5. COMPARACIÓN DE MEDIAS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL ALCOHOL AL 96° Y DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE
Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN LOS CULTIVOS DE S. mutans
Grupo N Media Desviación
estándar
T P
Alcohol al 96% 10 14.3 3.53 15.44 0.000*
Extractor etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense
46 Se observa que la media del halo de inhibición del alcohol al 96° es de 14.3mm±3.53mm y la media de los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense es de 34.4mm±2.12mm. Se observa que el extracto
etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense tiene mayor efecto antimicrobiano existiendo diferencia significativa, con un valor de P<0.05 con relación al alcohol al 96°, en los cultivos de
S. mutans.
En el Gráfico 5 podemos observar las barras que representan a la media de los halos de inhibición. La barra que se encuentra a la derecha representa al extracto de la hoja de Erythroxylum
47 CUADRO 7. COMPARACIÓN DE MEDIAS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL
ALCOHOL AL 96° Y DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE
Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN LOS CULTIVOS DE L. casei
*P=0.0000<0.05 se encontró diferencias significativas
GRÁFICO 6 COMPARACIÓN DE MEDIAS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DEL ALCOHOL AL 96° Y DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE
Erythroxylum novogranatense var. truxillense EN LOS CULTIVOS DE L. casei
Grupo N Media Desviación
estándar
T P
Alcohol al 96% 10 11.4 2.12 17.59 0.000*
Extractor etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense
48 Se observa que la media del halo de inhibición del Alcohol al 96° es de 11.4mm±2.12mm y la media de los halos de inhibición del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense es de 33.7mm±3.40mm. Se observa que el extracto
etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense tiene mayor efecto existiendo diferencia significativa, con un valor de P<0.05 con relación al alcohol al 96°, en los cultivos de L. casei.
En el Gráfico 6 podemos observar las barras que representan a la media de los halos de inhibición. La barra que se encuentra a la derecha representa al extracto de la hoja de Erythroxylum
novogranatense var. truxillense, se evidencia la marcada diferencia
49 V. DISCUSIÓN
La investigación tuvo por objetivo demostrar la actividad antibacteriana del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense, sobre las bacterias estudiadas: S. mutans y L. casei lo que quedó
comprobado por medio de los análisis estadísticos, ya que se encontró diferencias significativas para ambos microorganismos.
Los resultados sustentarían a los obtenidos en las investigaciones de Goicochea (1954), Ayala (1963), Coronel (1988), Navarro (1988) y Pando (1988) quienes encontraron una disminución en la prevalencia e incidencia de caries en sus grupos poblacionales que tenían el habito de chacchado. 3,4,6,7,8
Sin embargo, Coronel (1988) concluía que posiblemente sus hallazgos se debían a la abrasión dentaria marcada, el elevado número de piezas dentarias extraídas e indicadas para la extracción o a la acción neutralizadora de las sustancias alcalinas sobre los ácidos producidos por las bacterias, para la formación de lesiones cariosas.8 Al igual que Navarro (1988), quien comentaba que sus resultados obtenidos, podrían deberse a la perdida de anatomía oclusal de las piezas dentarias por la abrasión propia de los chacchadores de la hoja de coca.7
Ambos autores, no consideraron un posible efecto antimicrobiano de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense que ha quedado demostrado en la presente investigación.
Así mismo, se han encontrado resultados positivos del efecto antimicrobiano de la planta Erythroxylum novogranatense var. truxillense en diferentes investigaciones, como por ejemplo, la realizada por Mertz, M y
50 Reyes, E (1996) quienes hallaron inhibición del crecimiento de cocos y bacilos.
12
Al igual que Cam, O y Villanueva (1996) quienes probaron la acción inhibitoria progresiva del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de
Erythroxylum novogranatense var. truxillense frente a bacterias Gram negativas
y Gram positivas. En esta ocasión las concentraciones fueron veinte veces menor a la utilizada en la presente investigación. 11
En el ámbito estomatológico, los resultados se asemejan a los obtenidos por Borrovic (2006) quien encontró actividad antimicrobiana por parte del extracto alcohólico de Erythroxylum novogranatense var. truxillense en flora mixta salival. La concentración usada en nuestro estudio es diez veces mayor por lo que los halos de inhibición frente a S. mutans y L. casei tienen una media de 34.4mm±2.12mm y 33.7mm±3.40mm, a diferencia de 14.71 mm±0.19 mostrado en flora mixta salival.13
Cabe resaltar, que a diferencia de Borrovic (2006) quien utilizó como control negativo una dilución de alcohol con agua destilada en proporción 1:1, el control negativo de esta investigación fue agua destilada, y el positivo alcohol de 96°sin diluir.
Es importante recalcar que en los diversos estudios en que se encontró efecto antimicrobiano de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense, este fue hallado a pesar de que el método de extracción fuese
51 VI. CONCLUSIONES
El extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense tuvo una mayor actividad antibacteriana que el alcohol al 96% frente
a S. mutans.
El extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var.
truxillense tuvo una mayor actividad antibacteriana que el alcohol al 96% frente
a L. casei.
VII. RECOMENDACIONES
Realizar investigaciones con diferentes bacterias relacionadas con el proceso de caries dental.
Investigar el efecto antimicrobiano del extracto etanólico Erythroxylum
novogranatense var. truxillense en diferentes concentraciones.
Comparar la acción antimicrobiana del extracto de la hoja de
Erythroxylum novogranatense var. truxillense con otras soluciones existentes
en el mercado, como por ejemplo, clorhexidina al 0.02%
Determinar cuál es el o los principios activos de la hoja de Erythroxylum
novogranatense var. truxillense que le brinda la actividad antibacteriana
hallada, a través de análisis de cromatografía de gases con espectofotometria de masas, o con métodos de aislamiento de sus componentes.
Comparar el posible efecto antimicrobiano de otras especies de
Erythroxylum.
Analizar los posibles efectos secundarios de la hoja de Erythroxylum
54 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. World Health Organization – WHO. Oral Health in All Societies, Integration of oral health and general health. Geneva, 2006.
2. Ministerio de Salud del Perú – Plan de Salud Bucal 2005
http://www.minsa.gob.pe/portal/campanas/SBucal/documentos.asp
3. Goicochea A. Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a la masticación de hojas de coca en la hacienda Collambay – Trujillo [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 1954.
4. Ayala C. Acción de la coca y la llipta frente al ácido láctico y pH de la saliva y la dentadura del aborigen del altiplano [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 1963.
5. Úngaro. Patología oral en masticadores de hojas de coca [tesis doctoral] Lima: UPCH; 1972.
6. Coronel. Estudio comparativo de la prevalencia de caries, enfermedad periodontal y abrasión entre un grupo de sujetos son el hábito de masticación de hoja de coca y un grupo control en la comunidad de Apaycauchilla, provincia de Tarma [tesis de bachiller]. Lima: UPCH; 1988 7. Navarro M. Prevalencia de caries dental por superficie en sujetos co el
hábito de masticar hojas de coca en el distrito de Palcamayo, provincia de Tarma, departamento de Junín [tesis de bachiller]. Lima: UPCH; 1988. 8. Pando R. Estudio comparativo de la prevalencia de caries, enfermedad
periodontal y abrasión en un grupo de sujetos con el hábito de masticación de coca y un grupo control en la comunidad de Punsay, provincia de Tarma [tesis de bachiller]. Lima: UPCH; 1988.
55 9. Li Sing. Propiedades inhibitorias del crecimiento de hongos oportunistas in Vitro de Erythroxylum coca y Erythroxylum novogranatense var. truxillense (Mate de coca) [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 1994.
10. Castro P, Chávez J. Acción inihibitoria in Vitro de Erythroxylumlam. Var. Coca y Erythroxylum novogranetense var. truxillense “mate de coca” frente a uropatógenos Gram negativos multiresistentes [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 1995.
11. Cam O, Villanueva P. Acción inhibitoria in Vitro del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense (Morris)
var. truxillense (Rugby) frente a bacterias Gram (-) y Gram (+) [tesis de
bachiller]. Lima: UNMSM; 1996.
12. Mertz M, Reyes E. Propiedades inhibitorias del crecimiento in Vitro de Enterobacterias, cocos y bacillus de Erythroxylum coca lam. y
Erythroxylum novogranetense (Morris) var. truxillense Rugby (mate de
coca) [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 1996.
13. Borrovic F. 2006 “Efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de Erythroxylum novogranetense var. truxillense (coca) sobre flora mixta salival” [tesis de bachiller]. Lima: UNMSM; 2006.
14. Liébana. “Microbiología Oral” Editorial Mc Graw Hill 2da Edición 2002. 15. Negroni. Microbiología Estomatológica. Editorial Medica Panamericana,
1era Edición 1999.
16. Escobar M. “La hoja de coca, alimento y medicina ancestral” Revista Comunidad Tawantinsuyu Nro 05 2005.
17. Soukup J. Vocabulario de los nombres vulgares de la flora peruana y catálogo de géneros 1970. Edit. Salesiano – Lima, Pág. 250-251.
56 18. Dávila L. Q’eros Herencia Inca 1994 Primera Edición, Pág. 101 – 114 19. Baudillo J Enciclopedia Ilustrada Flora Medicinal, Toxica, Aromática,
Condimentada Editorial AEDOS 1ra Edición 1975 Pág. 169
20. García C, Correa E. Estudio fitoquímico preliminar y evaluación antimicrobiana de algunas plantas superiores colombianas. Rev. Colombiana de Ciencias Químico – Farmacéuticas 1995; (223): 42 – 48.
57 ANEXOS
1. FICHA DE RECOLECCIÓN DE DATOS