Hemos analizado la respuesta a LPS de las DC tras la diferenciación de los monocitos en presencia de lovastatina, a diferencia de estudios previos sobre el efecto de las estatinas en la activación de las DC, en los que analizaban el efecto del tratamiento con lovastatina sobre DC ya diferenciadas. En base a los ensayos de titulación comprobamos que los monocitos son particularmente sensibles al tratamiento con lovastatina, ya que concentraciones superiores a 1µM provocaban una importante disminución en la viabilidad celular. No observamos este fenómeno en el tratamiento con lovastatina de las moDC ya diferenciadas, que eran viables a concentraciones muy superiores, incluso de 10 µM. Este resultado tiene especial relevancia
in vivo, puesto que los monocitos son los principales precursores de las DC inflamatorias.
Teniendo en cuenta la toxicidad de la lovastatina sobre los monocitos cultivados in vitro, el incremento en la muerte celular de los monocitos por el tratamiento con lovastatina conllevaría una disminución en la población de moDC inflamatorias y, por lo tanto, afectaría al desarrollo de las respuestas inmunes frente a patógenos. Estas funciones incluyen, como se ha comentado anteriormente, la producción de factores solubles con actividad microbicida y la capacidad de activación de células T CD4+ antígeno-específicas, así como la cross-presentación a células T
CD8+, durante infecciones causadas por bacterias, virus o parásitos (Dominguez and Ardavin,
2010). Con respecto a la toxicidad in vivo de la lovastatina sobre los monocitos, los experimentos de infección con Listeria monocytogenes en animales tratados con lovastatina revelan que existe una disminución en el número de moDC en el bazo, aunque este punto se tendrá en cuenta más adelante al discutir el efecto de la lovastatina en un modelo de infección in vivo.
Los experimentos in vitro de las stat-moDC estimuladas con LPS, ligando de TLR4, indican que la presencia de lovastatina durante la diferenciación de las moDC afecta a la expresión de las moléculas de coestimulación inducida tras la activación con LPS, así como a la capacidad de estimulación de células T antígeno-específicas in vitro. Sin embargo, la activación
in vivo de células T antígeno-específicas por las stat-moDC es correcta. La deficiente expresión
de moléculas de coestimulación tras la activación con LPS de las moDC diferenciadas en presencia de lovastatina estaba en consonancia con una menor capacidad para estimular células T transgénicas OT-II in vitro. Las células T antígeno-específicas que habían sido estimuladas por las stat-moDC producían menores niveles de IL-2 e IFNg, presentaban una menor expresión de CD25 y un menor nivel de proliferación. Este resultado está de acuerdo con datos previos obtenidos en BMDC de ratón en un ensayo de MLR (Sun and Fernandes, 2003). Sin embargo, este defecto en la capacidad de estimulación de células T por las stat- moDC no se observaba cuando la activación de las células T ocurría in vivo. El análisis de la estimulación in vivo de células T antígeno-específicas se realizó en el ganglio poplíteo de ratones que habían recibido células T OT-II por vía intravenosa y stat-moDC, pulsadas con
la proteína OVA y estimuladas con LPS, por vía subcutánea. En estas condiciones, tanto la proliferación como la activación de las células T estimuladas con stat-moDC era similar a la de células T activadas con moDC control. La discrepancia en la capacidad de estimulación de células T antígeno-específicas por las stat-moDC entre los experimentos in vitro y los ensayos realizados in vivo, sugiere que el entorno inflamatorio inducido en la dermis tras la inyección subcutánea de las moDC contrarresta la defectuosa expresión de moléculas de coestimulación de las moDC diferenciadas en presencia de lovastatina, permitiendo su migración al ganglio linfático drenante y la correcta estimulación de las células T.
Por lo que respecta a la producción de citoquinas inducida por la estimulación con LPS de las stat-moDC, nuestros datos demuestran que el tratamiento con lovastatina durante la diferenciación de las moDC promueve un aumento en la producción de las citoquinas proinflamatorias IL-1b, IL-6 e IL-12, así como de IFNb. En este mismo sentido, se ha descrito en BMDC de ratón que el tratamiento con lovastatina aumenta la producción de IL-12, IL-6 y TNFa en respuesta a LPS (Sun and Fernandes, 2003), y en macrófagos peritoneales de ratón estimulados con LPS que la simvastatina promueve una mayor síntesis de IL-12 p40 (Matsumoto et al., 2004). Además, se ha demostrado que el tratamiento con simvastatina en moDC humanas previamente a la activación con LPS induce una mayor producción de IL-6, IL-8, IL-12 y TNFa (Yilmaz et al., 2006).
Los experimentos de estimulación in vitro de las stat-moDC con LPS ponen de manifiesto además que la síntesis de óxido nítrico (NO) a través de TLR4 está afectada por la presencia de lovastatina durante la diferenciación de las moDC. Dicha inhibición de la producción de NO dentro de la célula tras la activación de las stat-moDC con LPS estaba asociada a su vez con un defecto en la inducción de la enzima hemo-oxigenasa 1 (HO-1). Esta menor expresión de HO-1 estaba correlacionada con una menor capacidad de protección de las células frente al estrés oxidativo generado por el LPS, que se manifestaba en un incremento en los niveles de ROS. Dicho resultado concuerda con el papel citoprotector de la HO-1, es decir, su capacidad para generar moléculas que ayudan a proteger la célula en situaciones de estrés oxidativo o patologías (Otterbein et al., 2003). Por lo tanto, la inhibición en la síntesis de HO-1 por la presencia de lovastatina durante la diferenciación de las moDC podría conducir a un defecto en la citoprotección frente a los radicales libres, que comprometería la viabilidad de las células en situaciones de infección o inflamación.