SÍNTOMAS Y SIGNOS

Bakterienstämme:

Name Genotyp Herkunft

BL21(DE3) Gold E. coli B F-_{, ompT, hsdS}

B(rB-mB-), dcm+, Tetr, galλ(DE3) endA,

Hte Stratagene

DH5α F-_{, endoA1, hsdR17(r}

K-, rK+), supE44, thi-1, recA1, gyrA96,

relA1, ∆ (argF-laczya) U169, Φ80dlacZ∆M15 Gibco BRL C41 BL21(DE3) mit mindestens einer unbekannten Mutation Avidis C43 C41 mit mindestens einer weiteren unbekannten Mutation Avidis BL21/RIPL E. coli B F-_{, ompT, hsdS}

B(rB-mB-), dcm+, Tetr, galλ(DE3) endA,

Hte [argU ileY leuW Camr_{][argU; ileY; LeuW; Strep}R_/SpecR _] Stratagene

Rosetta (DE3) E. coli B F-_{, ompT, hsdS}

B(rB-mB-), gal, dcmlacY1(DE3) pRARE6

CamR_, Novagene

BL21/RIL E. coli B F-_{, ompT, hsdS}

B(rB-mB-), dcm+, Tetr, galλ(DE3) endA,

Hte [argU ileY leuW Camr_] Stratagene

Plasmide

Die innerhalb dieser Arbeit produzierten Plasmide sind mittels ortgerichteter Mutagenese kloniert worden.

Name Herkunft

pET 23d-Bax ∆ TM Labor Dr. Antonsson

pET 23d-Bax Labor Dr. Antonsson

pTyB1-Bax Labor Dr Tjandra (1)

pTYB1-Bax C62A Diese Arbeit

pTYB1-Bax C126A Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; A24C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; S118C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; V110C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; I150C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A;C126A;T135C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; I175C Diese Arbeit

pTYB1-Bax C62A; C126A; A178C Diese Arbeit

pTYB1-Bax P13L Diese Arbeit

pTYB1-Bax S184A Diese Arbeit

pTYB1-Bax S184K Diese Arbeit

pTYB1-Bax Q171R Diese Arbeit

pTYB1-Bax Q171R; Y164F Diese Arbeit

pTYB1-Bax Q171R; Y164F; Y115F Diese Arbeit

pTYB1-Bax Y115F Diese Arbeit

Tabelle 11: Plasmid

Oligonukleotide

Oligonukleotide für Ortsspezifische Mutagenese wurden mit etwa 10-15 Basen vor und nach dem mutierten Codon konstruiert. Die Schmelztemperatur wurde vom Programm „Oligonucleotide Properties Calculator“ (http://www.basic.northwestern. edu/biotools/ oligocalc.html) auf 60-65°C kalkuliert. Die Primer wurden über Metabion bezogen und die Lagerung erfolgte bei -20°C.

Name Sequenz

Bcl-xL VL + GCG CGC ATA TGT CTC AGA GCA ACC GGG AGC TGG

Bcl-X l- GCG CTC TTC GGC GGG CTT TCC GAC TGA AGA GTG AGC CCA GC Bax P13V + GGG GAG CAG CCC AGA GGC GGG GGG GTC ACC AGC TCT GAG CAG ATC Bax P13V - GAT CTG CTC AGA GCT GGT GAC CCC CCC GCC TCT GGG CTG CTC CCC Bax S184A + GCG GGA GTG CTC ACC GCC GCG CTC ACC ATC TGG AAG AAG Bax S184A - CTT CTT CCA GAT GGT GAG CGC GGC GGT GAG CAC TCC CGC Bax S184K + GTG GCG GGA GTG CTC ACC GCC AAG CTC ACC ATC TGG AAG AAG Bax S184K - CTT CTT CCA GAT GGT GAG CTT GGC GGT GAG CAC TCC CGC CAC Bax Sequenz Base 1-36 ATG GAC GGG TCC GGG GAG CAG CCC AGA GGC GGG GG Bax Sequenz Ende TCA GCC CAT CTT CTT CCA GAT GGT GAG CGA GGC GGT GAG C Bax Base 320 + GGC CGG GTT GTC GCC CTT TTC TAC TTT GCC AGC

Bax Base 320 - GCT GGC AAA GTA GAA AAG GGC GAC AAC CCG GCC

Bax C62A + CTG AGC GAG GCT CTC AAG CGC ATC GGG

Name Sequenz

Bax C126A + CTC AAG GCC CTG GCC ACC AAG GTG CCG GAA

Bax C126A - TTC CGG CAC CTT GGT GGC CAG GGC CTT GAG Bax l161r + GGT TGG GAC GGC CGC CTC TCC TAC TTT

Bax l161r - AAA GTA GGA GAG GCG GCC GTC CCA ACC

Bax Q171R + ACG CCC ACG TGG CGG ACC GTG ACC AT

Bax Q171R - ATG GTC ACG GTC CGC CAC GTG GGC GT

Bax Y164f + GCC TCC TCT CCT TTT TTG GGA CGC CCA CGT

Bax Y164f - ACG TGG GCG TCC CAA AAA AGG AGA GGA GGC

Bax Y115f + CCG GGT TGT CGC CCT TTT CTT CTT TGC CAG CAA A Bax Y115f - TTT GCT GGC AAA GAA GAA AAG GGC GAC AAC CCG G Bax A24C + ATG AAG ACA GGG TGC CTT TTG CTT CAG GGT TT

Bax A24C - AAA CCC TGA AGC AAA AGG CAC CCT GTC TTC AT Bax S118C + TAC TTT GCC TGC AAA CTG GTG CTC AAG GCC Bax S118C - GGC CTT GAG CAC CAG TTT GCA GGC AAA GTA Bax T135C + CGG AAC TGA TCA GAT GCA TCA TGG GCT GGA Bax T135C - TCC AGC CCA TGA TGC ATC TGA TCA GTT CCG

Bax I175C+ AGA CCG TGA CCT GCT TTG TGG CGG GAG T

Bax I175C- ACT CCC GCC ACA AAG CAG GTC ACG GTC T

Bax A178C + CGT GAC CAT CTT TGT GTG CGG AGT GCT CAC C Bax A178C - GGT GAG CAC TCC GCA CAC AAA GAT GGT CAC G Bax V110C + AAC TTC AAC TGG GGC CGG TGT GTC GCC CTT TTC Bax V110C - GAA AAG GGC GAC ACA CCG GCC CCA GTT GAA GTT Bax l150C + TCC GGG AGC GGT GCT TGG GCT GGA TCC AA

Bax l150C - TTG GAT CCA GCC CAA GCA CCG CTC CCG GA

Tabelle 12: Oligonukleotide

Methoden