“LAS PARTES”
C. SISTEMAS INFORMÁTICOS RELACIONADOS CON EL PROCESO ELECTORAL 2014-2015
Institute for Medical Research and Occupational Health, Zagreb, Republic of Croatia
Because of the pollination services they provide, honey bees are considered one of the most important animal species. A world without bees means a world without fruit, vegetables, grains, seeds and nuts. In recent years, there has been an alarming decline in bee populations around the world, known as colony collapse disorder. Ionizing and electromagnetic radiation are frequently mentioned among the reasons for this extinction. This paper presents some urban legends and misconceptions regarding bees and radiation as well as radioecological and other similar topics, with special emphasis on the Republic of Croatia. The main source of such misinformation is the internet and tabloid journalism, although some misinformation could even be found in professional bee-keeping journals. As expected, the consequences of the Chernobyl nuclear accident are mentioned to have had a profoundly negative impact on bees and beekeeping, which is fortunately not entirely true. However, in scientific journals covering the field of radiation science and radioecology, honey and honey-bee products are recognized as excellent bio-indicators of environmental pollution.
26
STERILIZACIJA I STERILNOST
Ivana Tartaro Bujak1, Mirjana Šimić2, Branka Mihaljević1, Sandra Šuto2, Jasna Knežević2
1Institut Ruđer Bošković, Zagreb
2 Nastavni zavod za javno zdravstvo dr. Andrija Štampar, Zagreb
UVOD
Sterilizacije i sterilnosti su pojmovi čije se razlike u značenju često ne razaznaju i neadekvatno primjenjuju u praksi. To su dva različita postupka koja se provode sa različitom svrhom. Prema normi ISO13485: Medicinska oprema: Sustav upravljanja kvalitetom, sterilizacija je postupak kojim se odstranjuju ili uništavaju svi mikroorganizmi sa predmeta, instrumenata i materijala do te mjere da se na standardnim hranjivim medijima ne može dokazati njihova prisutnost [1]. Jedna od često korištenih metoda za sterilizaciju različitih materijala i proizvoda poput medicinske opreme i pribora za jednokratnu upotrebu, farmaceutskih sirovina, gotovih proizvoda i ambalaže je γ–zračenje [2,3]. To je efikasna, brza i sigurna nekontaktna fizikalna metoda za inaktivaciju i eliminaciju svih bioloških onečišćenja odnosno mikroorganizama u svim njihovim životnim ciklusima. Kontrola odnosno validacija sterilizacije provodi se fizikalnim, kemijskim i biološkim postupcima kako bi se potvrdila uspješnost postupka. Jedan od najpouzdanijih, najprikladnijih i najjednostavnijih načina kojim se dokazuje učinkovitost sterilizacije odnosno načina kojim se dokazuje prisutnost mikrobnog onečišćenja ispitivanog materijala je biološka kontrola. Biološka kontrola sterilizacije provodi se uporabom bioloških indikatora koji sadrže posebno pripremljene mikrobiološke spore vrlo visoke otpornosti. Primjenom bioloških indikatora prati se i ocjenjuje proces sterilizacije na temelju određivanja preživljavanja mikroorganizama nakon sterilizacije [4]. Samo se tim postupkom može dokazati je li neki predmet, instrument ili materijal koji je bio podvrgnut sterilizaciji uistinu sterilan ili ne. Postupak ispitivanja sterilnosti provodi se u strogo aseptičnim uvjetima na podlogama s hranjivim medijem koji omogućuje rast mikroorganizmima. Ispitivani materijal je sterilan ako nakon sterilizacije nema rasta na podlozi. Mikrobiološke podloge koriste se u mikrobiološkoj dijagnostici, istraživanjima, kontroli voda i živežnih namirnica, a sa razvojem biotehnologije sve više nalaze primjenu u različitim proizvodnim procesima.
Podloge se najčešće koriste u sljedećim postupcima [5,6] :
Uzgoj i održavanje mikrobioloških kultura;
Izolacija i identifikacija mikroorganizama;
Ispitivanje biokemijskih i fizioloških osobina mikroorganizama;
Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antimikrobne agense;
Testovi sterilnosti materijala ili proizvoda, opreme i prostora
U ovom radu istražen je učinak γ-zračenja na čvrstim hranjivim podlogama te fizikalno kemijske osobine i mikrobiološke karakteristike standardnih mikrobioloških medija nakon γ- zračenja uz korištenje komercijalnog biološkog indikatora za postupak utvrđivanja sterilnosti, spore Bacillus pumilus kroz tri ciklusa zračenja [7]. U svakom ciklusu ozračivanja se svi postupci pripreme, dozimetrije, zračenja, obrade podloga i mjerenja nakon zračenja provode jednakim načinom.
MATERIJALI I METODE
Mikrobiološke podloge “ready to use“ pripravljene su iz komercijalnih dehidriranih podloga u Nastavnom zavodu za javno zdravstvo dr. A. Štampar prema HRN EN ISO 11133. Nakon otapanja, podloge se steriliziraju vrućom vodenom parom pri 121 °C kroz 15 minuta.
27
Punjenje mikrobioloških podloga u sterilne polistirenske Petrijeve zdjelice izvedeno je pomoću aparata za punjenje u klasi zraka A. Mikrobiološke podloge (proizvodi) podvrgnuti su strogoj provjeri kakvoće prema HRN EN ISO 11133.
U ovom istraživanju korištene su 2 vrste mikrobioloških podloga, Tryptone soja agar (TSA) i Sabouraud dekstroze agar (SDA) koje su zapakirane u trostruku termoskupljajuću foliju i umetnute u kartonsku kutiju (20 × 20 × 10 cm). Po kutiji/mikrobiološkim podlogama raspoređeno je 7 bioloških indikatora MESA STRIP kat. br. SGMR/6 Bacillus pumilus, lot BPUM-289. Kutija s mikrobiološkim podlogama zračena je dozom od 12,5 kGy i uz brzinu doze 0,36 Gy/s. Tri ciklusa ozračivanja provedena su na panoramskom izvoru 60Co na
Institutu Ruđer Bošković. Dozimetrija je uspostavljena etanol-klorobenzenskim dozimetrijskim sustavom (ISO / ASTM 51538: 2017). Nakon zračenja biološki indikatori su inkubirani u hranjivom bujonu 7 dana na 35 °C te su očitani rezultati testiranja.
REZULTATI
Rezultati biološke kontrole sterilizacije u sva tri ciklusa zračenja su pokazala da nema porasta Bacillus pumilus (Tablica 1).
Tablica 1. Rezultati biološke kontrole sterilizacije nakon zračenja dozom od 12,5 kGy uz
brzinu doze 0,36 Gy/s. 12,5 kGy (1. ciklus) 12,5 kGy (2. ciklus) 12,5 kGy (3. ciklus) Biološki indik/ Uzorci Rezultat Biološki indik/ Uzorci Rezultat Biološki indik/ Uzorci Rezultat 1-7 Nema porasta Bacillus pumilus 1-7 Nema porasta Bacillus pumilus 1-7 Nema porasta Bacillus pumilus Pozitivna kontrola Porast Bacillus pumilus Pozitivna kontrola Porast Bacillus pumilus Pozitivna kontrola Porast Bacillus pumilus
Nakon zračenja od 12,5 kGy TSA i SDA ispitani su fizikalno-kemijski parametri (pH, boja, homogenost i konzistencija) (Tablica 2) i mikrobiološke karakteristike - produktivnost, prema HRN EN ISO 11133 (Slika 1 i 2). Produktivnost se kvantitativno određuje kao omjer između broja poraslih kolonija na ispitnoj podlozi i broja poraslih kolonija na referentnoj podlozi te se radi u duplikatu. Produktivnost ispitivane podloge mora biti iznad zadane granice. Faktor produktivnosti (PR), računa se po formuli:
PR = Ns / NO,
gdje je:
NS ukupan broj poraslih kolonija na ispitnoj podlozi
NO ukupan broj poraslih kolonija na referentnoj podlozi
Kod TSA korištena su četiri kontrolna soja mikroorganizama i to Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis subs. spizizenii ATCC 6633 i Listeria monocytogenes 4b ATCC 13932. Kod SDA korištena su dva kontrolna soja mikroorganizama i to Aspergillus brasiliensis ATCC16404 i Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.
Vizualnim pregledom mikrobioloških podloga utvrđeno je da niti u jednom slučaju nije došlo do promjene boje nakon zračenja.
28
Tablica 2. Ispitivanje fizikalno-kemijskih parametara i mikrobioloških karakteristika prije i
nakon zračenja dozom od 12,5 kGy uz brzinu doze 0,36 Gy/s.
12,5 kGy (1. ciklus)
Rezultati ispitivanja serije prije gamma
zračenja - Nulto vrijeme- Rezultati NAKON gamma zračenja od 12,5 kGy TSA - TRIPTON SOJA AGAR lot 220318 (pH 7,4±0,2) pH =7,45
PR = 1,2; 1,2 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 0,8; 0,8( Staphylococcus aureus ATCC
25923)
PR= 1,1; 1,1 (Bacillus suptilis subs
spizizenii ATCC 6633)
PR=0,9; 0,9 ( Listeria monocytogenes 4b
ATCC 13932)
pH =7,3
PR = 1,0; 1,0 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 1,1; 1,1 ( Staphylococcus aureus
ATCC 25923)
PR= 0,8; 0,8 (Bacillus suptilis subs
spizizenii ATCC 6633) PR=0,8; 0,8 ( Listeria monocytogenes 4b ATCC 13932) Sabouraud Dextrose agar lot 240518 (pH 5,6±0,2) pH =5,8 PR= 0,9; 0,9 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 1,0; 1,0 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763) pH =5,4 PR= 1,1; 1,1 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 1,0; 1,0 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763) 12,5 kGy (2. ciklus)
Rezultati ispitivanja serije prije gamma
zračenja - Nulto vrijeme- Rezultati NAKON gamma zračenja od 12,5 kGy TSA - TRIPTON SOJA AGAR lot 170518 (pH 7,4±0,2) pH =7,21
PR = 0,9; 0,9 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 1,1; 1,1( Staphylococcus aureus ATCC
25923)
PR= 1,0;1,0 (Bacillus suptilis subs
spizizenii ATCC 6633)
PR=0,9;0,9 ( Listeria monocytogenes 4b
ATCC 13932)
pH =7,1
PR = 1,0; 1,0 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 1,1; 1,1( Staphylococcus aureus ATCC
25923)
PR=1,1; 1,1(Bacillus suptilis subs spizizenii
ATCC 6633) PR= 1,0;1,0 ( Listeria monocytogenes 4b ATCC 13932) Sabouraud Dextrose agar lot 050718 (pH 5,6±0,2) pH =5,7 PR= 0,7; 0,7 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 1,2; 1,2 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763) pH =5,4 PR=1,1; 1,1 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 0,8; 0,8 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763) 12,5 kGy– (3. ciklus)
Rezultati ispitivanja serije prije gamma
zračenja - Nulto vrijeme- Rezultati NAKON gamma zračenja od 12,5 kGy TSA - TRIPTON SOJA AGAR lot 220318 (pH 7,4±0,2) pH =7,5
PR = 0,9; 0,9 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 1,1; 1,1( Staphylococcus aureus ATCC
25923)
PR= 1,0; 1,0 (Bacillus suptilis subs
spizizenii ATCC 6633)
PR=0,9; 0,9 ( Listeria monocytogenes 4b
ATCC 13932)
pH =7,3
PR = 1,0; 1,0 ( Escherichia coli ATCC
8739)
PR= 1,0; 1,0 ( Staphylococcus aureus
ATCC 25923)
PR= 1,2; 1,2 (Bacillus suptilis subs
spizizenii ATCC 6633) PR=0,9; 0,9 ( Listeria monocytogenes 4b ATCC 13932) Sabouraud Dextrose agar lot 240518 (pH 5,6±0,2) pH =5,7 PR= 0,7; 0,7 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 1,2; 1,2 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763) pH =5,4 PR= 1,0; 1,0 (Aspergillus brasiliensis ATCC 16404) PR= 0,8; 0,8 (Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763)
29
Slika 1: Produktivnost TSA prije i nakon γ–zračenja.
Kontrolni sojevi: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 25923,
30
Slika 2. Produktivnost SDA prije i nakon γ-zračenja. Kontrolni sojevi: Aspergillus brasiliensis
ATCC 16404 i Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763. ZAKLJUČAK
Rezultati ispitivanja fizikalno-kemijskih parametara i mikrobioloških karakteristika kod Tripton soja agara i Sabouraud Dextrose agar (pH, boja, homogenost i konzistencija) nakon tri ciklusa zračenja u jednakim uvjetima i kod doze zračenja od 12,5 kGy zadovoljavaju zahtjevu za sterilnost prema normi ISO 11137, te zadovoljavaju zahtjevima u pogledu ispitivanja fizikalno-kemijskih parametara i mikrobioloških karakteristika prema HRN EN ISI 11133.
Vrijednosti produktivnosti (PR ) SDA odnosno TSA prije i nakon zračenja podloga nalaze se unutar dvije standardne devijacije.
Rezultati provedenih ispitivanja na TSA i SDA su pokazali da je primjena γ–zračenja za dobivanje sterilnih Petrijevih zdjellica koje su trostruko pakirane u termoskupljajuću foliju, kao gotovog proizvoda učinkovita metoda budući su zahtjevi za sterilnost, fizikalno-kemijske parametre i mikrobiološke karakteristike-produktivnosti, sukladno smjernicama EU i odgovarajućim europskim normama, u potpunosti zadovoljeni. Gama zračenje nije narušilo fizikalno-kemijska svojstva kao ni mikrobiološke karakteristike u ispitivanom hranjivom mediju. Biološki indikatori koji su pritom bili upotrijebljeni dokazuju da su vegetativni oblici spora uništeni u procesu sterilizacije do nivoa zahtjevanog za postizanje stanja sterilnosti.
31
Gama ozračene Petrijeve zdjelice TSA i SDA trostruko omotane, mogu se koristiti za praćenje okoliša u farmaceutskoj proizvodnji, čistim prostorima, kao ploče za taloženje ili kao potrošni materijal za uzimanje uzoraka zraka.
REFERENCE
[1] https://www.iso.org/standard/59752.html; Bojić-Turčić V. Sterilizacija i dezinfekcija u
medicini, Zagreb, Medicinska naklada, 1994.
[2] Ražem D, Katušin-Ražem B, Starčević M, Galeković B. Radiation decontamination of pharmaceutical raw materials as an integral part of the good pharmaceutical manufacturing practice (GPMP). Rad Phys Chem 1990;35:377-381.
[3] Katušin-Ražem B, Novak B, Ražem D. Microbiological decontamination of botanical
raw materials and corresponding pharmaceutical products by irradiation. Rad Phys
Chem 2001;62: 261-275.
[4] Khattri S, Bhardwaj M, Shrivastava S. Sterilization monitoring by biological indicators and conventional swab test of different sterilization processes used in orthodontics: A comparative study.J. Ind Orthodontic Soc 2015;49:67-70.
[5] Hala N. El-Hifnawi. Radiation Sterilization of Two Commonly Culture Media Used for Bacterial Growth: National Centre for Radiation Research and Technology P.O. Box29, Nasr City, Cairo, Egypt
[6] Bogokowsky B, Eisenberg E, Altmann G. Sterilization of MacConkey agar and CLED medium by γ-radiation. Int J Appl Radiat Isotop 1983;34: 1441-1443.
[7] HRN EN ISO 11133: Priprema, proizvodnja, skladištenje i ispitivanje hranjive podloge.