B. MARCO TEÓRICO INICIAL
5. MICROORGANISMOS USADOS EN LA INVESTIGACIÓN
5.1. Staphylococcus aureus
Los estafilococos son células circulares grampositivas que normalmente se organizan en racimos desiguales en forma de uva.
Se desarrollan rápidamente en muchos tipos de medios y tienen actividad metabólica, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían desde un color blanco hasta un amarillo intenso. Otros forman parte de la microflora típica de la piel y las mucosas del organismo de la persona, algunos causan formación de abscesos y diferentes enfermedades infecciosas hasta una infección generalizada mortal.
El Staphylococcus es el género que posee alrededor de 40 especies. Dentro de las cuales hay tres especies que son de mayor importancia clínica para la salud siendo estos Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus, el último mencionado tiene la característica de ser coagulasa-positivo, lo que lo diferencia de otras especies. Para el ser humano el S. aureus es un microorganismo patógeno importante. (31)
5.1.1. Morfología y Estructura
Los medios de cultivos en crecimiento presentan células de S. aureus grampositivas, de medida regular y se agrupan en racimos con la exactitud de unas esferas. La pared celular del S. aureus está formado por peptidoglucano gram positivo, con ácido teicoico entrecruzado, envuelto con polisacáridos y
proteínas, es posible que la proteína A favorezca en la virulencia del S. aureus como factor patogénico (32).
El S. aureus tiene una variedad impredecible de células y antígenos extracelulares; asimismo, algunas cepas pueden adquirir cualidades que les permitan crear ciertos venenos (leucocidina de Panton Valentin - LPV-) y químicos (enterotoxinas, penicilinasas), que le dan una patogenicidad más prominente (33).
5.1.2. Serotipos capsulares de S. aureus
La capa periférica de la pared celular de células estafilocócicas se puede cubrir con una capsula de polisacárido.
o 11 serotipos capsulares de S. aureus se han podido distinguir.
o Los serotipos 1 y 2 están relacionados con cápsulas muy gruesas y colonias con apariencia mucoide, pero rara vez causan enfermedades en los individuos.
o Por otro lado, los serotipos 5 y 7 están a cargo de la mayor parte de enfermedades infecciosas en el ser humano.
La cápsula asegura al microbio al reprimir su fagocitosis mediante los leucocitos polimorfonucleares (PMN). La gran parte de los estafilococos generan una biopelicula hidrosoluble (capa de polisacárido extracelular) compuesta monosacáridos, proteínas y pequeños péptidos en una cantidad dependiente de los factores genéticos y de las condiciones de desarrollo. Esta sustancia extracelular une microorganismos a tejidos y cuerpos extraños, como catéteres, injertos, prótesis valvulares y articulares y derivaciones. Esta propiedad es especialmente significativa para la supervivencia de los estafilococos coagulasas-negativos, los cuales son relativamente avirulentos. (24)
Los anticuerpos que van en contra los CPs poseen la capacidad de actuar como protectores, ya que pueden desarrollar la opsonización de cepas capsuladas de S. aureus y ayudar en la fagocitosis por PMN (34).
Se cuenta con estudios antiguos que indican que las capsulas no contribuyen en la virulencia del S. aureus, pero actualmente se sabe que las capsulas de S. aureus si contribuyen en la virulencia estafilocócica, teniendo en cuenta que hay un número importante de cepas de S.aureus resistentes a oxacilina, penicilina, tienen un polisacárido capsular de serotipo S.
5.1.3. Características para su identificación
Luego de realizar 12h de incubación en el medio de cultivo agar sangre, el S. aureus se forma colonias blanquecinas que con el pasar del tiempo pueden luego tener una coloración dorado-crema, una gran parte de la cepas bacterianas pueden presentar un aro betahemolítico transparente el cual bordea la colonia.
Una de las pruebas de mayor importancia es la producción de coagulasa por parte del S. aureus, característica que la diferencia de las otras especias de estafilococos. Esto se llega a comprobar realizando la incubación de la cepa bacteriana en plasma, pudiéndose observar un coágulo de fibrina en un tiempo determinado (32).
a. Catalasa
Es una prueba empleada para observar y demostrar la capacidad que la bacteria o microorganismo tiene para formar la enzima catalasa, facilitando transformación del H2O2 en agua y oxígeno, lo cual es necesario para detener la producción de radicales virulentos (tóxicos) por el proceso de
mieloperoxidasa en las células fagocíticas. Esta prueba resulta positiva cuando se observa la formación de burbujas (35).
b. Coagulasa
Esta prueba nos permite identificar y distinguir las especies que se encuentran dentro del género de Staphylococcus, también no permite determinar la presencia o ausencia del Staphylococcus aureus, ya que esta se diferencia del resto por su capacidad de coagular la mencionada enzima (38). Esta prueba tiene gran sensibilidad y precisión para el S. aureus, la coagulasa se junta al fibrinógeno y lo transforma en fibrina no soluble, generando esto la producción de depósitos, donde pueden incorporarse los estafilococos
De dos formas se puede realizar esta prueba; el primero es empleando un tubo en donde inoculamos la colonia en estudio con 0.5ml de plasma diluida de conejo, el otro modo es empleando un portaobjeto, en donde la disolución es primeramente tratado con EDTA y plasma de conejo (36).
c. Análisis microbiológico
La identificación de S. aureus se lleva acabo empleando medios de cultivos selectivos y algunas pruebas bioquímicas que ayuden en su estudio y fácil identificación; lo cual se da debido a las toxinas y enzimas que genera el esta cepa bacteriana. Mediante esas particularidades propias de la cepa bacteriana es que se han establecido medios para poder aislar e identificar a esta bacteria, los medios de cultivos específicos o selectivos son el agar manitol salado, estafilococos n° 110, DNAsa y Baird-Parker (35).
5.1.4. Enfermedades
Staphylococcus aureus es un microorganismo patógeno que continuamente causa sepsis leves localizadas en la piel y en el tejido subcutáneo, además de producir intoxicaciones por el consumo del algunos alimentos por el ser humano. (18)
Staphylococcus aureus es un microorganismo que se encuentra de manera natural y común en la piel y membranas mucosas de personas sanas, por lo tanto en tal situación no es un problema. La situación en la cual este microorganismo se convierte en una amenaza peligrosa es desde que esta ingresa al organismo de la persona, ya sea a través de heridas, material médico, procedimientos quirúrgicos y es posee resistencia a los antibacterianos como a la meticilina. La bacteria es altamente patógena causante desde infecciones superficiales de la epidermis, hasta enfermedades infecciosas en los tejidos blandos como neumonía, endocarditis y osteomielitis (19). Las toxinas que produce el S. aureus son también las causantes de una necrosis epidérmica tóxica (síndrome de la piel escaldada) y el síndrome del shock tóxico (20).
5.1.5. Tratamiento
La bacteriemia, la endocarditis, la neumonía y diferentes enfermedades infecciosas graves causadas por S. aureus, necesitan de una terapia intravenosa larga con una penicilina segura a las betalactamas. Para los estafilococos resistentes a la nafcilina, se usa la vancomicina o cefalosporinas, la resistencia a la nafcilina no depende la generación de betalactamasas y su presentación clínica cambia de acuerdo a las ciudades y países, las cepas que poseen resistencia a la penicilina G, son aquellas producen penicilinasa (31).