TOPOLOGIA DE LA LISIS.

Hemos observado que la lisis, topológicamente, tiene lugar precisamente por la estructura apical anómala de gemación (figura 18 del capítulo de resultados), hecho que podríamos explicar considerando que la maquinaria de la célula haploide no está preparada para acometer una gemación polar. La célula haploide, al verse obligada a modificar su patrón característico de polaridad, podría presentar dificultades importantes para generar una pared celular normal, dando lugar a una pared debilitada que provocaría la lisis celular. El sorbitol, al ser capaz de estabilizar ligeramente la pared de la levadura, permitiría que las incipientes yemas apicales se desarrollen un poco más antes de sufrir el proceso lítico y determinaría la aparición del fenotipo de células encadenadas, de forma análoga a lo manifestado por una cepa diploide con ambos alelos del gen CDCIS mutados. Sin embargo, las estructuras celulares encadenadas de gran tamaño que muestran tanto las cepas diplodes como las haploides en presencia de sorbitol, a temperatura restrictiva, pronto serían inestables y lisarían. Recientemente se ha implicado en la lisis celular a defectos en el proceso de septación y citoquinesis (Epp y Chant, 1997). De modo análogo se podría explicar la lisis que ocurre en los mutantes cdc 15, ya que, como se discute en el siguiente apartado, éstos no son capaces de llevar a cabo el proceso de

104 DiscíISIÓN También es significativo el hecho de que la gemación apical aberrante de las células haploides tiene lugar, de modo general, en la célula hija, mientras que la célula madre pierde la capacidad para abordar un nuevo proceso de gemación. En las cepas diploides, en este aspecto, observamos un anómalo adelantamiento de la gemación de la célula hija respecto de la célula madre, fenómeno que discutiremos en los apartados siguientes. No hay que olvidar que en las cepas silvestres la gemación de la célula hija sufre un retraso respecto a la nueva gemación de la célula madre, debido a que ha de alcanzar un tamaño mínimo crítico, previamente a abordar la gemación (Roemer y col., 1996). Una explicación al hecho de que en la cepas haploides la célula madre pierde la capacidad de gemar, podemos encontrarla si consideramos que el fenómeno lítico sobreviene previamente al inicio del proceso de gemación de la célula madre.

En cualquier caso, resulta evidente la existencia de un retraso anómalo en la gemación de la célula madre respecto de la célula hija en las cepas diploides, efecto que se agudiza en cepas haploides, hasta el extremo de no llegar a producirse la gemación de la célula madre.

2.4. IMPLICACIÓN DECdclSp EN EL PROCESO DESEPTACTÓN.

Otro aspecto importante del fenotipo de los mutantes en el gen CDCJS, radica en su incapacidad para iniciar y, por tanto, llevar a cabo el proceso de septación, como indican los resultados de microscopia de transmisión (figura 22 del capitulo de resultados). Este hecho es el determinante de la aparición de cadenas de células sin septar en cepas diploides, efecto que también se manifiesta en cepas tanto haploides como diploides, cuando se encuentran en presencia de sorbitol 1 M.

El defecto en la septación parece lógico dado que la actina no se polariza hacia la zona del septo para determinar su formación (Lew y Reed, 1993). Estos autores han descrito que, para que la actina se polarice en la zona del septo, es necesana la inactivación del complejo Cdc28p-Clb2p, pero los mutantes cdclS detienen su ciclo celular con elevada actividad quinasa Cdc28p-Clb2p (Surana y col., 1993).

Recientemente se ha descrito la proteína íqgl/Cyklp (Epp y Chant, 1997; Lippincott y Li, 1998). Estos últimos autores localizan a esta proteína en la zona del septo y la describen como esencial en el ensamblaje de un anillo de miosina imprescindible para que se lleve a cabo el proceso de septación. Lippincott y Li (1998), determinan, a su vez, la dependencia de todo el proceso anteriormente descrito a la presencia de la proteína CdclSp activa. Estos datos reafirman la implicación del producto del gen CDCIS en la septación de 5. cerevisiae.

Otro dato que refUerza el papel del gen CDCJS en el proceso de septación, la encontramos en la fUnción de cdct, su homólogo en la levadura de fisión £ painhe. Los mutantes de £ pombe en el gen cdc?”, son incapaces de realizar el proceso de septación (Fankhauser y Simanis, 1994). No obstante, existe un rasgo diferenciador entre ambos homólogos y es que la sobreexpresión del gen cdc?” en 5. pambe determina la aparición de múltiples rondas de septación sin abordar la división nuclear (Fankhauser y Simanis, 1994), efecto no observado al sobreexpresar, ni el gen CDCIS completo de 5. cerevisiae (Philipssen, comunicación personal), ni el dominio quinasa (resultados no mostrados). Este efecto no parece extraño, ya que la regulación del ciclo celular y la coordinación con el ciclo

DISCUSIÓN 105 morfogenético en ambos organismos, especialmente al final de la mitosis, manifiesta diferencias sustanciales (MacNeil y Nurse, 1997).

Recientemente se ha descrito el gen spg1~ de 5. pombe, homologo fimcional del gen

IBM] de £ cerevisiae (Schmidt y col., 1997) como un gen esencial para la septación de la

levadura de fisión, este dato, y a la vista de la relación genética y fUncional que muestra con el gen CDCIS, refUerza el papel, que proponemos en este trabajo, del gen CDCJS en la septación de las células de 5. cerevisiae.

2.5. INFLUENCIA DE LA SEPTACIÓN EN LA ELECCIÓNDEL PATRÓN DE