Variables analíticas

Se efectúa una extracción basal con catéter 21G que se deja situado preferentemente en una vena de fosa cubital con tapón perforable para acceso venoso.

Para la SOG se utiliza un preparado comercial con 100 g de glucosa disueltos en 250 ml de agua. A partir del momento del comienzo de la ingesta se efectúan extracciones a los 30, 60, 120 y 180 minutos. En cada una de las extracciones se efectúan las siguientes determinaciones:

 Extracción basal: glucosa, colesterol, triglicéridos, colesterol HDL, proteínas totales, calcio, creatinina, AST, ALT, GGT, bilirrubina total, insulina, cortisol, GH, TSH hemograma, HbA1c, GLP-1 y GIP.

 Tiempos 30 min y 60 min: Glucosa, insulina, GLP-1 y GIP.  Tiempos 120 min y 180 min: Glucosa.

Para las determinaciones de glucosa, colesterol, triglicéridos, colesterol HDL, proteínas totales, calcio, creatinina, AST, ALT, GGT, bilirrubina, insulina, Cortisol, GH y TSH se utiliza una muestra de suero obtenida en tubos de 3,5 mL con activador de la coagulación y gelosa como separador (Beckton Dickinson SST II).

Tanto las muestras basales como los tiempos se dejan coagular manteniéndolos en reposo en posición vertical 30 minutos y posteriormente se centrifugaron a 3500 rpm durante 10 minutos. El tiempo entre la extracción y la centrifugación debe ser siempre superior a 15 minutos e inferior a 1 hora.

Para las determinaciones de Hemograma y HbA1c se utiliza un tubo de 3 mL con EDTA K2 (Beckton Dickinson). El hemograma se determina en menos de 4 horas desde la extracción, las muestras para la determinación

73 de HbA1c se mantuvieron refrigeradas y se determinaron entre las 24-48 horas posteriores a la extracción.

Para la correcta extracción y conservación de GLP-1 y GIP es necesario utilizar un tubo con inhibidores de la DPP-4, para evitar la inactivación de las moléculas. Se preparó una disolución de Vildagliptina que se añadió a tubos de EDTA-Aprotinina (Beckton Dickinson). Se disolvió un comprimido de Vildagliptina (Galvus 50 mg, Novartis) en 50 mL de agua bidestilada y posteriormente se filtró dicha solución con un filtro de 0,2 mm de diámetro. Se inocularon 0.1 mL de disolución con aguja de insulina a cada tubo evitando la pérdida de vacío. Una vez extraídas las muestras fueron inmediatamente centrifugadas a 3500 rpm durante 12 minutos y almacenadas a -80ºC hasta su procesamiento.

Se llevó a cabo un estudio previo en el cual se comparó el tubo comercial P700 (Beckton-Dickinson) frente al tubo de EDTA-Aprotinina con Vildagliptina (169). Las determinaciones de GLP1y GIP fueron equivalentes entre ambos tubos.

La determinación de glucosa, colesterol, triglicéridos, colesterol HDL, proteínas totales, calcio, creatinina, AST, ALT, GGT y bilirrubina, se efectuó en el autoanalizador AU 5600 (Beckman Coulter) mediante espectrofotometría de absorción molecular, utilizando reactivos del proveedor.

El cortisol y GH se determinaron mediante inmunoensayo quimioluminiscente en el autoanalizador Immulite 2000 (Siemens Healthcare), la insulina mediante inmunoensayo quimioluminiscente en el autoanalizador Liaison (Palex). La determinación de TSH fue realizada en el autoanalizador E170 de Roche Diagnostics

Para la determinación de GLP-1 y GIP las muestras fueron descongeladas a temperatura ambiente y agitadas de nuevo antes de su análisis en el autoanalizador Luminex ™ 2000. Se determinaron mediante paneles multianalito MILLIPLEX ® basados en partículas magnéticas MAP, mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA).

74 Para el estudio de sensibilidad y resistencia a la insulina se calcularon índices basales y derivados de la SOG (Tabla 3).

El índice de resistencia HOMA-IR se calcula acorde a la fórmula de Matthews et al (25), con glucemia en mmol/l y insulinemia en µUI/mL.

El índice de sensibilidad QUICKI se calcula según la fórmula de Katz et al (26), con unidades de glucosa en mg por dL e insulina en µUI por mL.

El área bajo la curva (AUC) de glucosa, insulina, GLP-1 y GIP se calcula con el método trapezoidal. En el caso de la glucosa entre los tiempos 0 y 180 min y en la insulina, GLP-1 y GIP entre los tiempos 0 y 60 min.

El Tp (tiempo hasta el pico) se calcula como el tiempo promedio en alcanzar el pico máximo de glucosa, insulina, GLP-1 y GIP.

La glucemia, insulina, GLP-1 y GIP pico se define como la concentración máxima de la variable.

El incremento 0-30 min (∆ 0-30 min) de glucosa, insulina,

GLP-1 y GIP se calcula como el tanto por ciento de incremento en el intervalo de tiempo.

El GT peak se calcula con la glucemia máxima en mg/dL (36)

El índice de secreción IGI se calcula con concentraciones de insulina expresada en µUI/mL y glucosa en mmol/L (31).

Para el cálculo del índice de sensibilidad muscular de insulina (MISI), se emplea la insulina promedio de los tiempos basal ,30 y 60 min en µUI/mL. El ∆G es el descenso de glucemia desde el pico máximo hasta el nadir en el intervalo de tiempo (∆t) expresado en minutos (35).

El índice de resistencia hepática HIRI se calcula con las AUC de glucosa e insulina entre los tiempos 0-30 min y expresadas en mg/dL y µUI/mL respectivamente (35).

El índice de sensibilidad ISI (27) se calcula con glucemia en mg/dl e insulinemia en µUI/mL.

El índice de disposición DI-ISI se calcula como el producto del índice de secreción IGI y el índice de sensibilidad ISI (34).

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Tabla 3. Índices basales y derivados de la SOG.

Índice Fórmula

HOMA-IR (GB*IB)/22.5

QUICKI 1/ log(IB)+ log(GB)

GTpeak(mg/dL) 106_/G2_(G-70)

IGI (∆I30-0/∆G30-0)

MISI (1/I)*(∆G/∆t)

HIRI ∆UCGluc30-0*∆UCIns30-0

ISI 104_/(GB*IB*G*I)1/2

DI –ISI IGI*ISI

GB: glucosa basal; IB: insulina basal; G: promedio de glucosa de los tiempos 0,30,60,120 y 180

min; I: promedio de insulina de los tiempos 0,30 y 60 min; ∆UCGluc 30-0: área bajo la curva de

glucosa entre los tiempos basal y 30 min, calculada por el método trapezoidal; ∆UCIns30-0: área

bajo la curva de insulina entre los tiempos basal y 30 min, calculada por el método trapezoidal;

∆G30-0 : diferencia entre la glucemia 30 miny basal ; ∆I30-0 diferencia entre la insulinemia 30min

y basal.

De la historia clínica se recogieron datos analíticos de seguimiento del embarazo.

 Glucemia basal y 60 min del Test de O ‘Sullivan.  Glucemia media primer trimestre.

 Glucemia media durante toda la gestación.

 Determinaciones bioquímicas del Screening bioquímico de aneuploidías (PAPPA, beta HCG libre) expresados como múltiplos de la mediana ajustados por edad gestacional (MoM).

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