Las personas que formaron parte del estudio, acudieron al Servicio de Endocrinología, a las siete de la mañana, en condiciones de ayuno de 12 horas. A cada participante se le extrajeron 10 mL de sangre de la vena ante cubital, colocándose en dos tubos; un tubo contenía anticoagulante y el otro sin anticoagulante, para la posterior separación de suero y plasma, respectivamente. Para esto, las muestras de sangre se centrifugaron a 2500 r.p.m. por 20 minutos. En el plasma se determinaron los triglicéridos, el colesterol total y sus fracciones y el ácido úrico. El suero se conservó en dos porciones, una se utilizó para la medición inmediata de la insulina basal y la glicemia; y la otra, se congeló a –70°C para la posterior determinación de adiponectina por el método de micro placas de Elisa con el kit comercial de Thermo Scientific Pierce Endogen.
Las variables que se midieron se mencionan a continuación:
Perfil Lipídico: Colesterol Total, HDLc, Triglicéridos: Se utilizó el Método enzimático colorimétrico, kit comercial RANDOX, en un equipo Marca HITACHI 902 Automatic Analyzer. Las concentraciones se midieron a 600 nm.
LDLc: Una vez conocida la concentración de triglicéridos, colesterol total y colesterol HDL, se estimó la concentración de colesterol presente en las lipoproteínas de baja densidad o LDLc a partir de la fórmula propuesta por Friedewald y col. (1972):
Colesterol LDL (mg/dL) = Col Total – (Colesterol HDL + Triglicéridos/5)
Ácido Úrico: Se determinó por el Método enzimático colorimétrico de la casa comercial RANDOX, en un equipo Marca HITACHI 902 Automatic Analyzer. El ácido úrico se transforma en alantoína y peróxido de hidrógeno por acción de la uricasa. Cada uno está bajo la influencia catalítica de la peroxidasa que lo oxida a 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la 4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta, se mide a 546 nm.
Glucosa: Se determinó por el Método enzimático colorimétrico de la casa comercial RANDOX, en un equipo Marca HITACHI 902 Automatic Analyzer. La glucosa es determinada luego de su oxidación enzimática en presencia de la glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno producido reacciona con fenol 4-aminofenazona para formar un indicador rojo-violeta. La intensidad final del color es directamente proporcional a la concentración de glucosa y es medida a 505 nm.
Insulina en ayunas: Se midió por método de quimioluminiscencia ELISA de la casa comercial RANDOX, en un equipo Marca Elecsys 2010. El método para la determinación cuantitativa de la insulina es un ensayo inmunológico de tipo sandwich basado en el principio de la quimioluminiscencia. Un anticuerpo monoclonal de ratón específico dirigido contra la insulina recubre las partículas magnéticas (fase sólida) y otro anticuerpo monoclonal (específico para un epítopo diferente de la insulina) está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado anticuerpo-isoluminol). Durante la incubación, la insulina presente en los calibradores, en las muestras o en los controles enlaza el anticuerpo monoclonal en fase sólida, el anticuerpo conjugado reacciona en seguida con la insulina, ya enlazada en la fase sólida. Se forma un sandwich sólo en presencia de las moléculas de insulina que crean un puente entre los dos anticuerpos. Después de la incubación, se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado. A continuación, se añaden los reactivos iniciadores, que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz (RLU, relative light units) y es directamente proporcional a la concentración de insulina presente en los calibradores, en las muestras o en los controles (Diasorin).
Adiponectina: Se midió con Elisa Kit SPI Bio Bertin Group (Spibio) en un equipo Marca Elx 800 Universal Microplate Reader Biotek Instruments, INC. Este enzimo inmunoensayo (ELISA) se basa en la competencia entre la adiponectina libre y la adiponectina recubierta, en presencia de una cantidad conocida del anticuerpo marcado con adiponectina (HRP: trazador). La placa se lava para eliminar cualquier reactivo, y el peróxido de sustrato de hidrógeno/TMB (2 viales de sustrato) se añade a los envases. Los trazadores HRP sobre el sustrato de peróxido de hidrógeno/TMB forman un compuesto amarillo que absorbe a 450 nm.
La reacción se detiene mediante la adición de solución de ácido sulfúrico. La intensidad del color, que se determina por espectrofotometría, es proporcional a la cantidad de trazador y es inversamente proporcional a la cantidad de adiponectina humana libre presente durante la incubación inmunológica.
Resistencia a la insulina. Se realizará a través del cálculo del HOMA (Homeostasis Model Assessment), y se empleará la siguiente fórmula (Lares y col., 2002; Obregon y col., 2004; Contreras y col., 2008):
HOMA-IR = (Insulina basal (mU/ml) x glucosa basal (mg/dl)/ 405
3.2.1. Puntos de corte para evaluar riesgo cardiovascular Colesterol total: ≤ 200 mg/dL (ATP III, 2001)
Colesterol LDL: ≤ 130 mg/dL (ATP III, 2001)
Colesterol HDL: <50 mg/dL (mujeres) y <40 mg/dL (hombres) (ATP III, 2001) Colesterol VLDL: < 30 mg/dL (ATP III, 2001)
Colesterol No-HDL: < 130 mg/dL (ATP III, 2001) Triglicéridos: ≤ 150 mg/dL (ATP III, 2001) Ácido úrico: ≤ 6,5 mg/dL (McNamara, 1990)
Insulina en ayuno: insulina basal ≤12 µU/mL (Becerra y col., 2009) Glucosa en ayuno. Hiperglicemia: ≥ 100 mg/dL (Rubio, 2004). HOMA. Resistencia a la insulina: ≥ 2,5 (Becerra y col., 2009).
Adiponectina. Hipoadiponectinemia: ≤ 4 µg/mL (Domínguez, 2007; Barrios y col. 2008). Adicionalmente, se evaluarán las variaciones en las medidas de tendencia central y de dispersión de las concentraciones de adiponectina, según el estado nutricional-antropométrico (normopeso, sobrepeso u obesidad) y de la presencia o no de RI de los adultos evaluados.
Índices de riesgo cardiometabólico. Puntos de corte.
• Índice CT/HDL: ≥ 5,0 (McNamara, 1990) • Índice LDL/HDL: ≥ 3,5 (McNamara, 1990) • Índice TG/HDL: ≥ 3,0 (McLaughlin, 2003)